安徽省病原微生物实验室备案登记表2 131页

'固镇县中医院细菌室管理及操作指导书安徽省病原微生物实验室备案登记表（1）实验室名称：病原微生物实验室生物安全防护等级名称：二级设立单位：安徽省固镇县中医院联系电话：6026800　6026843报送日期：2016-08-16安徽省卫生厅制130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书填表须知1．使用黑色墨水笔填写或计算机打印，字迹清楚，不得涂改。2．本表格填写一式三份，同时附电子版。3．无实验室设立单位盖章和法人签名无效。4、有关栏目空格纸面不敷，可另附页。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书一、实验室概况实验室名称病原微生物实验室设立单位名称安徽省固镇县中医院单位地址安徽省固镇县城关谷阳路488号邮政编码233700单位电话0552-6012739传真0552-6012739实验室负责人孙重兰性别女出生年月1963.03职称主管检验师学历中专专业检验医学毕业院校　　安徽省巢湖卫生学校联系电话0552-6026843E-mail工作部门固镇县中医院检验科实验室工作经历1981年至1995从事临床检验工作1995至今从事检验管理及微生物检验工作培训经历2007年蚌埠市爱滋病检测学习班2008年参加蚌埠市生物安全培训130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书二、实验室基本情况防护级别面积（M2）工作人员数量联系人联系电话二级302孙重岚6026843三、实验室管理情况1．生物安全管理委员会有√无□负责人姓名年龄学历专业职务宋伟42本科临床医学院长成员姓名年龄学历专业职务李洪湘50本科中医学副院长张拥军41大专检验医学医务科长孙重岚　52中专检验医学科主任曹敏41中专检验医学殷现军孟祥红张同娥2．管理体系文件有√无□3．上岗证制度有无√4．拟开展的第一类、第二类病原微生物实验活动的危害风险评估：有　无√5．实验室突发事件应急预案：有√　无□注：1．如成立有生物安全管理委员会（或领导小组），请附成立文件；2．如有管理体系文件，在填写本表的同时，附上相关文件；3．如实行上岗证制度，请附上岗证式样；4．如已进行了相关活动的危害风险评估，请附评估报告；130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书5．实验室突发事件应急预案如未包含在管理手册中，则需附预案。四、实验室主要生物安全防护设备（生物安全柜、高压灭菌器等）序号名称规格型号生产厂家购置日期唯一性编号1生物安全柜BSC-1100IIB2济南鑫贝2008105G12932立式灭菌器LMQ.C型山东新华2008200677663移动式紫外线灯QSDC-11常州2008970811五、实验室主要检测设备序号名称规格型号生产厂家购置日期唯一性编号1电热恒温培养箱HH.B11.500-BS上海跃进1992.12电热干燥箱DFG801湖北黄石1992细菌鉴定仪DL-96Ⅲ深圳2000130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书六、实验室主要实验活动实验活动名称涉及的病原微生物危害程度分类活动类别工作性质样本检测霍乱弧菌f第二类BSL-2检测样本检测鲁氏不动杆菌第三类BSL-2检测样本检测鲍氏不动杆菌第三类BSL-2检测样本检测伴放线放线杆菌第三类BSL-2检测样本检测鲍氏不动杆菌第三类BSL-2检测样本检测龟分枝杆菌第三类BSL-2检测样本检测伴放线放线杆菌第三类BSL-2检测样本检测马杜拉放线菌第三类BSL-2检测样本检测白乐杰马杜拉放线菌第三类BSL-2检测样本检测酿(化)脓放线菌第三类BSL-2检测样本检测嗜水气单胞菌/杜氏气单胞菌/嗜水变形菌第三类BSL-2检测样本检测斑点气单胞菌第三类BSL-2检测样本检测阿菲波菌属第三类BSL-2检测样本检测自养无枝酸菌第三类BSL-2检测样本检测丙酸蛛菌/丙酸蛛网菌第三类BSL-2检测样本检测马隐秘杆菌第三类BSL-2检测样本检测溶血隐秘杆菌第三类BSL-2检测样本检测蜡样芽胞杆菌第三类BSL-2检测130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书样本检测脆弱拟杆菌第三类BSL-2检测样本检测杆状巴尔通体第三类BSL-2检测样本检测伊丽莎白巴尔通体第三类BSL-2检测样本检测汉氏巴尔通体第三类BSL-2检测样本检测五日热巴尔通体第三类BSL-2检测样本检测文氏巴尔通体第三类BSL-2检测样本检测支气管炎博德特菌第三类BSL-2检测样本检测副百日咳博德特菌第三类BSL-2检测样本检测百日咳博德特菌第三类BSL-2检测样本检测伯氏疏螺旋体第三类BSL-2检测样本检测达氏疏螺旋体第三类BSL-2检测样本检测回归热疏螺旋体第三类BSL-2检测样本检测奋森疏螺旋体第三类BSL-2检测样本检测肉芽肿鞘杆菌第三类BSL-2检测样本检测空肠弯曲菌第三类BSL-2检测样本检测唾液弯曲菌第三类BSL-2检测样本检测胎儿弯曲菌第三类BSL-2检测样本检测大肠弯曲菌第三类BSL-2检测样本检测肺炎衣原体第三类BSL-2检测样本检测鹦鹉热衣原体第三类BSL-2检测样本检测沙眼衣原体第三类BSL-2检测130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书样本检测肉毒梭菌第三类BSL-2检测样本检测艰难梭菌第三类BSL-2检测样本检测马梭菌第三类BSL-2检测样本检测溶血梭菌第三类BSL-2检测样本检测溶组织梭菌第三类BSL-2检测样本检测诺氏梭菌第三类BSL-2检测样本检测产气荚膜梭菌第三类BSL-2检测样本检测索氏梭菌第三类BSL-2检测样本检测破伤风梭菌第三类BSL-2检测样本检测牛棒杆菌第三类BSL-2检测样本检测白喉棒杆菌第三类BSL-2检测样本检测极小棒杆菌第三类BSL-2检测样本检测假结核棒杆菌第三类BSL-2检测样本检测溃疡棒杆菌第三类BSL-2检测样本检测刚果嗜皮菌第三类BSL-2检测样本检测迟钝爱德华菌第三类BSL-2检测样本检测啮蚀艾肯菌第三类BSL-2检测样本检测产气肠杆菌/阴沟肠杆菌第三类BSL-2检测样本检测肠杆菌属第三类BSL-2检测样本检测腺热埃里希体第三类BSL-2检测样本检测猪红斑丹毒丝菌第三类BSL-2检测130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书样本检测丹毒丝菌属第三类BSL-2检测样本检测致病性大肠埃希菌第三类BSL-2检测样本检测脑膜炎黄杆菌第三类BSL-2检测样本检测博兹曼荧光杆菌第三类BSL-2检测样本检测新凶手弗朗西丝菌第三类BSL-2检测样本检测坏疽梭杆菌第三类BSL-2检测样本检测阴道加德纳菌第三类BSL-2检测样本检测杜氏嗜血菌第三类BSL-2检测样本检测流感嗜血杆菌第三类BSL-2检测样本检测幽门螺杆菌第三类BSL-2检测样本检测金氏金氏菌第三类BSL-2检测样本检测产酸克雷伯菌第三类BSL-2检测样本检测肺炎克雷伯菌第三类BSL-2检测样本检测嗜肺军团菌第三类BSL-2检测样本检测伊氏李斯特菌第三类BSL-2检测样本检测单核细胞增生李斯特菌第三类BSL-2检测样本检测问号钩端螺旋体第三类BSL-2检测样本检测多态小小菌第三类BSL-2检测样本检测摩氏摩根菌第三类BSL-2检测样本检测非洲分枝杆菌第三类BSL-2检测样本检测亚洲分枝杆菌第三类BSL-2检测130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书样本检测溃疡分枝杆菌第三类BSL-2检测样本检测肺炎支原体第三类BSL-2检测样本检测淋病奈瑟菌第三类BSL-2检测样本检测脑膜炎奈瑟菌第三类BSL-2检测样本检测星状诺卡菌第三类BSL-2检测样本检测巴西诺卡菌第三类BSL-2检测样本检测肉色诺卡菌第三类BSL-2检测样本检测皮诺卡菌第三类BSL-2检测样本检测新星诺卡菌第三类BSL-2检测样本检测豚鼠耳炎诺卡菌第三类BSL-2检测样本检测南非诺卡菌第三类BSL-2检测样本检测多杀巴斯德菌第三类BSL-2检测样本检测侵肺巴斯德菌第三类BSL-2检测样本检测厌氧消化链球菌第三类BSL-2检测样本检测类志贺气单胞菌第三类BSL-2检测样本检测普雷沃菌属第三类BSL-2检测样本检测奇异变形菌第三类BSL-2检测样本检测彭氏变形菌第三类BSL-2检测样本检测普通变形菌第三类BSL-2检测样本检测产碱普罗威登斯菌第三类BSL-2检测样本检测雷氏普罗威登斯菌第三类BSL-2检测130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书样本检测铜绿假单胞菌第三类BSL-2检测样本检测马红球菌第三类BSL-2检测样本检测亚利桑那沙门菌第三类BSL-2检测样本检测猪霍乱沙门菌第三类BSL-2检测样本检测肠沙门菌第三类BSL-2检测样本检测火鸡沙门菌第三类BSL-2检测样本检测甲、乙、丙型副伤寒沙门菌第三类BSL-2检测样本检测伤寒沙门菌第三类BSL-2检测样本检测鼠伤寒沙门菌第三类BSL-2检测样本检测小蛇菌属第三类BSL-2检测样本检测液化沙雷菌第三类BSL-2检测样本检测粘质沙雷菌第三类BSL-2检测样本检测志贺菌属第三类BSL-2检测样本检测金黄色葡萄球菌第三类BSL-2检测样本检测表皮葡萄球菌第三类BSL-2检测样本检测念珠状链杆菌第三类BSL-2检测样本检测肺炎链球菌第三类BSL-2检测样本检测化脓链球菌第三类BSL-2检测1．危害程度分类按所涉及病原微生物在“人间传染的病原微生物名录”中的分类填写2．活动类别按“人间传染的病原微生物名录”中病毒5类、细菌等4类进行分类填写，如艾滋病毒抗原检测的活动类别则为未经培养的感染性材料的操作。3．工作性质按检测、科研、教学、生产（包括制备）等分类填写130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书七、实验室生物安全管理体系文件1、生物安全管理手册有√无□文件总数：8序号文件名1批准发布令2手册的管理3手册修订页4实验室位置图5人员培训管理程序6设施和环境管理程序7微生物室安全防护程序8生物安全委员会文件130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书1、批准令本手册依据有关规定而制定，它阐述了固镇中医院检验科的质量方针和质量目标，并对中医医院检验科的质量管理体系提出了具体要求，适用于固镇中医检验科全面质量管理工作。本手册第A版已经审定，现予批准发布，并于批准之日起生效。批准人签字：宋伟批准人职务：固镇中医院院长批准日期：2012年10月08日130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2质量手册管理2.1总则对《质量手册》运行进行控制并保持其有效性，并明确管理者和持有者的责任，从而保证质量管理体系的持续适应性和有效性。本章描述了《质量手册》的编写、审核、批准、发布、改版等内容。2.2职责质量负责人组织《质量手册》的编写工作，并负责保持其有效性。2.3手册的编写﹑审核﹑批准2.3.1《质量手册》由主任授权质量负责人，组织人员，根据ISO15189:2003《医学实验室——质量和能力的专用要求》结合本检验科的实际情况，起草《质量手册》。2.3.2初稿由质量负责人审核后，报主任批准发布实施。2.4手册的发放和回收2.4.1手册的发放手册受控文本由综合管理室根据各部门需要的文件分发数量复印，并在每份文件的批准页面加盖“受控文件”印章后发行，并保持发放与回收记录。发放范围：——主任——技术负责人、质量负责人——各部门负责人——内审员非受控文本发放范围：——国家实验室认可机构——院部及相关科室——主任批准的单位2.4.2手册的回收2.4.1.1手册持有者调离本单位时，应将手册交回综合管理室。2.4.1.2换版手册发放时，应回收旧版手册，需要保留存档或参考的应加盖“作废文件”章，其余进行销毁。2.5手册的修订130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2.5.1质控组应及时收集质量管理体系运行中存在的问题，提出纠正和处理意见，做好记录，报告质量负责人，作为修订手册的依据。2.5.2当需要修订手册时，由质控组提出申请，经质量负责人审核，并报科主任批准后进行。2.5.3手册每年修订一次，一般在管理评审会议前两周内进行，在修改状态栏中注明修改号，在手册修订记录中注明修订版号、章节、修订内容、修订人、批准人和批准日期。2.5.4手册修订后，综合管理组应向受控本持有者发放手册修改页，并进行分发登记。2.6手册的换版2.6.1当出现下列情况之一时，可对《质量手册》提出换版：2.6.1.1质量管理体系运行过程中存在较大问题；2.6.1.2组织机构进行重大调整；2.6.1.3质量管理体系建立依据的质量标准换版；2.6.1.4当一个版本修订页数超过总页数的三分之二；2.6.2换版手册的编写、审核、批准、发布程序同初版。2.7手册受控文本持有者的责任2.7.1手册受控文本持有者应严格按照本手册的规定执行，及时反馈质量管理体系运行中存在的问题。2.7.2手册受控文本持有者应妥善保管本手册，不得以任何形式外借。2.8手册的宣贯《质量手册》一经批准发布，即成为本检验科全体员工必须遵守的纲领性文件。质量负责人组织手册的宣贯工作，保证全体员工理解并执行。2.9手册的解释本手册的解释权归本检验科主任。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期1固中医（2015）15人员调整宋伟2015.1523456789101112131415161718192021修订页130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书4、实验室位置图130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书5、人员培训及考核管理程序1目的有计划地对质量体系的相关人员进行培训和考核，使之技术水平和业务能力不断提高。2范围适用于与质量活动有关的所有人员的培训和考核管理。3职责3.1科主任主持本科人员的配备与考核，批准《人员培训年度计划》，安排人员的外部培训。3.2技术负责人负责《人员培训年度计划》的编制，并组织实施。3.3文控员负责建立和管理人员培训记录、人员档案。4工作程序4.1科主任进行人员配备及资格确认（1）根据有关规定和检验工作的需要，确定检验科的各岗位设置和任职条件；（2）通过查看有关证书、进行聘用考核、年度工作考核确认每人的任职资格；（3）根据每人的任职资格情况，确定各岗位人员；（4）对新上岗人员根据岗位任职条件对其进行岗位资格确认；（5）当岗位或岗位任职条件发生了变化，应经培训后，重新进行考核确认。4.2人员培训4.2.1培训计划(1)根据各岗位任职条件的要求，科主任拟定各层次工作人员的继续教育计划。(2)技术负责人编制《人员培训年度计划》，交科主任批准后实施。(3)未列入年度计划的，技术负责人提出临时培训申请，填写《培训申请表》，经检验科主任批准后实施。4.2.2培训方式(1)安排外出专业学习、学术交流会、进修的培训。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书(2)医院内举办专项讲座、专项培训或专业学术报告会。(3)科内举办的业务学习活动。4.2.3培训内容(1)根据人员的岗位，安排相应的专业知识培训。此外，还包括下列培训内容：实验室认可、标准化知识、卫生法律、法规、实验室安全知识。（2）实习、进修、新上岗人员的培训内容还包括实验室生物安全防护、内务管理规定、医疗废物处理规定。4.3人员资格和考核4.3.1检验人员必须具备规定的相关学历和取得相应的专业技术任职资格。4.3.2人员上岗前,科主任组织对聘用人员进行必要的应知、应会科目培训和考试，考试合格后准予上岗。4.3.3贵重、精密仪器设备操作资格考核：凡使用贵重、精密仪器设备，工作人员以前未使用过该仪器时，由检验科主任组织参加仪器设备供应商举办的使用培训并参加仪器设备的验收和安装调试，或以其它方式进行培训，经检验科主任组织相关组室考核合格后，方可被授权使用该仪器。4.4培训记录与个人技术档案4.4.1员工的培训记录由科主任对培训的有效性评价后归档。4.4.2文控员负责培训记录和个人技术档案的管理，负责填写和管理《培训记录表》、《员工培训履历表》、《人员档案卡》。4.4.3《培训记录表》内容：(1)培训时间、地点、主题等。(2)参加培训人员名单。(3)培训内容摘要。(4)组织部门效果评价(5)培训后检验科主任对其能力的确认。4.4.4《员工培训履历表》是每位员工所接受过的培训的历史记录，内容包括：(1)培训日期；(2)培训目的；130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书(3)培训内容；(4)培训结果。4.4.5《人员档案卡》内容包括：(1)学历证明、证书和执照。(2)专业技术资格证书。(3)主要工作经历。(4)继续教育及成绩记录(5)主要专业技术业绩、成果、发表的论文、著作。(6)重大质量事故的记录。(7)以前用人单位的评语。(8)检验科主任对其能力、资格的确认记录及相关授权记录。(9)工作人员健康状况的记录，包括接触职业危害的记录和免疫接种的情况，该项资料只能由检验科主任查看。4.5培训效果的评审每次培训的效果由培训的组织方或科主任进行评价；新技术的应用，新项目开展，对项目承担人的工作能力由科主任组织质量负责人、技术负责人进行评价。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书6、设施和环境管理程序1目的为了保证检验结果的正确性和可靠性，对可能影响检验工作质量的环境因素和设施进行有效的监控。2范围2.1对使用仪器设备的环境建立、控制与维护；2.2对标本贮存的环境建立、控制与维护；2.3对消耗品贮存的环境建立、控制与维护；2.4按照检验方法要求对检验环境的建立、控制与维护；2.5对偏离控制目标时实施的措施2.6对安全应急设施的管理与维护。职责3.1检验科主任负责设施和环境条件的配置工作。3.2技术负责人（1）负责组织制定各项环境控制目标；（2）负责建立各监控部位的监控手段和记录措施。3.3各专业组长（1）根据工作需要提出设施和环境配置的要求，并对设施和环境进行日常管理。（2）负责本室各种安全设施（消防灭火器材等）的定期检查和日常管理，保证随时可供使用。（3）负责划分区域内的环境卫生，保持实验场所的清洁、整齐、安静。3.4工作人员负责对设施和环境进行日常监控，保证设施和环境符合要求，并记录设施和环境的监控参数。4工作程序4.1设施和环境要求的来源：130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书4.1.1根据仪器设备使用的要求和检验标准方法的要求和标本的要求，建立环境控制目标。4.1.2检验过程中使用的消耗性材料和试剂的贮存对环境条件有要求时，应有措施保证予以满足。4.1.3标本的收发、制备、检验和贮存环境应符合标准规定或样品特定的要求，详见《标本管理程序》。4.1.4实验室供电系统应与仪器设备使用电量相匹配，并具有良好的接地线，以保证用电安全。4.1.5健康环保方面的法律法规要求，如实验室生物安全、医疗废物处置等。4.2设施与环境要求的配置4.2.1技术负责人根据需要，提出实验室设计或改造方案，以及设施和环境配置要求，经科主任审核，报院领导批准。如需采购，按《采购控制程序》实施。4.2.2技术负责人在指导建立检验环境、标本保管环境、消耗品贮存环境控制目标时，实验室内仪器布置在遵循不能相互影响的同时，还应考虑使用的方便性。4.2.3用于检验环境用的设备与检验用仪器一同编入量值溯源计划执行周期检定。检定执行《量值溯源管理程序》。4.3监控与维持4.3.1若环境条件对检验结果和设备精度有影响，应按影响程度采取不同的监控措施，必要时配备相应的监控与记录设备。具体措施和配备要求由使用部门提出，检验科主任批准后实施。4.3.2对设备使用有环境要求时，应在“设备使用记录”中记录清楚。对环境条件有要求的检验项目，应在检验过程中做好环境监控记录，并在原始记录上反映出来4.3.3质量监督员在履行监督职责时，发现在检验过程中环境条件或辅助设施不符合要求，应报告技术负责人。按《纠正措施控制程序》实施。4.3.4本科特殊工作区域的要求4.3.4.1使用前，要对特殊工作区域的性能和条件进行测试和验收，保证其功能和技术符合有关要求。4.3.4.2要对进入和使用特殊工作区域制定有关规定，进行控制，以保证检验工作质量和检验人员的健康、人身安全和设备安全。4.4检验工作安全4.4.1130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书为保障检验工作过程中的人身和仪器设备安全，各专业组应严格遵守《实验室安全管理规定》和《危险品管理规定》。4.4.2各检验场所均应配备相应的消防设施并放置在醒目易取的位置。在必要的区域配备防盗和安全装置。4.5检验科内务管理4.5.1各部门应做好内务管理，使检验室内保持清洁、整齐、标识清楚。不得在检验室内进行与检验无关的活动，存放与检验无关的物品。具体执行《实验室内务管理规定》4.6各检验室在检验过程中产生的废物按《医疗废物处置规定》执行。4.7实验室为受控区域，应有明显的限制进入的标识，非本检验科工作人员进入时，需填写《外来人员登记表》经科主任批准后，由相关专业组人员陪同进入特定区域。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书7、微生物室安全防护程序目的：保证实验室.实验人员和外部环境的安全。1.熟悉各种仪器.设备的性能和使用方法，按规定进行操作；2.加热易燃.易爆材料时，工作人员切忽随意离开，易燃品加热绝不能用明火；3.要定期检查电器设备，防止因电火花.短路.超负荷引起线路起火；4.工作人员进入无菌室，应更换一次性无菌衣.帽.口罩.手套等；用过的一次性物品放入专门污染袋，送医院集中处理。5.每日实验室实验完毕进行紫外线消毒1小时，台面用1%施康消毒液擦拭，仪器表面用75%乙醇擦拭，还有其他物品的消毒清洁，消毒液每日更换，并作好记录；6.临床标本.菌种等能引起感染或环境污染的物品妥善放置，处理标本时应穿工作服.戴手套，切忽接触皮肤及实验室清洁区。如手或其他部位皮肤沾上标本和菌种，立即用肥皂冲洗干净，并用75%酒精消毒。7.接种环或接种针用后切忽摆在实验台，应立即火焰灭菌；8.废弃的细菌标本和菌种放在加盖的桶内，121℃高压消毒，交医院集中处理；9.接触标本的吸管.吸嘴及涂制标本的玻片和废弃标本（如痰液.穿刺液.尿液等）不得随意丢弃，立即放入1%施康消毒液中。浸泡6小时后，交医院集中处理。10.在实验过程中，病人标本或试剂不慎溅入眼睛内，应立即用清水冲洗。11.实验过程中被针具等锐器刺破时，应立即脱下手套，尽量挤压伤口，使血流出，然后用碘酒.酒精消毒，并进行预防补救措施和严格医学观察，以免造成感染。12.在实验室中禁止做任何方式接触口腔的动作；13.实验完毕离开，应脱下所有该实验区个人防护装备，一定用肥皂规范流水洗手。必要时用消毒液处理。14.遇有意外事故应立即报告科室负责人，当事人应立即注射相关疫苗或进行预防性治疗，并进行医学观察，严重者应报告院部技术负责人。15.离开实验室，检查水，电，门窗，确保安全。16.空气消毒记录表----每日执行记录总之，实验室的生物防护措施，从技术角度讲有三大环节：供应室的灭菌保证，实验室的生物防护措施.相应规章制度和实验人员的防护意识，实验室废弃物的处理。应严格遵守各种相关规定和制度，提高实验室整体生物防护水平130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书固中医〔2015〕15号关于调整实验室生物安全委员会成员的通知各科室：为加强病原微生物实验室生物安全管理，根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《医疗废物管理条例》等相关法律法规的要求，经院部研究决定，现对实验室生物安全委员会成员做出调整，新组成的实验室生物安全委员会成员名单如下：主任：宋伟副主任：李洪湘成员：张拥军、张同娥、孟祥红、殷献军、孙重兰、曹敏特此通知。固镇县中医院二○一五年九月六日130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2、生物安全手册有√无□文件总数：10序号文件名一生物安全手册总则二生物安全组织结构三实验室生物安全管理制度四实验室生物安全要求五实验室防火安全制度六实验室用电安全制度七实验室化学危险品使用准则八微生物实验室生物安全准则九实验室消毒及废弃物处理制度十实验室突发事件紧急预案130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书一生物安全手册总则目的为确保实验室全体员工熟悉生物安全法律、法规，建立生物安全意识，保证相关工作人员掌握开展工作必需的生物安全知识和技术，避免实验室感染，防止实验室事故，特制定此手册。依据《病原微生物实验室生物安全管理条例》《医疗废物管理条例》《实验室生物安全通用要求》《可感染人类的高致病性病原微生物菌毒种或样本运输管理规定》《实验室生物安全手册》《生物安全实验室建筑技术规范》适用范围适用于进入检验科实验室所有工作人员。修订国家及卫生部门涉及生物安全的法律法规发生修订更改时，本手册应相应作出修订。二生物安全组织结构检验科生物安全管理组织结构及职责1、医院成立生物安全委员会，全面负责生物安全工作。责任人：医院法人：宋伟成员：张用军2、检验科成立生物安全二级管理组织。一级生物安全管理：实验室负责人曹敏二级生物安全管理：检验科主任孙重兰曹敏1)由科主任全面负责科内生物安全管理文件的制定。2)督促、检查各个专业组遵守、落实生物安全情况。3)设立生物安全监督员一名：陈冬梅4)组织全科定期、不定期的学习生物安全的相关法律、法规。1)负责本专业组生物安全工作。2)全面落实生物安全管理有关本组的相关制度。3)对本组的生物安全工作要有管理、有检查、有落实记录。4)组内监督员：由本专业组长兼任本专业组的生物安全监督员。5)全面传达相关会议内容，在本组内要达到知晓率100%。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书其他组员职责：1)认真执行有关生物安全的各项法规、制度。2)服从本组长的工作安排。3)行为监督员：每一位工作人员均是行为监督员。均具有规范、遵守生物安全管理规范的责任和义务，不但要规范自己的行为，还具有随时纠正不符合规范的行为的义务。3、相关文件1)国务院《病原微生物实验室生物安全管理条例》2)国务院《医疗废物管理条例》及卫生部《医疗卫生机构医疗废物管理办法》3)《实验室生物安全通用要求》4)《生物安全试验室建筑技术规范》5)《医学实验室安全要求》6)《可感染人类的稿致病性病原微生物（毒）种或样本运输管理规定》7)《人间传染病的病原微生物名录》8)《人间传染病的病原微生物实验室和实验活动生物安全审批管理办法》9)《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》10)WHO《实验室生物安全手册》第三版（2004）三实验室生物安全管理制度1、准入制度2、设施设备检测维护制度3、健康监护制度4、生物安全自查制度5、实验室资料档案管理制度6、生物安全管理及实验室人员的培训制度7、意外事件处理及报告制度8、实验室安全保卫制度130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书1、实验室人员准入制度1)目的明确实验室人员的资格要求，避免不符合要求的人员进出实验室或承担相关工作造成生物安全事故。2)范围适用于进入检验科实验室所有工作人员。3)职责3.1检验科生物安全负责人负责实验室人员准入工作的监督和实施。3.2进入检验科实验室所有人员所有必须以本规定规范自己的工作。4)制度要求4.1所有实验室工作人员必须在接受相关生物安全知识、法规制度培训并考试合格。4.2从事实验室工作人员必须进行上岗前体检，由单位生物安全领导小组组织实施。体检指标除常规项目外还应包括与准备从事工作有关的特异性抗原、抗体检测。4.3从事实验室技术人员必须具备相关专业教育经历，相应的专业技术知识及工作经验，熟练掌握自己工作范围的技术标准、方法和设备技术性能。4.4从事实验室技术人员应熟练掌握与岗位工作有关的检验方法和标准操作规程，能独立进行检验和结果处理，分析和解决检验工作中的一般技术问题，有效保证所承担环节的工作质量。4.5从事实验室技术人员应熟练掌握常规消毒原则和技术，掌握意外事件和生物安全事故的应急处置原则和上报程序。4.6实验室人员在下列情况进入实验室特殊工作区需经实验室负责人同意：4.6.1身体出现开放性损伤；4.6.2患发热性疾病；4.6.3呼吸道感染或其它导致抵抗力下降的情况；4.6.4正在使用免疫抑制剂或免疫耐受；4.6.5妊娠；130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书4.7实验活动辅助人员；（废气物管理人员、洗刷人员等）应掌握责任区内生物安全基本情况，了解所从事工作的生物安全风险，接受与所承担职责有关的生物安全知识和技术，个体防护方法等内容的培训，熟悉岗位所需消毒知识和技术，了解意外事件和生物安全事故的应急处置原则和上报程序。4.8外单位来检验科参观、学习、工作人员进入实验室控制区域应有相关领导批准并遵守实验室的生物安全相关规章制度。进入实验室的一般申请由实验室负责人的批准，一个月及以上的准入需到医务处备案。2、设施/设备监测，检测和维护制度1)目的为保证实验室工作人员对各类检验仪器的安全使用，维护检验工作的正常运转，确保检验工作的顺利进行。2)范围适用于检验科内的各种检验仪器。3)职责3.1本院检验科人员必须以本制度规范自己的工作。3.2检验科负责人负责检查和监督。4)制度要求4.1检验科内各种设施要符合相关规定，所使用的所有仪器应经过安全使用认证。检验科供电线路中必须安装断路器和漏电保护器。4.2科内大型仪器、设备、精密仪器由专人负责保管、登记、建档，仪器设备的使用者，需经专业技术培训4.3科内仪器设备应在检定和校准的有效期内使用，并按照检定周期的要求进行自检或强检，对使用频率高的仪器按规定在检定周期内进行期间核查。4.4主要仪器设备应建立使用记录，有操作规程，注意事项，相关技术参数和维护记录，并置于显见易读的位置。仪器使用者必须认真遵守操作规程，并做好仪器设备使用记录，定期维护仪器设备。4.5仪器设备所用的电源，必须满足仪器设备的供电要求。用电仪器设备必须安全接地。电源插座不得超栽使用。仪器设备在使用过程中出现断路保护时，必须在查明断电原因后，再接通电源。不准使用有用电安全隐患的设备（如漏电、电源插座破损、接地不良、绝缘不好等）。4.6仪器设备在使用过程中发生异常，随时记录在仪器随机档案上，维修必须由专业人员进行，并做维修记录。4.7仪器设备使用结束后，必须按日常保养进行检查清理，保持良好状态。4.8所有仪器设备应加贴唯一性标识及准用、限用、禁用标志。4.9长期用电设备（如冰箱、培养箱）应定期检查，并记录运行情况。4.10因故障或操作失误可能产生某种危害的仪器设备，必须配备相应的安全防护装置。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书4.11使用直接接触污染物的仪器设备前，必须确认相应的安全防护装置能正常启用。实验工作完成后，必须对接触污染物的仪器设备进行相应的清洗、消毒。4.12科内应指定专人对安全设备和实验设施/设备维护管理，保证其处于完好工作状态。仪器设备较长时间不使用时，应定期通电、除湿。有记录，保持设备清洁干燥。（例如每年应对生物安全柜进行一次常规检测，须特别关注高效过滤器。定期对离心机的离心桶和转子进行检查）。4.13高压灭菌器使用时，定期进行生物学指示剂检测。4.14冰箱应定期化冰、清洗，发现问题及时维修。实验区冰箱内禁止放个人物品及与实验无关的的物品。4.15所有仪器设备在维修和维护保养前运出实验室前必须进行消毒处理。3、健康医疗监护制度1)目的规范实验室人员的健康监护工作，预防、控制实验室感染。2)范围适用于检验科实验室所有工作人员。3)职责检验科负责人负责实验室人员健康监护工作的组织实施。4)制度要求4.1实验室人员体检制度4.1.1对新从事实验室技术人员必须进行的上岗前体检，体检指标除常规项目外还应包括与准备从事工作有关的特异性抗原、抗体检测。不符合岗位健康要求不得从事相关工作。4.1.2实验室技术人员要在身体状况良好的情况下从事相关工作，发生发热、呼吸道感染、开放性损伤、怀孕等或因工作造成疲劳状态免疫耐受及使用免疫抑制剂等情况时，需由实验室负责人同意从事相关工作，但不宜再从事高致病性病原微生物的相关工作。4.1.3检验科负责人在批准外来学习、工作人员进入实验室前应了解其健康状况，必要是可先行安排进行临时性体检，档案保留。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书4.2实验室人员免疫预防制度4.2.1实验室人员应根据岗位需要进行免疫接种和预防性服药，免疫接种时，应考虑适应症、禁忌症、过敏反映等情况并记入健康监护档案。4.2.2检验科应制定年度免疫接种计划，报主管领导批准后由检验科组织实施。免疫接种情况应记入健康监护档案。4.2.3检验科实验室可根据工作开展情况对各类人员进行必要的临时性免疫接种和预防性服药，并记入健康监护档案。4.2.4对体检结果异常的人员应随时进行必要的免疫接种或采取其他预防手段，并记入健康监护档案。4.2.5发生实验室意外事件或生物安全事故后应根据需要进行必要的应急免疫接种或预防性服药，并记入健康监护档案。4.3发生事故后的人员管理4.3.1发生实验室意外事件或一般生物安全事故后由医务科/检验科确定相关人员救治、免疫接种和医学观察方案，发现异常，由医务科/人事科/检验科决定人员临时性或永久性调离岗位。临时调离岗位的人员在重新上岗前必须进行体检，体检结果达到岗位健康要求后由医务科/检验科批准其上岗。4.3.2发生重大生物安全事故后由医务科/检验科制定并上报相关人员救治、免疫接种和医学观察方案，同时采取有效措施尽量控制人员感染范围，主管领导对方案进行审批。医学观察发现异常，由医务科/人事科/检验科决定人员临时性或永久性调离岗位，临时调离岗位的人员在重新上岗前必须进行体检，体检结果达到岗位健康要求后由医务科/检验科批准其上岗。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书4、生物安全实验室安全自查制度为确保实验室生物安全制度、措施落实到位，避免生物安全事故，特制订本制度。1)主任每年至少组织一次生物安全全面检查，检查内容包括：生物安全管理体系运行情况、生物安全管理制度是否完善、是否落实、实验室设施、设备和人员的状态、应急装备、报警体系和撤离程序功能及状态是否正常、可燃易燃性、传染性、放射性以及有毒物质的防护、控制情况、废物处置情况等。2)科室负责人负责实验室生物安全的全面管理，检查、督促生物安全监督员工作，每季度进行科室生物安全工作检查，检查内容包括：生物安全监督员工作记录、菌（毒）株、样本的运输、保存、使用、销毁情况、生物安全实验室的消毒和灭菌情况以及感染性废物的处理情况、生物安全设备的运行、维护情况、防护物资的储备情况。3)生物安全监督员负责实验室日常工作的生物安全监督、检查，内容包括生物安全管理制度执行情况、个人防护要求执行情况、实验室人员的生物安全操作是否规范等，及时发现、纠正违规行为，避免生物安全事故发生。4)对于检查中发现的问题及时纠正，必要时制定纠正措施或实施整改，并进行跟踪验证。5)按照资料、档案管理制度保存所有检查记录，及时归档。6)将自查发现的问题作为实验室生物安全培训计划解决。5、生物安全实验室资料档案管理制度为确保生物安全实验室各类活动记录、资料按要求归档、保存，特制订本制度。1)与生物安全相关的各类活动的记录均应按照本制度执行。2)生物安全实验室的记录、资料保存不得少于20年。3)生物安全实验室记录、资料应至少包括：生物安全手册、生物安全管理制度、人员培训考核记录、生物安全检查记录、健康监护档案、事故报告、分析处理记录、废物处置记录、实验记录、菌（毒）种和样本收集、运输、保存、领用、销毁等记录、生物危害评估记录、生物安全柜现场检测记录、消毒、灭菌效果监测记录等。4)生物安全实验室资料档案原则上不外借。5)因工作需要复制档案资料者需经批准。6)超过保存期限的档案资料、记录，应通过生物安全领导小组的讨论、鉴定，批准是否实施销毁，销毁应至少两人实施，做好销毁记录。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书6、生物安全实验室人员培训、考核制度为确保实验室全体员工熟悉生物安全法律、法规，建立生物安全意识，保证相关工作人员掌握开展工作必需的生物安全知识和技术，避免实验室感染，防止实验室事故，特制订本制度。1)制定年度生物安全培训、考核计划,报生物安全领导小组批准后实施。2)培训内容：生物安全相关法律、法规、办法、标准、本实验室生物安全手册、生物安全管理制度、应急预案、紧急事件的上报和处置程序、生物安全风险评估、生物安全操作规范、仪器设备的使用、保养、维护、个人防护用品的正确使用、菌（毒）株及样本的收集、运输、保藏、使用、销毁、实验室的消毒与灭菌、感染性废物的处置、急救等。3)每年组织全员（包括实验室管理人员、技术人员、样本运送人员、保洁员等）的生物安全培训、考核。4)针对不同的工作岗位，在全员培训的基础上，组织开展专项生物安全培训。5)培训应该由取得北京地区实验室生物安全师资培训合格证的人员进行。6)培训后应对参加培训的人员进行考核，考核形式可采取多样化，如笔试、口试、实操等。7)对考核合格的工作人员颁发相关岗位的上岗证。8)建立并保存生物安全工作人员的培训、考核档案。9)做好生物安全培训需求和效果的评估工作，为制定年度培训、考核计划提供依据。10)对新上岗、转岗的员工进行生物安全相关知识、生物安全手册等的培训，明确所从事工作的生物安全风险。11)进入实验室的外单位人员（包括进修、实习等工作人员）的由所在科室，根据所从事工作的生物安全风险进行必要的生物安全培训，所有工作均在带教教师指导下进行，学习期间不得从事危险性较高的工作。12)当有关部门新颁发、修订生物安全相关法律、法规、规范、标准等，实验室生物安全手册进行修改后应组织开展相关内容的培训和考核。13)按照档案资料管理制度保存与人员培训、考核相关的记录。7、意外事件处理及报告制度1)目的：规定实验室职业暴露处理程序，规范发生职业暴露时处理原则、报告和登记流程。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2)范围：实验室工作人员和涉及处理职业暴露的有关人员。3)职责：3．1实验室操作人员在工作中发生职业暴露须按照本规定进行处理和报告程序；3．2实验室负责人按照规定进行组织和控制职业暴露发生后的控制实施；3．3实验室负责人负责组织试验人员职业暴露处理的培训和考核，并保存有关记录；3．4实验室生物安全检查人员负责督察日常工作中生物安全工作的执行和医学应急样品的检查。4)步骤：4．1实验室发生职业暴露后按照既往进行的该种污染物的生物安全危害度评估结果，快速有效的对意外暴露人员进行紧急医学处置；对污染区域进行有效的控制，最大限度的清除和控制污染物对周围环境的污染和扩散；进行流行病学调查和暴露人员的医学观察等原则和步骤进行处理；4．1．1根据既往进行的生物安全危害度的评估和暴露的程度即时进行现场紧急医学处置，消除或最大程度降低病原微生物对暴露人员的伤害；同时，有效的污染区域进行防控，最大限度的防止污染物对周围人员和环境的污染。4．1．2一般性的小型事故可在紧急医学处置后，要立即向实验室负责人和实验室生物安全领导小组报告事故情况和处理方法，以及时发现处理中的疏漏之处，使处理尽量完善妥当。4．1．3当重大事故发生时，在进行紧急医学处置的同时，要立即向实验室负责人和实验室生物安全领导小组报告情况；实验室负责人和实验室生物安全领导理小组要立即协调现场紧急处理和周围环境污染防控；协调医学专家评估职业暴露的危害性和对暴露人员的伤害程度；对药物可以治疗和预防该污染物感染的，力争在暴露后最短时间内开始预防性用药；留取暴露人员相应的标本备检，并同时进行医学观察。4．1．4评估暴露级别（见下表）4．1．4建立意外事故登记，详细记录事故发生的时间、地点及经过；暴露方式；损伤的具体部位、程度；接触物种类（培养液、血液或其他体液）和含有HIV的情况；处理方法及处理经过（包括赴现场实验室负责人和实验室生物安全领导小组成员以及专家）；是否采用药物预防疗法，若是，则详细记录治疗用药情况、首次用药时间（暴露后几小时或几天）、药物毒副作用情况（包括肝、肾功能化验结果）；定期检测的日期、检测项目和结果。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书4．1．5根据评估结果建议育龄妇女发生职业暴露和职业暴露后和进行预防性用药期间，是否需要避免或终止妊娠。4．1．6记录对暴露现场和周围环境防控污染的方法，实施形式，人员、范围，评估防控处理的效果；总结和评估病原微生物实验室工作程序中是否存在不当，发生暴露人员试验操作等过程是否存在失误，整改措施和实行。4．2意外事故现场处理方法：工作人员发生意外事故时，如针刺损伤、感染性标本溅及体表或口鼻眼内，或污染实验台面等均视为安全事故，应立即进行紧急医学处置(根据事故情况采用相应的处理方法)。根据生物安全危害度和暴露程度，现场初步评估职业暴露危害程度和选择处理方式。一、化学污染1.立即用流动清水冲洗被污染部位。2.立即到急诊室就诊，根据造成污染的化学物质的不同性质用药。3.在发生事件后的48小时内向有关部门汇报（医生报告医务处，护士报告护理部），并报告感染管理科。二、针刺伤1.被血液、体液污染的针头或其他锐器刺伤后，应立即用力捏住受伤部位，向离心方向挤出伤口的血液，不可来回挤压，同时用流动水冲洗伤口；2.用75%酒精或安尔碘消毒伤口，并用防水敷料覆盖；3.意外受伤后必须在48小时内报告有关部门（医生报告医务处，护士报告护理部），并报告感染管理科、领取并填写《医疗锐器伤登记表》，必须在72小时内作HIV、HBV等的基础水平检查；4.可疑被HBV感染的锐器刺伤时，应尽快注射抗乙肝病毒高效价抗体和乙肝疫苗；5.可疑被HCV感染的锐器刺伤时，应尽快于被刺伤后做HCV抗体检查，并于4－6周后检测HCV的RNA；6.可疑被HIV感染的锐器刺伤时，应及时找相关专家就诊，根据专家意见预防性用药，并尽快检测HIV抗体，然后根据专科医生建议行周期性复查（如6周、12周、6个月等）。在跟踪期间，特别是在最初的6－12周，绝大部分感染者会出现症状，因此在此期间必须注意不要献血、捐赠器官及母乳喂养，过性生活时要用避孕套。三、皮肤、粘膜、角膜被污染130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书1.皮肤若意外接触到血液或体液或其他化学物质时，应立即用肥皂和流动水冲洗；2.若患者的血液、体液意外进入眼睛、口腔，立即用大量清水或生理盐水冲洗；3.及时到急诊室就诊，请专科医生诊治；48小时内向有关部门报告（医生报告医务处，护士报告护理部），并报告感染管理科领取并填写相关登记表。四、标本污染1.棉质工作服、衣物有明显污染时，可随时用有效氯500mg/l的消毒液，浸泡30-60分钟，然后冲洗干净。2.各种表面若被明显污染，用1000-2000mg/l有效氯溶液撒于污染表面，并使消毒液浸过污染表面，保持30-60分钟，再擦除，拖把或抹布用后浸于上述消毒液内1小时。3.仪器污染应考虑消毒方法对仪器的损伤，和对检测项目的影响，选用适当的方法。5．支持性文件：5．1病原微生物实验室职业暴露登记表5．2消毒技术规范5．3职业暴露危害评估表8生物安全实验室安全保卫制度为了做好生物安全实验室的管理，做到预防为主，防患于未然，特制定本制度。1)生物安全实验室安全保卫工作实行责任制，并制定应急预案。2)生物安全实验室的实验活动应与其生物安全防护等级相适应。3)非工作人员进入实验室须经实验室工作人员批准。4)菌（毒）株、样本等感染性物质、剧毒物质等实行专人负责，并建立保存清单和领用、销毁记录。当发生上述物质的遗失、被抢等意外情况时，应启动应急预案。5)定期对生物安全实验室高压蒸汽灭菌器进行校验，确保消毒效果、计量检定符合国家压力容器管理的有关规定。6)保证生物安全实验室自动烟雾和热量探测及报警系统的正常运行，确保消防器材位于固定位置并能正常使用。7)生物安全实验室工作人员应定期对重点防火部位、易燃易爆化学品使用情况进行检查，及时消除隐患，并定期进行火灾紧急事件处置的培训和演练。8)实验室内禁止乱拉临时电源线。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书9)定期对实验室电气安全、仪器设备等进行检查，及时发现、排除安全隐患。10)生物安全实验室应配备常用工具。四实验室生物安全要求130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书工作人员和实验室安全的一般要求1.吸烟（1）实验室工作区内绝对禁止吸烟；（2）点燃的香烟是易燃液体的潜在火种；（3）香烟、雪茄或烟斗都是传染细菌和接触毒物的途径。2.食物、饮料及其它（1）实验工作区内不得有食物、饮料及存在“手－口”接触可能的其它物质（2）实验室工作区内的冰箱禁止存放食物。专用存放食物的冰箱应放置在允许进食、喝水的休息区内。3.化妆品实验工作区内禁止使用化妆品进行化妆，但允许并建议经常洗手的实验人员使用护手霜。4.眼睛和面部的防护（1）处理腐蚀性或毒性物质时，须使用安全镜、面罩或其它保护眼睛和面部的防护用品。（2）工作人员在实验室的危险区内不要佩戴隐形眼镜，除非同时使用护目镜或面罩。（3）使用、处理能够通过粘膜和皮肤感染的试剂，或有可能发生试剂溅溢的情况时，必须佩带护目镜、面罩或面具式呼吸器。5.服装和个人防护装备（1）应穿着符合实验室工作需要的服装，工作服应干净、整洁。当工作中有危险物喷溅到身上的可能时，应使用一次性塑料围裙或防渗外罩。有时还需要佩戴其它防护装备如：手套、护目镜、披肩或面罩等。（2）采血员和其他需要接触病员的工作人员，在接触病员时需穿实验服或工作服。（3）个人防护服装应定期更换以保持清洁，遇被危险物品严重污染，则应立即更换。（4）不得在实验室内设值班床，严禁在实验室内住宿。6.鞋在工作区内，应穿舒适、防滑、并能保护整个脚面的鞋。在有可能发生液体溅溢的工作岗位，可加套一次性防渗漏鞋套。帆布鞋可吸收化学物品和有传染性的液体，所以最好穿皮革或其它防渗漏的合成材料的鞋。7.头发和饰物130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书留长发的工作人员应将头发盘在脑后，以防止头发接触到被污染物和避免人体脱屑落入工作区。头发不得垂肩，应与离心机、切片机等正在运转的器械保持一定距离8.胡须蓄有胡须的男性工作人员必须遵守上项（7）的规定。9.洗手实验室工作人员在脱下手套后、离开实验室前、接触患者前后、以及在进食或吸烟前都应该洗手。接触血液、体液或其它污染物时，应立即洗手。10.用口移液所有实验室操作禁止用口液移，应使用助吸器具。11.锐利物品谨慎处理针头、解剖刀、和碎玻璃等锐利物品。使用后的针具不要折断、弯曲、破损、重复使用或用手重装在针管上。一次性注射器上的针头用后不要取下。锐利物品应立即放置在专用锐器盒内，在完全装满之前或48小时之内更换。12.隔离措施接触患者时，实验室工作人员应遵守医院的隔离措施。13.工作环境（1）“清洁”区和“非清洁”区根据实验室的具体工作情况由主任选择并确定“清洁”和“非清洁”工作区，在清洁区和非清洁区之间设“缓冲室”。被指定为“清洁”的区域，则应努力保持清洁，如采取预防措施，防止电话、视频显示器终端、键盘、门柄及其它经常被手或手上的手套触摸的物品的污染，要求工作人员在触摸设备（如计算机键盘及电话的保护罩等）前取下手套，制定仪器设备和工作面的常规消毒和清洁制度和对严重污染的紧急处理措施办法。被指定为“非清洁”的区域，允许戴手套接触所有物品（如电话、门柄、计算机终端和其它物品），所有这些物品的表面都认为是不清洁的。未戴手套的人员如果使用该区域内的电话、计算机终端或其它设备，应该戴上手套，或在使用后立即彻底洗手。检验地带“清洁”和“非清洁”区都应保持整洁。实验台至少应每天清洁、消毒一次，如有必要可以多次清洗、消毒。在处理溅溢的样品或严重污染的工作面时，应戴上手套和其它个人防护装备、使用相应合适的清洁剂清除所有的溅溢物。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书（2冰箱、冷冻柜、水浴和离心机应该定期清洗和消毒（时间由实验室主任来决定），在发生严重污染后应立即进行清洗和消毒。进行清洗、消毒时要戴上手套，穿上工作服或其它合适的防护服。（3）外衣：外衣（实验服、工作服、和围裙）应悬挂在远离散热器、蒸汽管道、供暖装置、以及有明火的地方，不要挂在压缩气瓶或灭火器上，也不要挂在门的玻璃隔板上，妨碍视线。“清洁”的和“非清洁”的个人防护服要分开存放。（4）垃圾处理：每天至少清理垃圾一次。（5）装饰：不得在电灯、灯座或仪器上进行装饰，更不要使用电子装饰物、蜡烛、圣诞树等有引起火灾危险的装饰品。（6）为便于清洁消毒，实验室内不应有织物装饰的用具或椅子。（7）个人物品：实验工作区不得存放个人物品，如钱包、外套、皮靴、咖啡杯、运动服、预包装的食品和药品等。（8）实验室内应配备应急设备，如应急洗眼装置，酒精等消毒用品。（9）实验室应安装非手触式洗手装置。（10）实验室内应安装防蚊蝇装置，应定期投撒灭蟑螂、老鼠的药物。（11）用后的废弃物品：实验工作区内的用后废弃物品存量不要太大。具危险性的液体如酸或碱性液体应放在视平线以下。较大的废弃物容器应靠近地面存放。（12）出口通路：实验室的出口和通道必须保持畅通无阻，不准堆放物品、垃圾、装置、或设备。安全门必须保持畅通，不得堵塞。注意：无论任何时间、何种原因都不得阻塞通往灭火器、火警箱、防火毯、安全淋浴或出口的道路。14.玻璃器具操作玻璃器具时应遵循下述安全规则：（1）不使用破裂或有缺口的玻璃器具。（2）不要用猛力取下玻璃试管上的塞子，粘紧的试管可用刀切开分离。（3）接触过传染性物的玻璃器具，清洗之前，应先行消毒。（4）破裂的玻璃器具和玻璃碎片应丢弃在有专门标记的、单独的、不易刺破的容器里。（5）高热操作玻璃器具时应戴隔热手套。（6）在不影响实验质量的前提下，应尽量减少使用玻璃器具。15.离心机（1）气溶胶：离心过程中应控制气溶胶的产生在最低水平。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书（2）操作：离心机只有在盖好盖板后，才能启动。（3）传染性物品：所有能够产生气溶胶进行播散的生物制品或标本，都应使用密封的离心管，并在盖紧的离心头或转头中进行。（4）为防止气溶胶飞溢，应在离心停止30分钟后打开离心物。（5）清洗：按照消毒隔离制度要求清洗离心机。（6）平衡：离心时应保持合适的平衡，以保证离心的顺利进行。五检验科防火安全制度1.防火（1）隐患的估计和研究在开始临床实验工作之前就应对火灾的隐患进行研究，在实验工作运行的过程中，要经常研究火警的隐患。研究的内容包括：使用化学物品的数量和性质，可能发生的化学反应，以及电器设备的隐患等。哪些操作方法已经改变了，新使用了哪些化学物品，以及在上届消防培训之后增加了哪些新的工作人员。无人值班看守的自动化实验操作。（2）火源隐患常见的火源是明火、加热器件和电火花（电灯开关、电动机、摩擦和静电）。存放易燃气体的场所，应安装防爆灯具和开关，使用专门防爆设计的电器设备。应对电气设备的接地、漏电和墙上插座的接地、极性进行年度检查。易燃性液体的供给量应控制在有效并安全进行实验的最小量。待处理的用过的可燃性液体也应计算在内。安全使用酒精灯，不能在燃烧状态下添加酒精，酒精量不能超过总容量的2/3。禁止用冰箱储存易燃液体。如果确实需要，应存放在专门的防爆冰箱内。冰箱应远离火源。从储藏罐里倒出易燃液体，应在专门的储藏室或通风橱内进行。运送易燃液体时，其金属容器应有接地装置。加热易燃易爆液体（燃点低于94℃）必需在通风橱进行，不能用明火加热。装易燃易爆物的容器应经当地有关消防部门审核批准。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书严禁用明火直接加热有机溶剂，在大量使用有机溶剂时，室内禁止使用明火。存放乙醚的温度不得超过25℃，禁止在冰箱中放乙醚。工作结束随手关闭水源、电源。离开实验室时要检查水、电、门窗，确认安全后方可离开。严禁私用电炉。走廊、楼梯禁止堆放易燃、易爆物品，试验室内禁止吸烟。使用蚊香时要远离衣服、被褥或其他易燃品。2.灭火实验室应配备足够扑灭各种火情并协助全体人员从失火现场及其附近撤离的相应消防设备。（1）灭火器根据上级消防部门的规定配备、摆放灭火器，并根据要求对灭火器进行定期检查维修。*A类灭火器适用于固体可燃物(如纸、木材、塑料)引起的火灾。A类灭火器多数为消防水栓。*B类灭火器适用于汽油和溶剂引起的火灾。B类灭火器多数为二氧化碳或化学干粉，如碳酸氢钠。*C类灭火器适用于电气引起的火灾。所有工作人员都应知道电开关的位置以及切断失火电器电源的方法。（2）动灭火系统应建立年度安全检查，及随时检修、维护的制度。（3）如火灾波及供气管道系统应立即关闭远端阀门以切断燃气来源。如果无法做到这点或燃气是来自储气瓶时，则应立即从房间内撤离。（4）遇衣服着火时可选用防火毯，但防火毯并非必备的灭火工具。使用人员应受过训练，懂得站立时不能使用防火毯，在衣服着火后使用防火毯时立即采取“停、倒、滚”动作。从严重火情区撤离时，防火毯可用作个人防护装备。备有防火毯的实验室，防火毯应放在远离出口通道的地方。3.消防训练（1）应对实验室工作人员进行防火安全训练。（2）所有工作人员必须学会如何发布火警警报，学会遇有失火时应做到：拨打报警电话“119”。发出火警警报以求得帮助，并开始从失火区或建筑物撤离。Ø如果可能，立即使用便携式灭火器进行灭火。如果不能扑灭火情，应把所有通向火场的门关紧，并用湿毛巾或床单堵住下面的门缝，以阻止火情的蔓延。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书应将房间里的所有人员撤出。（如果火情并非十分危险，可安排留下一人，向前来灭火的消防队员介绍具体情况。）（3）由受过训练的人员讲解使用便携式灭火器进行灭火的技能。训练应为“手把手”的方式，还应包括不同火情采用不同灭火器的知识。（4）对工作人员撤离火场的训练应经常举行，每年进行几次。所有人员每年至少参加一次训练（包括夜班和周末加班的人员）。练习应包括帮助病人和其他人员的撤离。隔离区，如暗室和其它不能听见警报声的实验室应包括在撤离路线内。撤离时，应关闭所有门窗。六实验室用电安全制度1.仪器用电作为仪器维护措施的一部分，应进行年度的安全用电检查并建立档案记录。每年至少对所有电插座的接地和极性、电缆的完整性进行检查一次，并将结果记录在案。可移动的设备应接地或采用更先进的方法防止触电，但全部塑封无法接地的仪器例外。新设备在使用前也应进行同样的检查。实验室应装有足够的插座，分布要合理，以减少在插座上接上其它多用插座和避免拖拉过多的电线。在空气中存在达到一定数量的易燃气体或蒸汽有可能形成可爆性混合物的危险环境下，应使用指定专门为此设计的防爆电器设备。2.维修与维护所有电器设备的维修与维护只能由取得正式资格的维修人员进行。（1）仪器的维修：除校准仪器外，仪器不得接电维修。维修时要确保手干燥，取下所有的饰物（如手表和戒指），然后谨慎操作。（2）线路检修：实验室技术人员不得维修建筑物的电力系统。任何涉及开关、插座、配电箱、保险丝、断路器的维修工作应由该建筑物的维修人员或其他有资格的人员进行。（3）高压设备：为保证高压设备（如高压电泳仪等）的安全，要制定具体的详细操作规程。（4）接地：电器设备必须接地或用双层绝缘。电线、电源插座、插头必须完整无损。在潮湿环境的电器设备，要安装接地故障断流器。七实验室化学危险物品使用准则130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书临床化学实验室存有许多腐蚀性、毒性、易燃和不稳定试剂，属化学危险物品。所有化学危险物品的容器都应有清晰标记。目前，广泛应用配制好的试剂和试剂盒，致使有些化学危险物品不易被识别，对这些试剂和试剂盒的成份应予复审并给予适当标记。实验室管理人员有责任向工作人员介绍化学危险物品。实验室技术人员有责任熟悉并向同事介绍化学危险物品和遵照安全操作。1.化学危险物品分类（1）腐蚀品：腐蚀品是接触人体后给人造成可见损伤或不可逆改变的物质。腐蚀性化学废弃物是指pH小于2.1或pH大于12.5或对钢（SAE1020）的腐蚀力超过0.635cm／年（55℃）的物质。例如：盐酸。（2）毒害品：毒害品是吸入、食入或少量接触即可引起严重生物效应的物质。（3）致癌物：由于检测化学物品能否诱发恶性肿瘤的测试系统很不相同，定义致癌物比较困难。例如：苯。（4）可燃烧物：可燃烧物指任何可燃烧的化学物品，包括可燃物和易燃物。易燃液体（燃点低于38℃）可分为以下几个级别：1A级：燃点低于22℃；沸点低于18℃1B级：燃点低于22℃；沸点高于18℃1C级：燃点高于21℃低于38℃可燃液体（燃点高于38℃低于60℃）可分为以下几个级别：ⅢA级：燃点高于60℃低于94℃ⅢB级：燃点高于94℃（5）易爆化学物品：易爆化学物品是指能迅速发生剧烈化学变化的不稳定物质。爆炸性分解可在正常温度和压力下发生。例如：肼。2.材料安全数据表及标签购进可能有危害的化学物品都必须附有材料安全数据表。所有危险化学品都需要以易于识别的形式进行标记，使专业和非专业人员很容易警觉其潜在的危险性。标记可以是文字、图标、标准化代码或多种形式并存。3.化学危险物的管理与使用（1）腐蚀品应在近离地面处储存以减小掉下的危险。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书（2）搬运体积超过500ml的浓酸试剂时，必须用运载托车。（3）严禁氧化剂与易燃剂存放在一起。腐蚀性化学品要单独存放。例如：乙酸或乙酸酐等有机酸应与硫酸、硝酸或高氯酸等强氧化剂分开储存。（4）个人防护装备：在使用腐蚀性物品场所的工作人员，应该穿戴围裙、手套和其它个人防护装备。（5）急救设备：使用腐蚀性物品的场所，应设有合适的急救沐浴设施和洗眼装置。（6）化学通风橱：所有挥发性腐蚀物品的操作，都必须在化学通风橱中进行。（7）易燃易爆液体应在合格的容器里储存。分装时应有明确的易燃和可燃性标记，工作储备量控制在最低限度。（8）易燃或可燃性液体的储量超过1000升，至少应有1间专用储藏室。（9）储存可燃性液体的仓库应远离明火和其它热源。（10）可燃性液体如需要在冰箱内存放，该冰箱的设计必须符合避免产生蒸汽燃烧的要求。实验室所有的冰箱门都应标明可否用于存放易燃、可燃性液体。4.污染物的清除和处理（1）每个实验室都应负责日常的清污工作。在结束常规工作时、工作交班、发生紧急事件如清除溅溢物后，都需要进行清污工作。需外送维修的设备，只有在实验室管理人员确认没有化学危险物品污染时，才能外送维修。（2）废弃化学物品：所有废弃化学物品都应按危险物品处理，除非能够确定它们的性质。清洁溅溢有害物质的所用材料，包括吸附物和中和物，都被认为是有害废弃物。（3）专职人员：实验室应指定专人协调和负责处理实验室有害化学废弃物，并将其放置在指定的废弃物堆放场所。（4）容器：化学废弃物应放置在密闭、有盖的容器中。（5）标签：化学废弃物的包装应有标签，标签应包含以下内容：*日期*来源*实验室来源*成份*物理性质（气体、液体等）*体积130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书*危险性（易燃或易爆）八实验室微生物安全准则在临床实验室，工作人员在接触标本和操作过程中，可能被感染。临床实验室可能接触的微生物可分为三类：1病毒，如：病毒性肝炎(特别是乙型及丙型肝炎)和获得性免疫缺陷综合症(AIDS)；2细菌，包括：细菌、分枝杆菌、真菌；3其他具有高毒力的病原体，如出血热病毒和立克次体。因为从病史和体检不能可靠地鉴定所有病人的病原体，所以当接触和处理所有的体液时，均应执行“常规预防措施”。1.感染途径（1）空气传播:在取下装有标本试管的塞子时、溶液洒落在坚硬的表面上、用未加塞子的试管进行离心或溶液（包括接种环内的溶液）加热太急时，具有传染性的溶液在上述各种情况下，可能形成气烟雾散布在空气中。（2）经口传播:用口吸移液可能导致微生物入人体引起传染。传染也可通过间接途径，如饮食或吸烟前没有彻底洗手引起“手－口”传染。（3）直接接种:偶然的针刺、碎玻璃划伤和动物咬伤均可通过直接接种引起传染。临床标本中的感染原也可通过被纸张轻微划伤的手指、很轻的擦伤或损伤的表皮进入人体造成感染。（4）粘膜接触:一些病原体，包括肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒（HIV），能够通过与粘膜（如眼结膜）的直接接触进入人体，所以在擦拭眼睛、更换隐形眼镜或使用化妆品前应彻底洗手。（5）节肢动物媒介:蚊、蜱、蚤和其它体外寄生虫都是潜在的传染源，特别是当室内喂养有动物时。2.常规预防措施（1）来自所有病人的血液和体液都被认为是具有传染性的。所有血液和体液的标本都应放置于具有安全盖的结构优良的容器里，以防在运输过程中发生泄漏。采集标本时应防止污染容器的外表或随标本的检验单。如果存在潜在的或实际的污染，则应再加一层包装（例如：包装袋）。（2）所有处理血液和体液（例如：取下真空试管的塞子）的工作人员都应戴上手套。如果有可能发生血液或体液的喷溅，则应使用面部防护装备。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书（3）对于组织学和病理学检查、微生物培养之类的常规操作，并不需要在生物安全柜内进行。但是，如果操作过程中会产生气烟雾或飞沫，则应使用生物安全柜，这些操作包括混匀、超声雾化和剧烈搅拌。（4）实验室应使用机械移液装置。绝对禁止用口吸移液。（5）使用注射器和针具时应防止受伤。禁止用手将针套重新套在针头上、禁止故意将针头弯曲或折断、将针头从一次性注射器上取下、或对针头进行其它操作。所有锐利物品在使用后都应放入专用锐器盒内，然后运至处理场所。废弃锐利物品的容器应就近放在便于操作的地方。应在未完全装满前或48小时之内及时更换。（6）血液或其他体液发生泄漏或工作结束后，均应使用合适的化学杀菌剂对实验室工作区进行表面消毒。可使用2%的84消毒液消毒。（7）实验中用过的污染物品在重复使用前或装入容器中按传染性废弃物进行处理前，应先进行去污处理。（8）被血液或其他体液污染的设备在实验室内或外送商家进行维修之前，应先进行清洁和消毒。无法彻底消毒的设备必须贴上生物危害的标签。（9）手或其他部位的皮肤在接触血液或其他体液后必须立即彻底清洗。在实验工作结束后或取下手套后应立即洗手。在离开实验室之前应脱下所有的个人防护装备。（10）如果实验人员工作时有可能接触到血液、其它可能具传染性的物质、病人的粘膜或要损伤的皮肤、或在处理污染的物品或表面时，都应戴上手套。在进行血管穿刺时，包括静脉采血、手指或脚背穿刺，也应戴上手套。如果手套破损、刺破、或失去其屏障功能，则应尽快更换。清洗或消毒会损害一次性手套的质量，故不得重复使用一次性手套，在接触病员后应更换手套。（11）工作区应使用吸收性强的纸张覆盖。在移液、混合、振荡、搅拌或离心时，必须防止发生气烟雾。（12）患有渗出性病变或湿疹的医务人员在痊愈前不得直接接触病人，也不得接触医疗设备。（1）生物安全柜生物安全柜是微生物实验室里控制生物危害的最好的方式之一。实验室可根据需要选择合适的型号，并应根据产品说明书进行安装、使用和维修。实验室应制定安全柜的维护规程，以确保安全橱内合适的气流流速，并适时更换滤器。安全柜的放置应远离气流不稳定的地方，通风口的设置应根据产品说明书。在维护、移动和／或处理安全柜之前必须对生物安全橱进行消毒。九检验科消毒及废弃物处理制度130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书1.医务人员要求（1）工作人员应穿戴整洁，工作服一般每周更换2次；（2）试验室接触标本均为可疑污染物，操作前均应戴好乳胶手套，手套破损要及时更换，工作后脱手套用手消毒液消毒双手，用流动水洗净；（3）做血常规检查的操作者必须做到一人一消毒，消毒液为75%酒精；（4）离开实验室的工作人员必须脱掉手套；不能穿工作服到院外活动。2.病人手指消毒（1）做血常规检查应选取病人无红肿，破损，伤痕的手指部位；（2）用75%酒精消毒针刺部位，干后针刺取血，做到一人一针一消毒一吸管；（3）推片不得直接接触创口皮肤取血。3.废弃物的消毒及处理（1）医用垃圾与生活垃圾严格分开，黑色垃圾袋装生活垃圾，黄色垃圾袋装医用垃圾；（2）装盛垃圾的垃圾桶应用脚踏式，或加盖儿。（3）固体医疗垃圾套双层垃圾袋，防止泄露，，定时或在装满3/4时及时清理，运送到指定地点，集中焚烧，转运时应有防止锋利物刺破垃圾袋遗洒的防护措施。（4）液体垃圾如病人尿液、胸腹水、呕吐物按8片/L健之素消毒片投放，有效氯浓度为2000mg/l,作用30分钟，到入医用下水道；（5）锐利物应及时投入专用锐器盒，在装满前或48小时之内及时更换。（6）一般的化学废弃物可直接排入下水道；血球分析仪废液含氰化物，应放入健之素消毒片，30分钟后到入下水道。4.重复使用检验器材处理（1）重复使用的器材用后应浸入含有效氯2000mg/l消毒液4小时，再清洗干净；（2）浸入重络酸钾（50克溶于100毫升水）浓硫酸（1000毫升）溶液，24小时；（3）取出，蒸馏水冲洗10遍以上；（4）烘干，备用。5.各种物面及地面消毒（1）各种物表及台面每日用300-500mg/l含氯消毒剂擦拭；用紫外线消毒时，灯管离台面不宜超过1米，消毒有效区域为灯管周围1.5-2.0米，每次时间不少于30分钟；（2）地面用浸有500-1000mg/l有效氯消毒液或0.1-0.2％过氧乙酸的拖把拖地130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书6.空气消毒（1）实验室应开窗通风，保证持空气流通、清新；（2）空气消毒用紫外线灯照射，每次时间均应大于30分钟，每天不少于1小时；（3）有条件的实验室可采用静电吸附式空气净化器持续消毒。7.化验单消毒（1）要保持化验单干净，避免被检验材料污染；（2）不等取的化验报告单，在每日工作结束时，用微波炉中火消毒2分钟后发出；（3）门急诊未被污染的化验单，可随时发出。凡有可能被污染的化验单，均须经消毒后方可发出。8.消毒液配制及监测（1）正在使用的消毒液应有标识（2）四环牌清洗消毒剂含有效氯5%，配比：1：19有效氯≧2000mg/l;1:99有效氯≧500mg/l;1:199有效氯≧250mg/l;（3）健之素消毒片含有效氯250mg/片（4）消毒液浓度监测用G-1型试纸9.紫外线强度监测（1）开启紫外线灯管5分钟后，将指示卡置于紫外线灯下垂直距离1米处，有图案的一面朝上，照射1分钟，图案中光敏色块由乳白色变成不同程度的淡紫色，将其与标准色块比较，读出照射强度，使用中紫外线灯辐照强度≥70μW/cm2为合格；每季度检测一次；（2）做好紫外线消毒记录，每季度检测一次紫外线强度，检测结果贴于记录本上，灯照强度<70μW/cm2应及时更换灯管。十固镇中医院检验科生物安全事件应急预案130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书总则为了有效的预防实验室污染，有效的应对实验室突发污染事件，保证实验结果的科学准确，保障实验工作人员的健康、生命安全和国家财产，防止和杜绝实验室污染对周围环境造成严重污染，为了加强检验工作的质量控制和实验室的管理，特制定本预案，确保一旦发生实验室污染事件及安全事故时，能及时、规范、科学、迅速有效地控制。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书工作原则和编制依据一、工作原则1．预防为主常备不懈2．设施规范管理到位3．主动监测反应及时4．依法处理措施果断5．机制通畅遏制危害二、编制依据1．《中华人民共和国传染病防治法》2．《突发公共卫生事件应急条例》3．《实验室生物安全通用要求》130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书适用范围和预案启动一、适用范围本预案适用于发生中医院内部的、与实验室安全相关的、危害科室工作人员健康以及社会公众健康和社会稳定的所有事件。主要包括：1．病原微生物和有毒有害化学试剂的实验室污染事件；2．工作人员受到实验室内有毒有害病原微生物或有毒有害化学试剂的感染或侵害；3．病原微生物、有毒有害化学试剂被泄漏出实验室事件。4．由于停电、火灾等不可预测因素所引起的实验室其他污染事件。二、预案启动当出现以上适用范围中的任意情况，启动本预案。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书职责一、组织管理机构和人员职责1．实验室污染预防及应急处置专业小组职责（1）在医院领导小组的统一领导指挥下，负责组织本小组的全体成员开展日常督促检查实验室污染预防与应急处理的组织建立、人员培训、技术和物资等的落实，指挥实验室污染突发事件的现场和调查处理工作。（2）负责防止实验污染的日常工作，完善制度、规范措施、责任到人和检查督促，按中心统一安排办好一切防止实验室污染及安全事故的管理工作。（3）加强预防工作，每个人都要认真负责执行实验室的各项制度，特别是实验室安全管理制度、各种有毒有害易污染实验室和其周围环境的物品及废物的管理制度等的执行；对安全隐患及时排除，对不能排除的应及时报告有关部门及时排除，对可能突发的实验室污染事件而存在的安全隐患应采取快速有效的控制措施，并及时向实验室污染预防及应急处置专业小组报告；同时期采取有效的防范措施，向中心应急队后勤保障组报告控制实验室污染预防及应急处理所需物资清单并及时领取保管等。（4）发生突发事件后应急处理技术小组全体成员，应立即按实验室污染突发事件处理的技术规范，采取有效措施控制事件、调查原因，减少人员伤亡的国家财产损失。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书二、组织指挥体系及职责任务（一）组织机构固镇中医院实验室生物安全应急领导小组：组长：宋伟副组长：李洪湘成员：张拥军、张同娥、孟祥红、殷献军、孙重岚、曹敏固镇中医院生物安全事件应急处理工作组组长：张拥军成员：孙重兰、曹敏、陈冬酶、孟祥红（二）职能与工作1．领导小组：制定实验室生物安全防护指导方针，规划对中心实验室的硬件建设、组织实施科学管理。在实验室生物安全事件发生时，决策指挥，调动人员，全面部署。2．应急处理工作组：制定实验室生物安全管理办法，建立规章制度和实验室操作规范，对实验室的安全进行监督检查，督促各项生物安全管理责任和措施落实到位；突发事件发生时，在领导小组的指挥下实施全面的应急工作。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书预防预警一、预防1．加强实验室标准化建设，对实验室设备的配置、个人防护和实验室安全行为应按《实验室生物安全通用要求》做出明确规定。2．建立实验室病原微生物专库，建立有毒有害化学试剂专库。对于传染病病原样本、剧毒化学晶建立严格的监督管理制度。3．增强安全意识，合理完善实验室生物安全的各项规章制度。把生物安全管理责任和措施落到实处，消除安全隐患。实验室工作人员应自觉遵守实验室生物安全管理规定，严格按照操作规程和技术规范开展研究工作。4．提高警惕，加强安全保卫，防止不法之徒盗窃病原微生物和有毒有害化学试剂，用于对人群进行生物化学恐怖攻击，对公众健康产生严重损害，影响社会稳定。二、预警1．建立有效的预警机制，为各种病原微生物和有毒有害化学试剂建立档案和使用纪录，填写准确。每次使用后及时登记，发现遗失或被盗，立即报告（见处理程序）。2．建立中心实验室工作人员健康档案，定期体检。发现与实验室生物安全有关的人员感染或伤害应立即报告。3．定期开展自查，及时发现安全隐患，发出预警通报。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书应急控制措施实验室生物安全事件发生后，立即启动中医院应急机制。在中医院领导小组的指挥下，有关部门进入应急状态，对突发事件进行侦测、调查，综合评估，采取应急处理措施，控制危害的蔓延等等。一、对实验室生物安全事件综合评估1．流行病学调查包括事件发生的原因、接触人员的发病情况、引起疾病流行的可能因素等。2．标本、样品采集和检验对污染的物品、区域、感染的人员进行采样和检测，对可疑生物进行样本检查，进行病原的分离鉴定，以确定事件的性质与危害。3．污染区域划定对污染区及其周围的地区进行卫生监测。对于病原微生物和有毒有害化学品、放射源的丢失或被盗事件，应监测生活资源受污染范围和严重程度，现场调查和取证人员应采取适宜的防护措施。二、现场控制措施1．根据实验室生物安全事件发生的规模、危害的程度，可能波及的范围，封闭或封锁相关实验室和实验区。2．传染源控制对于受到实验室生物安全事件影响的现症病人实行就地报告，通过“绿色通道”，送至实验室人员感染救治的定点医院。对于疑似病人和接触者进行入院观察。对于事件中的高暴露人群根据实际情况进行预防性服药、留检、医学观察或隔离。在可能波及的范围内，开展疑似病例的搜索，开展传染源、传播途径及暴露因素的调查。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书3．对于查明的微生物病原、生物毒素以及有毒有害化学品污染的物品要对其进行封存和销毁，紧急封闭公共饮用水源等公众共用设施。4．对受到污染实验室等所有场所、物品等进行消毒处理，具体方法参照《消毒技术规范》。5．保护易感人群对易受感染的人群和其他易受损害的人群采取紧急接种、预防性投药、群体防护等。6．卫生知识宣教针对事件性质，开展特异性卫生知识宣教。7．人员疏散出现大量或毒性极大的病原微生物和有毒有害化学试剂丢失、并有迹象出现严重危害公众健康事件时，可报请政府取消集会性活动，采取必要的停工、停业、停课和人员疏散措施。8。消除区域民众心理障碍和精神应激采取宣传教育、心理咨询等方式针对性解决。三、追踪监测追踪事件可能波及的地区的高暴露人群，开展主动监测工作，做到早发现、早报告、早隔离、早治疗。四、上报与部门协调及时上报省和市卫生和管部门，报告程序按照《中华人民共和国传染病防治法》、《突发公共卫生事件应急条例》的有关规定。对于病原微生物、有毒有害化学试剂和放射源丢失的事件，立即上报公安部门，并与相关部门密切配合，尽快查明下落；要与卫生监督部门配合协调，搞好相关区域的食品、饮水、环境卫生监督。对于实验室人员受到感染和侵害事件，积极与医疗部门协调，提供有关资料，尽早确诊，尽早治疗，把危害降低到最小。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书应急处理程序一、病原微生物污染应急处置措施1．实验室如果发生一般病原微生物泼溅或泄漏事故，按生物安全的有关要求，根据病原微生物的抵抗力选择敏感的消毒液进行消毒处理。（1）如果病原微生物泼溅在实验室工作人员皮肤上，立即用75％的酒精或碘伏进行消毒，然后用清水冲洗。（2）如果病原微生物泼溅在实验室工作人员眼内，立即用生理盐水或洗眼液冲洗，然后用清水冲洗。（3）如果病原微生物泼溅在实验室工作人员的衣服、鞋帽上或实验室桌面、地面，立即选用75％的酒精、碘伏、0.2-0.5%的过氧乙酸、500-10000mg/L有效氯消毒液等进行消毒。2、实验室实发生高致病性病原微生物泄漏、污染时，实验室工作人员应及时向实验室污染预防及应急处置专业小组报告，在2小时内向卫生主管部门报告，并立即采取以下控制措施，防止高致病性病原微生物扩散。（1）封闭被污染的实验室或者可能造成病原微生物扩散的场所；（2）开展流行病学调查；（3）对病人进行隔离治疗，对相关人员进行医学检查；（4）对密切接触者进行医学院观察；（5）进行现场消毒；（6）对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、捕杀抢救等措施。（7）其他需要采取的预防、控制措施。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书3、如果工作人员通过意外吸入、意外损伤或接触暴露，应立即紧急处理，并及时报告实验室污染预防及应急处置专业小组。如工作人员操作过程中被污染的注射器针刺伤、金属锐器损伤，解剖感染力动物时操作不慎被锐器损伤或被动物咬伤或被昆虫叮咬等，应立即实行急救。首先用肥皂和清水冲洗伤口，然后挤伤口的血液，再用消毒液（如75％酒精、2000mg/L次氯酸钠、0.2％-0.5％过氧乙酸、0.5％的碘伏）浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口（厌氧微生物感染不包扎伤口）。必要时服用预防药物，如果发生HIV职业暴露时，应在一到两个小时以内服用HIV抗病毒药。二、化学性污染应急处置措施1、一般化学性污染应急处置措施（1）如果实验室发生有毒、有害物质泼溅在工作人员皮肤或衣物上，立即用自来水冲洗，再根据毒物的性质采取相应的有效处理措施。（2）如果实验室发生有毒、有害物质泼溅或泄漏在工作台面或地面，先用抹布或拖布擦拭，然后用清水冲洗或时用中和试剂进行中和后用清水冲洗。（3）如果实验室发生有毒气体泄漏，应立启动排气装置将有毒气体排出，同时开门窗使新鲜空气进行实验室。如果发生吸入毒气，造成中毒应立即抢救，将中毒者移至空气良好处使之能呼吸新鲜空气。（4）经口中毒者，要立即刺激催吐，反复洗胃，洗胃时要注意吸附、微酸和微碱中和、水溶性和脂溶性以及保护胃黏膜的原则。2、严重化学性污染应急处置措施按照《中国公共卫生突发事件调查处理》第二章第四节急性化学性伤害调查处理的方法进行处置。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书三、实验室安全事故应急处置措施1、实验室一旦发生火灾，一定要迅速而冷静地首先切断火源和电源，并尽快采取有效的灭火措施。水和沙土是最常用的灭火材料。2、若出现触电事故，应先切断电源或拔下电源插头，若来不及切断电源，可用绝缘物挑开电线，在未切断电源之前，切不可用手去拉触电者，也不可用金属或潮湿的东西挑电线。若触电者出现休克现象，要立即进行人工呼吸，并请医生治疗。3、按有关规范或制度做好实验室贵重物品、危险晶、有毒有害物质、菌毒种的保管和使用记录。一旦被盗，应立即保护好现场，报告有关部门，查明被盗数量，估计造成后果的严重程度，制定并采取有效的控制措施。疫情的解除如果查明实验室生物安全事件是由于细菌毒素或传染性较差的病原体引起的危害较小的污染，经实验室消毒处理后即可解除封锁。但对感染者必须加强治疗和必要的限制。如查明生物污染或泄漏是由于国家规定的一、二、类病原微生物，或发生上述相应疾病的病症时，应继续封锁，并应将封锁区分为若干个大小封锁圈。各封锁圈之间应完全隔离开来，对病人进行隔离治疗，对受感染者及病人密切接触者进行隔离留验。解除封锁的条件是对污染区或疫区进行必要的卫生处理，如对病原体进行彻底的消毒或扑灭；根据情况进行了必要的杀虫、灭鼠；对小隔离区进行终末消毒，并从最后一例病人算起，经过一个最长潜伏期仍无新的病人发生，报请批准封锁的主管部门解除封锁。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书保障措施1．技术保障加强科学研究，提高科技含金量，强化实验室规范化建设。2．人员培训加强对涉及实验室生物安全的监测与预警、疫情分析评估、流行病学调查、消毒隔离技术等方面的业务培训。加强对实验室业务人员在法制化管理和法律责任方面的培训。3．监督检查中心相关实验室要定期自查，中心建立实验室检查制度。4．应急演练应急演练工作每两年不少于1次。演练工作应根据性质的不同分类进行。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书3、标准操作程序有√无□文件总数：23序号文件名01固镇中医院检验科细菌室操作指导书020304050607080910130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书固镇县中医院微生物实验室操作指导书1.细菌室人员岗位职责……………………………………………………..22.细菌室工作人员管理规定及报告时间………………………………….43.标本采集及保存要求……………………………………………………74.显微镜检查法操作规程…………………………………………………95.细菌室标本操作流程……………………………………………………116.细菌室形态检查操作规程………………………………………………137.细菌生化反应鉴定及其他实验操作规程………………………………188.细菌的接种与培养方法操作规程………………………………………239.支原体培养、鉴定、计数及药敏操作规程……………………………2510.血液感染病原体检验操作规程…………………………………………2711.中枢神经系统感染病原体检验操作规程………………………………2912.创伤和外科感染病原体检验操作规程…………………………………3113.下呼吸道感染病原体检验操作规程……………………………………3214.消化道感染病原体检验操作规程………………………………………3415.尿路感染病原体检验操作规程…………………………………………3516.脓汁及病灶分泌物细菌检验操作规程…………………………………3617.生殖系统标本的处理……………………………………………………3818.超广谱β—内酰胺酶（ESBLs）检.……………………………………4019.消毒灭菌效果监测……………………………………………………….4120.环境卫生学监测………………………………………………………….4221.采样及检查原则………………….………….…………………………..4322.各部位的消毒…………………………………………………………….48130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—001文件名称细菌室人员岗位职责执行时间（第1版）2012.02.01细菌室人员岗位职责1、上班后先搞好室内卫生、核查各个培养箱、冰箱的工作温度是否在设定的范围内，并做好记录。2、检查各种培养基及试剂的库存量，做好需配制培养基或购买试剂的交班工作。3、接收样本：核对各样本号与申请单联号是否一致，如不一致马上与病房联系以便作出相应的处理，如退单或重送样本等，并做好联系情况的记录。核查各送检样本是否符合要求。①痰液样本：先看外观、再直接涂片镜检，低倍镜下见白细胞>25个，10<上皮细胞<25个／每个视野，为合格痰液。②无菌体液样本：检查各种无菌体液样本的盛放器皿是否符合要求。③容易干燥的样本：对一些容易干燥的样本如大便、咽拭子、脓液拭子、泌尿生殖道拭子等是否已经干燥。对不符合要求的样本必需与临床联系，以便作出相应处理，方法如联号不符的样本。做好记录。对符合的样本进行原始单的登记。4、样本编号：对符合的样本作出编号，普通细菌培养：痰液、咽拭子、血液增菌培养、尿液、胸、腹水、脑脊液、胆汁、脓液、泌尿生殖道拭子、大便致病菌培养。在各种培养基上及申请单上编号的同时均需明确标明接种日期。各种涂片样本编号：抗酸染色、G—双球涂片。5、样本接种：①血液、骨髓、腹水、关节液等：增菌培养瓶②痰液、咽拭子、脑脊液分别接种：血平板、巧克力平板、麦康凯平板；⑨尿液接种：血平板、巧克力平板、Mac：④各种无菌体液、脓液、泌尿生殖道分泌物接种：血平板、巧克力平板；⑤大便致病菌：接种SS平板、麦康凯平板；⑥分泌物的淋球菌培养接种：淋球菌专用平板；⑦支原体培养+药敏，按说明书接种支原体专用培养基；对以上接种样本的当前编号应记录于登记本上。此外对痰、脓液、脑脊液等在接种的同时应对其沉渣进行革兰染色，如有细菌和／或何种细菌为主立刻通知临床，并做好记录。6、涂片染色：抗酸染色严格按照操作规程，漂浮法涂片痰液样本，胸腹水、尿液、脑脊液等约10m1于试管中低速1000转／分离心2分钟后取上清于另一管中，5000转／分高速离心10分钟，取沉淀涂厚片，自然干燥后固定，按说明书染色后镜检。G—双球菌涂片，应用滚动式涂片法从波片一端涂向另一端，反复几次，火焰固定后进行革兰染色。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书7、对需购买的试剂、平板、培养基、染色液以及需配置的培养基应及时交班。申报室组长、及下午配制人员。8、对有新到岗的实习或进修人员时，应认真交代本岗位的一切事宜并且认真作好带教工作。9、上班后首先检查各种仪器工作是否正常，做好记录。10、查对昨天移种平板申请单及原始登记本，确定标本移种是否正确。观察血液增菌培养瓶，如发现有细菌生长，马上涂片革兰染色，将细菌的染色特性及形态报告给临床，并做好记录，同时进行移种。11、观察平板，挑取可疑菌落涂片革兰染色，如为革兰阳性菌或阴性杆菌，将菌落纯化于普通血平板；如为真菌，将菌落纯化于沙博罗平板；如革兰阴性双球菌，将菌落纯化于巧克力平板，并置于CO2蜡缸中：对嗜血杆菌纯化于专用巧克力平板，并置于CO2蜡缸中。12、将前一天分纯的细菌严格按照黑马系统说明书进行分析前各种鉴定试条和药敏试条的操作.。13、对一些不适合用鉴定板测药敏的细菌，改用标准的K.B法进行检测。碰到异常的耐药模式应及时上报组长，如碰到耐万古霉素的葡萄球菌、粪肠球菌，耐泰能的大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属等。并加做特殊的药敏纸片，并改用纸片法加以比较。14、对一些特殊细菌，如嗜血杆菌、棒状杆菌、李斯特菌属等用相应的鉴定条进行鉴定，用相应的手工试验进行检测，操作严格参照全国临床检验操作规程第三版。15、定期做好本室所用鉴定和药敏试条的质控，做好记录。16、每天必须消毒平板、基础培养基等用于常规医院感染监测；另外根据具体情况即时准备好各种中和剂、无菌瓶等，对48小时的空气培养出报告，同时注意是否有致病菌、菌落数是否超标。17、工作完成后注意对工作台面进行消毒、室内进行消毒。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—002文件名称细菌室工作人员管理规定及报告时间执行时间（第1版）2012.01.01细菌室工作人员管理规定及报告时间一、守班人员1、上班后首先搞好接种室内卫生、核查各个培养箱、冰箱的工作温度是否在设定的范围内，并做好记录。2、检查各种仪器工作是否正常，并做好记录。3、查对昨天移种平板申请单及原始登记本，确定标本移种是否正确。观察血液增菌培养瓶，如发现有细菌生长，马上涂片革兰染色，将细菌的染色特性及形态报告给临床(第一级初级报告)，二级报告：报告直接抗菌药物敏感试验和细菌种属的初步鉴定结果，三级报告(最终报告)：报告细菌种属名和标准抗菌物敏感试验。阴性报告：普通血培养3天无细菌生长可报告为：“72小时培养未见细菌生长”，并做好记录，同时进行移种。阴性报告于7天后出结果。4、观察平板，挑取可疑菌落涂片革兰染色，如为革兰阳性菌或阴性杆菌，将菌落纯化于普通血平板；如为真菌，将菌落纯化于沙博罗平板；如革兰阴性双球菌，将菌落纯化于巧克力平板；对嗜血杆菌纯化于专用巧克力平板。.一般培养原则上三天内将结果发于临床。5、将前一天分纯的细菌严格按照黑马分析系统说明书上板前各种试条的使用说明配制菌悬液、滴加试剂，做好各种鉴定、药物敏感性试验。6、接收样本：核对各标本号与申请单联号是否一致，如不一致马上与病房联系以便作出相应的处理，如退单或重送样本等，并做好联系情况的记录。核查各送检样本是否符合要求。①痰液样本：先看外观、再直接涂片镜检，低倍镜下见白细胞>25个，上皮细胞>10每个视野，为合格痰液。②无菌体液样本：检查各种无菌体液样本的盛放器皿是否符合要求。③容易干燥的样本：对一些容易干燥的样本如大便、咽拭子、脓液拭子、泌尿生殖道拭子等是否已经干燥。对不符合要求的样本必需与临床联系，以便作出相应处理，方法如联号不符的样本。做好记录。对符合的样本进行原始单的登记。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书7、样本编号：对符合的样本作出编号，普通细菌培养：痰液、咽拭子、血液增菌培养、尿液、胸、腹水、脑脊液、胆汁、脓液、泌尿生殖道拭子、大便致病菌培养。在各种培养基上及申请单上编号的同时均需明确标明接种日期。样本接种：⑧血液、骨髓、腹水、关节液等：血平板、Mac⑨痰液、咽拭子、脑脊液分别接种：血平板、巧克力平板、麦康凯平板；⑩尿液接种：血平板、巧克力平板、Mac；各种无菌体液、脓液、泌尿生殖道分泌物接种：血平板；巧克力平板；大便致病菌：接种SS平板、麦康凯平板；分泌物的淋球菌培养接种：巧克力平板；支原体培养+药敏，按说明书接种支原体专用培养瓶；对以上接种样本的当前编号应记录于登记本上。此外对痰液在接种的同时应对其沉渣进行革兰染色，如有细菌和／或何种细菌为主即刻的向临床发出第一级初级报告，并做好记录。8、对一些不适合用仪器检测药敏的细菌，改用标准的K.B法进行检测。碰到异常的耐药模式应及时上报组长，如碰到耐万古霉素的葡萄球菌、粪肠球菌，耐泰能的大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属等。并加做特殊的药敏纸片，并改用纸片法加以比较。9、对一些特殊细菌，如嗜血杆菌、棒状杆菌、李斯特菌属等用相应的鉴定条进行鉴定，用相应的手工实验进行耐药性检测，操作严格参照说明书。10、对所完成的各种发向临床的微生物学报告单，要认真检查，并给上行政班的人员核查，确认一切无错后，方能发出。11、做好菌种的保存，对一些难得的菌株、标准菌株等要定期移种，一般二周一次，并做好移种记录。定期做好本室所用各种鉴定药敏试条的质控，一周一次(或每个批号一次)，做好记录。12、检查本岗位各种培养基及试剂的库存量，做好需配制培养基或购买试剂的交班工作。对需购买的试剂、平板、培养基、染色液以及需配置的培养基应及时交班。13、工作完成后注意对工作台面进行消毒、室内进行消毒。离开科室前交好班。二、行政上班人员1、上班后首先搞好室内卫生。2、将临床室的培养标本拿回。3、对有新到岗的实习或进修人员时，应认真交代本岗位的一切事宜并且认真作好带教工作。4、涂片染色：抗酸染色严格按照操作规程，漂浮法涂片痰液样本，胸腹水、尿液、脑脊液等取沉淀涂厚片，自然干燥后固定，按说明书染色后镜检。5、临床标本细菌或门诊标本G-双球菌涂片，应用滚动式涂片法从波片一端涂向另一端，反复几次，火焰固定后进行革兰染色。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书6、每天必须消毒平板、基础培养基等用于常规医院感染监测或K.B药敏试验；另外根据具体情况即时准备好各种中和剂、无菌瓶等，对48小时的空气培养出报告，同时注意是否有致病菌、菌落数是否超标。7、检查本岗位各种培养基及试剂的库存量，做好需配制培养基或购买试剂的交班工作。对需购买的试剂、平板、培养基、染色液以及需配置的培养基应及时交班。8、工作完成后注意对工作台面进行消毒、室内进行消毒。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—003文件名称标本采集及保存要求执行时间（第1版）2012.01.01标本采集及保存要求1、总则：用于细菌培养的标本在收集时应注意严格无菌操作和及时送检，检测后标本应妥善保存。2、临床标本的采集2.1、下呼吸道分泌物(痰液)令患者早上起床后用清水濑口，不要刷牙，立即从下部呼吸道咳出第一口痰，吐在无菌塑料痰盒中，及时送检。2.2、尿液(中段尿)护理人员协助采取中段尿约3ml入无菌塑料盒中，及时送检。2.3、粪便：取有粘液、脓血部分的粪便置无菌塑料盒中及时送检。2.4、眼、耳、鼻、喉拭子：将棉拭子沾取少许无菌生理盐水(如沾取的太多，可在无菌生理盐水瓶壁上挤去多余的水份)，然后采取可疑部位的分泌物，倒悬于无菌塑料盒中，及时送检。2.5、脓液：用沾有生理盐水的棉拭子沾取脓液，要尽量多取一些，然后将棉拭置于无菌塑料盒中，及时送检。2.6、血液：2.6.1、凡怀疑菌血症和败血病的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，应在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。当然在病人发热或寒颤时采集也可。2.6.2、成人每次采血5—10m1，小儿采血2—3ml；2.6.3、严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀，2.6.4、从抽血到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固，同时要及时送检。2.7、穿刺液：胸腹水、心包液、关节腔液、鞘膜积液，严格无菌抽取后，注入含肝素抗凝的无菌试管中，轻轻颠倒试管10余次，使肝素与穿刺液混匀达到抗凝的目的，或直接无菌注入血培养瓶内及时送检。2.8、胆汁：由专科医生以无菌方法取引流液10m1注入无菌塑料盒内。2.9、脑脊液：以无菌方法取脑脊液3—5ml，置无菌试管内，常温保存送检，如只做培养可直接无菌注入血培养瓶内，及时送检。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2.10、生殖器官标本：阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，收集于无菌塑料盒内送检。如疑为淋病奈瑟菌感染，做培养检查时，采集的标本应床旁接种并及时放入孵箱培养。2.11、烧伤标本：以无菌棉拭子直接采取多个部位创面的脓汁分泌物放入无菌塑料盒中。2.12、支原体(解脲、人型)培养+药敏的标本采集2.12.1、支原体对干、热抵抗力差，标本采集后应尽快接种支原体运送培养基送检。2.12.2、男性：用细的无菌棉拭子沾取无菌盐水少许深入尿道口内2—2.53、临床标本的保存3.1、细菌室标本原则上要求及时送检、及时处理，不得保存。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—004文件名称显微镜检查法操作规程执行时间（第1版）2012.01.01显微镜检查法操作规程显微镜检查是细菌鉴定工作中的一重要手段，有助于细菌的初步鉴别，同时对下一步鉴定工作起着重要的指导作用。有时通过形态学检查可得到初步诊断，如痰中的抗酸杆菌和泌尿生殖道分泌物中的淋病奈瑟菌等。显微镜检查有不染色标本检查法和染色标本检查法两种。1、不染色标本的检查：不染色标本主要用于检查细菌的动力及运动状况。1.1、压滴法：用接种环取细菌悬液2环，置于清洁载玻片中央，覆上盖玻片，于高倍镜下观察。制片时菌液要适量，不可有气泡，不可外溢。1.2、悬滴法：取洁净的凹窝载玻片及盖玻片各1块，将凹孔四周的平面上涂上一层凡士林，取一环菌液置盖玻片中央，将凹窝载玻片的凹面向下，对准于盖玻片的液滴上，然后迅速翻转玻片，用小镊子轻压盖玻片使之与凹孔边缘粘紧。镜下观察时先低倍后高倍，不可压碎盖玻片。有动力的细菌可见细菌从一处移到另一处，无动力的细菌呈布朗运动而无位置的改变。螺旋体由于菌体纤细、透明，需用暗视野显微镜观察其形态、活动。2、染色标本检查法；通过对标本的制片及染色，能观察细菌的形态、大小、排列、染色特性以及荚膜、芽胞、异染颗粒等结构，有助于细菌的初步鉴定。2.1、快速革兰染色法2.1.1、操作见试剂说明书2.1.2、结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。2.1.3、注意事项：染色关健在于涂片和脱色，涂片不宜过厚，固定不宜过热，脱色不宜过度，菌龄为18～24小时为佳。2.2、抗酸染色法2.2.1、操作见试剂说明书2.2.2、结果：抗酸杆菌呈红色。2.2.3、注意事项：每一张玻片只能涂一份标本且不能在染色缸中染色，以免造成不同标本间的交互污染从而导致阴阳性结果混淆，脱色时间宁长勿短，至无红色液体流下为止。2.3、阿尔培异染颗粒染色法：130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2.3.1、初染：涂片上滴加第一液染剂(甲苯胺蓝和孔雀绿的乙醇溶液)，染3—5分钟，水洗。2.3.2、复染：第二液染剂(碘化钾溶液)染1分钟，水洗。自然干燥后镜检。2.3.3、结果：菌体呈绿色，异染颗粒呈蓝黑色。2.3.4、注意事项：玻片要清洁，染料需新鲜配制，无沉淀物。注意与标本中的其他杂质相区别。3、压片镜检，主要观察细菌在组织中的分布。4、墨汁负染镜检：背景着色而菌体不着色的染色法，用以观察新型隐球菌的宽厚荚膜等。5、鞭毛染色镜检，观察细菌有否鞭毛、鞭毛的位置、鞭毛的数量，在非发酵菌的鉴定中是一项重要的指标。6、暗视野镜检：观察一些较微小且有一定结构的微生物，如钩端螺旋体的钩状及螺旋的形态等。7、制动试验的直接镜检，在标本加入抗血清，观察动力是否被抑制，如霍乱弧菌的制动试验等。8、荧光镜检，用标有荧光素的物质与检材中的微生物特异结合产生荧光的特点而对微生物作出鉴定。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—005文件名称细菌室标本操作流程执行时间（第1版）2012.01.01细菌室标本操作流程1、标本的接受1.1、标本接受的时间：原则上全天任何时间均可。1.2、标本的接受：接受标本者要认真核对标本的数量、标本与检验单要求是否相符以及标本的质量等。1.3、把接受的标本编号。2、临床标本的接种2.1、检验目的为细菌培养+药敏试验的各临床标本的培养基选择2.1.1标本类型培养基血血培养瓶中段尿血平板、麦康凯平板、巧克力平板脑脊液血培养瓶、血平板、巧克力平板穿刺液血培养瓶、血平板、麦康凯平板、巧克力平板胆汁血平板、巧克力平板、麦康凯平板呼吸道标本血平板、麦康凯平板、巧克力平板粪便标本SS平板、MAC平板和血平板病灶分泌物血平板、巧克力平板、麦康凯平板2.1.2、生殖器标本根据临床医生所写的检验项目接种相应的平板及操作：淋球菌培养接种淋球菌平板；念珠菌培养接种沙保罗培养基：支原体培养则按《支原体培养的操作规程》操作；作普通细菌培养，则接种血平板和巧克力平板；衣原体抗原检测的按《衣原体抗原检测的操作规程》进行检验。2.2、接种的方法：中段尿标本无菌取10ul，在血平板的中间做垂直划线，然后分离划线。其他际本做分区划线。2.3、检验目的为找抗酸杆菌的按《找抗酸杆菌的操作规程》进行检验。3、所接种的平板必须写上标本的编号和接种的日期，然后根据要求进行培养。4、标本的培养条件、温度、时间平板培养条件、温度、C02浓度、时间130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书血平板孵箱、35—37℃、18—24小时巧克力平板孵箱、35—37℃、18—24小时淋球菌平板孵箱、35—37℃、18—24小时沙保罗平板孵箱、28—31℃、24—36小时其他的平板孵箱、35—37℃、18—24小时5、根据生长在平板上的细菌菌落形态、菌落涂片、染色、镜检等来综合判断细菌形态和染色性质，按各属鉴定的作业指导书进行各菌属的常规鉴定及药敏试验。6、结果的报告6.1、确认细菌鉴定及药敏试验结果后，进行检验验单结果报告的存盘、打印。7、对各类细菌培养标本除特殊要求外，我室一般操作完后按要求进行无害化处理。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—006文件名称细菌的形态检查操作规程执行时间（第1版）2012.01.01细菌的形态检查操作规程一、不染色标本的检查压滴法和悬滴法。主要用于检查生活状态下的细菌的动力及运动状况。将特制好的标本置于显微镜载物台中央，先以低倍镜观察，再用高倍镜观察。结果：有鞭毛的细菌呈穿梭似流星状运动(有明显的方向性)：无鞭毛的细菌呈布朗运动(只在原地颤动而无位置的改变)。二、细菌染色标本的检查染色的第一步是制作涂片。菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布。菌落涂片时，先取生理盐水l滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。涂片时必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。将固定后的涂片进行染色。2.1、革兰染色本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和革兰阴性(红色)两类。2.1.1、试剂(1)结晶紫溶液A液：结晶紫2995％乙醇20mlB液：草酸铵0.8g蒸馏水80ml需在用前24h将A液、B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。(2)碘液碘lg碘化钾2g蒸馏水300ml130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。(3)脱色液：95％乙醇。(4)复染液A．贮存液：沙黄2.5g95%乙醇100mlB．应用液：A液10ml蒸馏水90ml染色方法：(1)．涂片经火焰固定，加结晶紫液染1min，清水冲去染液。(2)．加碘液染Imin，水洗。(3)．加脱色液，不时摇动约10～30s，至无紫色脱落为止，水洗。(4)．加复染液，染．30s，水洗。(5)．干后镜检。2.2、抗酸染色抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，须掌握复染色时间。如果背景过深，影响镜检。奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予注意。抗酸染色有两种常用方法：口碱性复红法又称萋纳(Ziehl—Neelsen)法。口荧光染料金胺O法(也称金胺O—罗丹明B法)。2.2.1碱性复红染色法试剂(1)．萋纳石炭酸复红溶液碱性复红乙醇饱和溶液10ml5％石炭酸溶液90ml(2)、脱色剂*浓盐酸3ml95%乙醇97ml(3)、复染液(吕弗勒美蓝液)130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书美蓝乙醇饱和溶液30ml10％氢氧化钾0.1m1蒸馏水100ml染色方法(1)、涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。染5min(若染色奴卡菌需要加长时间)，水洗。(2)、加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。(3)、加复染液，染0.5～lmin，水洗。(4)、干后镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。*：奴卡菌、放线菌标本染色时，脱色剂改用2％硫酸水溶液。2.2.2、金胺0一罗丹明B染色法染剂1、罗丹明B液：罗丹明B0.1g加蒸馏水100ml：2、0.1％金胺O液：金胺00.1g加蒸馏水95ml，再加入纯石炭酸5ml，混匀：3、3％盐酸酒精；4、稀释美蓝液：吕弗勒美蓝液10ml，加蒸馏水90ml，混匀。方法1、涂片固定后加第1液30～90s。2、弃去第l液后加第2液染15min。3、用第3液脱色l～2min，水洗。4、滴加第4液染30s，水洗，待干，荧光抗酸菌在暗背景中呈现金黄色荧光。2.3、鞭毛染色用于观察菌体上有无鞭毛、鞭毛在菌体上的位置以及鞭毛的数量。在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。鞭毛染色可以直接从平板上挑选菌落，或从斜面上刮菌苔涂片即可，但必须注意动作尽量轻，以免鞭毛从菌体上脱落。菌落应是生长在营养较好的琼脂平板(如血平板、营养琼脂)上的过夜培养物。不可采用有抑制剂的选择性培养基，如中国蓝、麦康凯、SS琼脂等。观察鞭毛时，应耐心寻找整个涂片上的菌细胞，因为并不是涂片上每个细菌细胞上的鞭毛特性及数量都一样，应以鞭毛数量最多的菌细胞为准。鞭毛染色(改良Ryu法)试剂A液：5％石炭酸10ml130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书鞣酸2g饱和硫酸铝钾液10mlB液：结晶紫酒精饱和液应用液：A液10份，B液l份，混合，室温存放。染色方法(1)、玻片的处理：要求用新的载玻片。用前须在95％酒精中浸泡24小时以上。用时从酒精中取出，以干净纱布擦干后使用。(2)、在玻片上滴蒸馏水两滴。一张玻片上可同时制2个涂片。(3)、用接种环挑取血平板上菌落少许，将细菌点在玻片上的蒸馏水滴的顶部。一般只需点一下，仅允许极少量细菌进入水滴，不可搅动，以免鞭毛脱落。(4)、玻片置室温自然干燥。(5)、滴加染液于玻片上，染色。(6)、约10～15min后，用蒸馏水缓慢冲去染液。冲洗时应避免使染液表面的金属光泽液膜滞留在玻片上，影响镜检。(7)、玻片自然干燥后，镜检时应从涂片的边缘开始，逐渐移向中心。寻找细菌较少的视野，鞭毛容易观察。细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。2.4、异染颗粒染色用于白喉棒状杆菌染色，异染颗粒可明显地被显示出来。标本直接涂片或细菌涂片均可用改良阿伯特(A1bert)法染色来观察异染颗粒。试剂甲液：甲苯胺蓝0.15g孔雀绿0.2g冰醋酸lml95％乙醇2ml蒸馏水100ml将各染料先溶于乙醇，然后加入水与冰醋酸的混合液中，充分混匀。静置24h后过滤备用。乙液：碘2g碘化钾3g蒸馏水300ml先将碘化钾加少许蒸馏水(约2m1)，充分振摇，待完全溶解，再加入碘，使完全溶解后，加蒸馏水至300ral。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书染色方法(1)、涂片经火焰固定，加甲液，染3～5min。水洗。(2)、滴加乙液，染lmin。水洗。(3)、干后镜检，菌体呈绿色，异染颗粒呈蓝黑色。2.5、墨汁荚膜染色用于观察菌体有无荚膜结构，借此鉴定某些菌，如新型隐球菌。传统的方法是用印度墨汁，但目前国内无售。常规工作可以用墨汁或墨水代替，但应注意颗粒不能太粗，否则影响观察结果。有人用5％黑色素(nigrosin)水溶液做染料，效果较好。试剂印度墨汁或5％黑色素水溶液。染色方法将标本与1滴染色液在载玻片上混合，加上盖玻片，轻轻压一下，使标本混合液变薄。在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞。找到后，转换高倍镜确认。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—007文件名称细菌生化反应鉴定及其它试验操作规程执行时间（第四版）2012.01.01细菌生化反应鉴定及其它试验操作规程1、氧化一发酵试验(O／F试验)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型。可以进行无氧降解的，称为发酵型(发酵型细菌在有氧无氧的条件下均能分解葡萄糖)。不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。方法：将待检细菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌石蜡(或其它矿物油)，高度不少于lcm。35℃，48小时或更长。结果：两支培养基均无变化为产碱型或不分解糖型；两支培养基均均产酸为发酵型。若仅不加石蜡的培养基产酸为氧化型。应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵细菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者均为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌问的鉴别。2、β—半乳糖苷酶(ONPG)试验原理：细菌产生半乳糖苷酶→分解邻-硝基酚β→D—半乳糖苷(无色)→邻—硝基酚(黄色)结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20-30分钟内显色。应用：主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。3、七叶苷分解试验原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应，生成黑色的化合物。结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性。应用：主要用于D群链球菌与其它链球菌的鉴别。前者为阳性，后者为阴性。也可用于革兰阴性菌与厌氧菌的鉴别。4．甲基红试验原理：糖代谢分解葡萄糖→丙酮酸→甲酸、乙酸、乳酸等，加入甲基红。红色结果：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳性。黄色为阴性。应用：主要用于鉴别大肠杆菌与产气杆菌，前者阳性，后者阴性。此外肠杆菌科中变形杆菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属和志贺菌属等阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性。5、VP试验130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书原理：分解葡萄糖→丙酮酸，脱羧→乙酰甲基甲醇，在碱性环境中，氧化→二乙酰，与精氨酸中的胍基→红色化合物。结果：在数分钟内出现红色为阳性，如无红色出现且于35"C4h后仍如故者即为阴性。应用：本试验与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。6、吲哚(靛基质)试验原理：细菌分解蛋白胨中的色氨酸→吲哚(靛基质)吲，加入对位二甲基苯甲醛→红色玫瑰吲哚。结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。应用：主要用于肠杆菌科的鉴定。6、尿素分解试验原理：尿素酶(尿酶)，分解尿素→产生大量的氨，培养基变碱。结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变色为阴性。应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定，奇异变形杆菌、普通变形杆菌为阳性，克雷伯菌属、枸椽酸菌属、雷氏普罗威登菌和摩根摩根菌为阳性。7、苯丙氨酸脱氨酶试验原理：苯丙氨酸脱氨酶使脱去氨基→苯丙酮酸，加入Fecl3→绿色.结果：出现绿色为阳性，应立即观察结果，延长会引起退色。应用：主要用于肠杆菌科的鉴定，变形杆菌属、普罗威登斯菌和摩根摩根菌均为阳性。肠杆菌科其它菌均为阴性。8、氨基酸脱羧酶试验原理：氨基酸脱羧一胺，CO2→培养基变碱，黄色→紫色。结果：对照管应呈黄色，测定管呈紫色(指示剂为溴甲酚紫)为阳性。应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。9、氧化酶试验原理：氧化酶是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。首先使细胞色素C氧化一氧化对苯二氨氧化。粉红色→深红色→紫黑色结果：细菌在与试剂接触10秒内呈紫色为阳性。为保证结果准确性，应作阴、阳性对照。应用：主要用于肠杆菌科与假单胞菌的鉴别，前者为阴性。后者为阳性。10、过氧化氢酶试验(触酶试验)原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。试剂：3％过氧化氢溶液130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书方法：取菌置于洁净的试管或玻片上，然后滴加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培养基中，立即观察结果。结果：有大量气泡产生为阳性。不产生气泡为阴性。应用：革兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均阳性。而链球菌均阴性。1l、硝酸盐还原试验原理：包括两个过程：一是在合成过程中，硝酸盐还原为亚哨酸盐和氨。再由氨转化为氨基酸和细菌内其它含氮化合物。二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的受氢体，能使硝酸盐还原的细菌从哨酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其它还原性产物。结果：出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色变化反应，可能是①硝酸盐没有被还原，试验阴性。②硝酸盐被还原为氨和氮等其它产物而导致假阴性，这时应加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表明为试验为假阴性。应用：本试验在细菌鉴定中应用广泛。12、凝固酶试验原理：致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶，一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，可用玻片法测出。另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶，可用试管法测出。方法：玻片法：取人血浆和盐水各一滴，分别置于洁净的玻片上，挑取被检菌分别与血浆和盐水混合。试管法：取2支试管，各加0．5m1人血浆，挑取被检菌和阳性对照菌分别加入人血浆中混匀。于37℃水浴3-4小时。结果：玻片法以血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象判为阳性；试管法以血浆凝固为阳性。应用：作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。13、CAMP试验原理：B群链球菌能产生CAMP因子，可促进葡萄球菌的β-溶血素溶解红细胞活性，因此在两菌的交界处溶血力增加。出现矢形(半月形)的溶血区。结果：在两划线交界处出现箭头样的溶血区为阳性应用：在链球菌中，只有B群链球菌CAMP试验阳性。14、O/129抑菌试验原理：O/129(二氨基喋啶)对弧菌属、邻单胞菌属细菌有抑制作用，而对气单胞菌无抑制作用。方法：将待检菌均匀涂布于碱性琼脂平板上，镊取O/129纸片(含药40ug)贴于平板上，35℃，18-24h，观察结果。结果：出现抑菌环为敏感，无抑菌环为耐药应用：弧菌属、邻单胞菌属对O／129敏感，而气单胞菌属耐药130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书15、杆菌肽试验原理：A群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感，而其它链球菌绝大多数对其耐药。16、奥普托欣试验原理：几乎所有的肺炎链球菌对Optochin敏感，而Optochin对其它链球菌则无抑制作用17、．H2S试验原理：有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸(如胱胺酸、半胱胺酸)产生硫化氢，硫化氢遇到铅或亚铁离子，则生成黑色的硫化铅或硫化铁。结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。应用：主要用于肠杆菌科属或种的鉴定。18、触酶试验(过氧化氢酶试验)试剂：3oAH202溶液，置棕色瓶内于4℃阴暗处保存。方法：先挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上，然后滴加3％过氧化氢溶液1～2滴。静置之，lmin内产生大量气泡的为阳性，不产生气泡的为阴性。19、葡萄球菌凝固酶和凝聚因子试验葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。试管法凝固酶试验称为葡萄球菌凝固酶，玻片法为检测凝聚因子。1．凝聚因子试验：取1滴蒸馏水于洁净的玻片上，用接种环挑取待检菌一环置于蒸馏水中，制成浓的菌悬液，无自凝现象。然后加一环家兔血浆混合，10s内观察结果，出现明显细菌凝块为阳性，否则为阴性。如超过10s可出现假阳性，有10％一15％金黄色葡萄球菌呈假阴性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。操作过程中的注意点：(1)10s内观察结果。(2)必须制备浓厚的均匀菌悬液。(3)用EDTA抗凝的兔血浆为最好。(4)加血浆后不要再混搅，以免细菌凝块分散变小。(5)生长在高盐培养基上的菌落可出现自凝或假阳性。2．葡萄球菌凝固酶试验：用生理盐水将血浆4倍稀释，取0．5ml。然后挑取3～5个菌落于稀释血浆中，成浓菌悬液。置37℃水浴，3～4h后读取结果，凝固者为阳性。若阴性，继续观察到24h，不凝固者为阴性。试验应同时作阳性、阴性对照。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书试管法葡萄球菌凝固酶试验阳性者，应见到明显的纤维蛋白凝胶块，出现羊毛状或纤维状沉淀物并非真正凝固，应判为阴性。中间型葡萄球菌、猪葡萄球菌需要较长时间孵育，才可出现阳性。凝固酶试验应考虑下述情况：①某些金黄色葡萄球菌产生溶纤维蛋白酶，溶解纤维蛋白凝块。②所用血浆缺乏纤维蛋白原。③试验菌株不纯。20、新生霉素耐药试验方法：挑取待检菌菌落数个，制成相当0.5号麦氏管(McFarland)浓度菌液，棉拭子’浸透，挤去多余液，均匀涂在M—H平板上，贴上含5ug／片的新生霉素纸片，35℃孵育16～20h，抑菌环直径≤16为阳性(耐药)。试验时应以金黄色葡萄球菌ATCC25923做阴性(敏感)对照，以确认纸片是否有效。21、氧化酶(改良法)试验试剂：四甲基对苯二胺(TMPD)(Tetramethylphenylenediamine)6.0g二甲基亚砜(DMSO)(Dimethysulfoxide)100.oml溶解TMPD于DMSO中，置于避光玻塞瓶中，可在室温中保留几个星期。方法：被检菌株移种于7％羊血琼脂上，30℃需氧条件下孵育15～18h，刮取菌落涂布于无色滤纸片上，加l滴上述试剂，阳性者在2min内呈深蓝色。若被测菌株移种在蛋白胨酵母浸出液琼脂上，至少孵育3天以上，才可检测，阳性反应5～10min出现。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—008文件名称细菌的接种与培养方法操作规程执行时间（第1版）2012.01.01细菌的接种与培养方法操作规程一、细菌的接种根据待检标本的来源、培养目的及所用培养基的性状，采用不同的接种方法。l、平板画线分离法（1）、连续画线分离法此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许，于平板l/5处密集涂布，然后回来作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。（2）、分区画线分离法此法适用于杂菌较多的标本。先将标本均匀涂布于平板边缘一小区(约占平板1/5)，再在二、三区依次连续画线，每画线一区均将接种针灭菌一次。每一区的划线均接触上一区的接种线1～2次。以获得单个菌落。2、斜面接种法该法主要用于单个菌落的纯培养。用灭菌接种环取菌少许，从培养基斜面底部向上划一直线，然后从底部向上作连续曲线画线。一直画到斜面顶端。3、液体接种法多用于一些液体生化试验管的接种。用灭菌接种环取菌少许，在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻研磨，使细菌混合于液体中。4、穿刺接种法主要用于半固体培养基、明胶及双糖铁的接种。用接种针取菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针原路退出。5、倾注平板法临床上主要用于尿液等标本的细菌计数。将标本经适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，倾入已经溶化并冷却至45℃左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。6、涂布接种法常用于纸片药物敏感性测定，也可用于被检标本的细菌计数。加定量的被检菌液于琼脂平板表面，然后用灭菌的L型玻璃棒反复涂布几次，使被检菌均匀分布在琼脂平板表面。然后贴上药敏纸片培养，或直接培养观察结果。二、细菌培养方法130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书根据临床初步诊断及待检细菌的种类，可选用不同的环境进行培养。常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。1、需氧培养法本法是临床细菌室常用的培养方法，即将已经接种好的平板、斜面和液体培养基等。置于35℃温箱中孵育18～24小时。2、二氧化碳培养法本室用Co2孵箱将已接种好的培养基置于Co2孵箱内培养。3、厌氧培养(暂时未开展)三、分离及纯化法3.1、分离是指从原材料或多种细菌的混合培养物中将各种细菌彼此独立地分离开，以得到纯的单一菌株，技术步骤如下：作纯培养分离时，一般只用一只完整的琼脂平板。涂划多采用分区划线法，在一只平板中可划3～5个区。划法有两种：3.2、从临床标本分离细菌所含菌数相对较少时，可用接种环取标本涂布在平板一角边缘，然后从此区开始划线至1／3平板，为第一区，再在2、3区依次划线，每划完一个区域均将接种环灭菌一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线均接触上一区域的接种线1～2次，使菌量逐渐减少以获得单个菌落。3.3、快速划线分离法：采用快速划线使一接种环标本能分离出单个菌落，这与标本的菌量及操作者的技能有很大关系。3.4、纯化是指欲获得大量纯培养物的方法，所用平板大小可根据需要的菌量而定。方法是将一单个菌落或将相同的菌落作大量密集涂划于平板上而获得大量纯的培养物。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—009文件名称支原体培养、鉴定、计数及药敏操作规程执行时间（第1版）2012.01.01支原体培养、鉴定操作规程1．原理及依据标准：支原体分离鉴定培养基用于泌尿生殖道支原体(解脲支原体Uu和人型支原体肺)的检测与诊断。当有Uu和Mh生长，分解尿素和精氨酸引起PH上升，使以酚红为指示剂的培养基由黄转红。依据珠海迪尔生物工程有限公司生产的试剂盒说明书。2．标本的采集：2.1、男性：用特别细的无菌棉拭子沾取无菌生理盐水少许深入尿道口内2～2．5cm处取分泌物，前列腺液亦可用沾取无菌生理盐水的无菌棉拭子尽量多的沾取。2.2、女性：用沾取少许无菌生理盐水的棉拭子取宫颈内口1～2cm处单层柱状上皮细胞，取样拭子不可碰阴道壁。2.3、支原体对干、热抵抗力差，标本采集后应接种运输培养基送检：将已采样的拭子放置入运输培养基小瓶内，搅动数次后将拭子于瓶壁上尽量旋转挤压其中的液体，取出拭子并盖上瓶塞。支原体在此培养基中放置室温可保存8小时。在4℃条件下可保存24小时。中段尿标本可直接送检。2.4、整个采样过程应注意无菌操作。若送检标本不是接种运输培养基而直接用采样棉拭子送检则为不合格标本。随原验单一同退回重新采取标本同时在检验系统“标本留言”栏注明以免收其费。3、标本接种：(本实验应注意无菌操作，避免污染杂菌)3.1、取出培养基，放置接近室温，并在瓶盖上编号。3.2、将采集的标本拭子插入培养瓶中，在靠近液面上方的瓶壁挤示压旋转拭子数次，使拭子中标本渗入到肉汤中：若为液体标本，取200u1加入培养基中；若为中段尿，经2000转／分离心10分钟取沉渣100ul加入培养基中。3.3、盖上瓶盖，置35—37℃孵箱，在24—48小时分别观察结果。4、结果判读：4.1、培养基变红，判断阳性，培养基黄色并清亮，判断阴性。24小时结果：130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ-010文件名称血液感染病原体检验操作规程执行时间（第1版）2012.01.01血液感染病原体检验操作规程1、标本采集(1)、采集时间和次数血标本一般应在病人发热初期或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集做细菌培养，提高阳性率需连续三次采血进行培养。(2)、采血部位及抽血量一般抽取肘静脉血。采血量为成人5-10ml，儿童为3～5ml。(3)、结果观察：培养72小时后若肉眼或自动血液培养仪报告仍未细菌生长，则盲目移种一次，仍未细菌生长，向临床发出一级初级报告：“血液经72小时培养无细菌生长”：为避免漏诊，应在培养5天、7天时再作盲目移种培养。疑为亚急性细菌性心内膜炎、真菌血症等时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长方可报告为阴性。2、检验程序血液标本（无菌采集）72小时盲目移种（初级报告）传统方法或自动血液培养仪指示有细菌生长涂片、染色、镜检需氧培养及CO2培养直接药敏试验（血平板、巧克力琼脂）观察菌落涂片、染色、镜检纯培养血清学鉴定ATBExpression报告130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书3、血培养瓶中不同表现为不同细菌生长：浑浊并有凝无块金黄色葡萄球菌均匀浑浊，发酵葡萄糖产气多为革兰阴性菌微浑浊，有绿色变化肺炎链球菌表面有菌膜，培养基清晰，底层容血枯草杆菌表面有菌膜，膜下有绿色浑浊铜绿假单胞菌血细胞层上面有颗粒状生长，自上而下的溶血溶血性链球菌4、血液及骨髓标本中常见病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌肺炎链球菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌伤寒及其它沙门菌表皮葡萄球菌变形杆菌溶血性链球菌产气肠杆菌粪肠球菌肺炎克雷伯氏菌铜绿假单胞菌粪产硷杆菌沙雷氏菌流感嗜血杆菌布鲁氏菌5、报告结果5.1、在血液中检出沙门氏菌，必须以血清凝集试验为依据报告血清型。5.2、血液正常情况下应是无菌的，如培养出细菌即为致病菌，应报细菌的种属及药敏试验结果。5.3、血培养阳性均作为危急值报告130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—011文件名称中枢神经系统感染病原体检验操作规程执行时间（第1版）2012.01.01中枢神经系统感染病原体检验操作规程l、标本采集以无菌方法采集脑脊液2～5ml，盛于无菌瓶中送检。2、直接检查脑脊液可直接涂片、革兰染色或抗酸染色等，然后镜检。无色透明的脑脊液，应作离心取沉淀物涂片、染色镜检。3、检验步骤：3.1、一般细菌涂片检查除结核性脑膜炎外，由其它细菌引起的化脓性脑膜炎，脑脊液明显混浊，可直接涂片，革兰染色镜检。无色透明的脑脊液，应离心后涂片、染色、镜检，根据染色及形态特征可初步提示细菌的种类。结核分枝杆菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物(3000r／min。30min)作抗酸染色。新型隐球菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色。3.2、分离培养用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血平板、巧克力平板，巧克力平板应置于CO2环境中35℃培养18～24小时。脑脊液也可直接注入血培养瓶。4、检验程序脑脊液直接涂片分离培养（取离心沉淀）不染色标本染色标本血平板、巧克力沙氏培养基（5%CO2环境）血平板动力试验革兰染色抗色染色墨汁染色一般细菌新生隐球菌等脑膜炎奈瑟菌一般细菌结核分枝杆菌脑膜炎奈瑟菌ATBExpressionATBExpression鉴定药敏试条鉴定药敏试条初步报告报告130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书5、脑脊液培养常见病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌金黄色葡萄球菌脑膜炎奈瑟菌A、B群链球菌卡他布兰汉菌肺炎链球菌流感嗜血杆菌结核分支杆菌肠杆菌科菌种产单核李斯特菌脑膜败血性黄杆菌新型隐球菌假单胞菌白色念珠菌130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—012文件名称创伤和外科感染病原体检验操作规程执行时间（第1版）2012.01.01创伤和外科感染病原体检验操作规程三、创作和外科感染1、标本采集(1)、开放性感染分泌物或脓液先用无菌生理盐水冲洗表面，用2支无菌棉拭子取创伤或溃疡深处及分泌物送检，一支为涂片用，一支为培养用。(2)、封闭性脓肿常局部消毒后，用注射器抽取脓液置于无菌试管内送检。(3)、对放线菌标本，常用无菌棉拭子挤压瘘管，选取流出脓液中的“硫磺样颗粒”置于无菌瓶内送检。胸腔、腹腔、心包腔和滑膜腔等标本采集，应严格按无菌操作程序，由临床医生进行。检验程序脓汁、分泌物、坏死组织等直接涂片分离培养革兰染色通平板、Mac抗酸染色巧克力平板（5%CO2）镜检观察、挑取菌落涂片染色镜检、氧化酶或触酶等初步报告ATBExpression鉴定、药敏试条血清学试验报告脓汁及病灶分泌物培养常见病原茵革兰阳性菌革兰阴性菌葡萄球菌肠杆菌科细菌链球菌假单胞菌炭疽芽孢杆菌拟杆菌破伤风芽孢杆菌腐败谢瓦纳拉菌产气荚膜梭菌嗜血杆菌结核分枝杆菌产碱杆菌放线菌、奴卡菌弧菌属细菌念珠菌气单胞菌130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—013文件名称下呼吸道感染病原体检验操作规程执行时间（第1版）2012.01.01下呼吸道感染病原体检验操作规程1、标本的采集有自然咳痰法、咽拭子采集法、支气管镜下采集法及分泌物标本2、标本的直接检查(1)、将痰标本涂片后待干，固定、染色，或直接湿片镜检，对病原学早期、初步诊断有重要意义。并向临床发出初级报告。(2)、一般认为合格的痰标本为：以白细胞>25个/低倍镜视野，而上皮细胞＜10个/低倍镜视野。采集合格标本对细菌的诊断尤为重要。3、分离培养与鉴定(1)、一般要求下呼吸道感染培养的细菌浓度应>107CFU/ml，可视为病原菌，<104CFU/ml可视为污染菌。若介于两者之间105--106CFU／ml时，要连续分离培养两次以上仍为105～106CFU／ml时，亦认为是病原菌。(2)、检验程序痰及呼吸道分泌物标本涂片、染色、镜检分离培养药敏试验血平板、巧克力琼脂、Mac初步报告（一级报告）菌落观察涂片、染色、镜检纯培养细菌珠海迪尔鉴定、药敏试条报告最终报告(三级报告)130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书4、下呼吸道标本培养常见病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌金黄色葡萄球菌脑膜炎奈瑟氏菌化脓性链球菌流感嗜血杆菌肺炎链球菌肠杆菌科细菌结核分支杆菌非发酵菌白喉棒状杆菌嗜肺军团菌假丝酵母菌130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—014消化道感染病原体检验操作规程执行时间（第1版）2012.01.01消化道感染病原体检验操作规程1、粪便标本中常见病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌金黄色葡萄球菌伤寒及其它沙门菌结核分支杆菌志贺菌属难辨梭菌致病大肠埃希菌白色念珠菌(ETEC、EPEC、EIEC、EHEC)弧菌属菌种气单胞、邻单胞菌种小肠结肠炎耶尔森菌弯曲菌2．标本采集2.1、自然排便采集法自然排便后，挑取脓血、粘膜部分的粪便2～3g，液体粪便取絮状物置于大便培养管或增菌液中送检。2.2、直肠肛管法用大便培养用的肛管直接插入肛门成人4～5cm，幼儿2～3cm，轻轻在直肠内旋转数次，目的是使直肠表面粘液能通过肛管孔进入肛管内。然后拔出放入大便培养管中送检。3、检验步骤3.1、涂片检查粪便标本因各种正常菌群含量甚多而一般不作直接涂片找致病菌，只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查。3.2、各项的涂片检验均按染色方法进行，但大便检查霍乱弧菌有其处理程序：3.2.1、染色检查：将米泔样的标本涂2张片用乙醇固定后染色，观察弧菌有无呈鱼群状排列。3.2.2悬滴检查取患者粪便制成悬滴涂片，霍乱弧菌和EItor弧菌均呈现极活泼的穿梭状运动。3.2.3制动检验运动活泼的弧菌涂片加人霍乱弧菌诊断血清后，在显微镜下观察，若原运动活泼的现象停止，为制动试验阳性。3.3、大便标本的培养目的是培养致病菌或追踪病人有否菌群失调现象，无特殊要求作一般致病菌培养的标本接种麦康凯、SS平板各一个。3.4、菌群失调的细菌学检验：选用多种培养基包括SS、麦康凯、血平板、高盐甘露醇盐琼脂平板、Campy—BA血琼脂平板和沙氏琼脂等，目的是使更多的菌群得到生长，以利于检查肠道的细菌情况。3.5、霍乱弧菌的培养，直接取患者米泔样粪便0.5ml，接种于碱性蛋白胨水增菌液和4号平板，35℃培养6～8h，再转种一只4号平板。35℃培养18～24h后形成较大、菌落中间为灰黑色、有光泽、隆起、湿润的菌落，如泼水状。挑取可疑菌落5～10个与霍乱多价“0”诊断血清作玻片凝集试验，如为阳性，则立即报告，并将可疑菌送内江市疾病控制中心确认。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书3.7、真菌培养：真菌性腹泻多继发于抗生素治疗后，常见的真菌腹泻多由白色假丝酵母菌引起。将标本接种于沙氏平板及血平板上，置27℃和35℃培养18～24h，根据形态染色、菌落特征，做ATBExpression真菌鉴定和药敏试验。4、检验程序粪便或肛拭子增菌培养分离培养涂片检查沙门氏菌、志贺氏菌35℃18—24h霍乱弧菌SS、麦康凯平板革兰氏染色观察动力沙氏平板、血平板等菌落观察涂片检查血清学鉴定珠海迪尔鉴定、药敏试条确定报告4、粪便标本中常见病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌金黄色葡萄球菌伤寒及其它沙门菌结核分支杆菌志贺菌属难辨梭菌致病大肠埃希菌白色念珠菌(ETEC、EPEC、EIEC、EHEC)弧菌属菌种气单胞、邻单胞菌种小肠结肠炎耶尔森菌弯曲菌130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—015文件名称尿路感染病原体检验操作规程执行时间（第1版）2011.01.01尿路感染病原体检验操作规程1．尿液培养常见病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌金黄色葡萄球菌淋病奈瑟菌肠球菌大肠埃希菌A群链球菌变形杆菌腐生葡萄球菌肺炎克雷伯菌表皮葡萄球菌产气肠杆菌结核分支杆菌沙门菌种铜绿假单胞菌沙雷菌2、标本收集2.1、尿液标本的采集可采用多种方法：有中段尿采集法、膀胱穿刺法、肾盂尿采集法，而常规是取中段尿作细菌培养。2.2、取中段尿作培养时先要进行前尿道的清洗消毒，以免前尿道寄生菌群污染标本。2.3、如采用其他方法收集标本，必须由临床医生根据临床诊断需要而执行收集术，并在检验单上写明。3、检验步骤：3.1、涂片检查3.1.1、一般细菌及淋病奈瑟菌涂片：以无菌操作吸取尿液10ml，3000r/min离心15min，去上清液，取沉淀涂片，革兰氏染色镜检，作初步报告。如查见革兰氏阴性双球菌，呈肾形位于细胞内或细胞外，报告“找到革兰阴性双球菌，存在于细胞内外，形似淋病奈瑟菌”。如未查见上述细菌可报告“未发现革兰阴性双球菌”。3.1.2、念珠菌涂片：取尿液沉淀物放于清洁玻片上，覆以盖玻片，制成涂片，用高倍镜检查。革兰染色后，如发现发亮的芽生孢子和假菌丝，就可报告“霉菌孢子及菌丝”。3.1.3、结核分枝杆菌：取尿液10ml，4000r/min离心沉淀30min，取沉淀物涂片，抗酸染色，镜检。如找到红色杆菌，可报告“发现抗酸杆菌”。3.2、一般细菌培养(细菌计数)：用定量接种环取尿液10ul接种血平板，35℃130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书培养18～24小时，观察有无细菌生长，并计数菌落数，乘以1000，求出每毫升尿液的菌落数。根据菌落特征、涂片染色结果，选择相应的鉴定试条及药敏试条进行鉴定和药敏试验，如培养48小时无菌生长，即报告“无菌生长”。3.3、特殊菌培养：淋病奈瑟菌培养，选用专用巧克力琼脂平板，接种后放入二氧化碳环境中培养。4、结果报告：4.1、尿液细菌培养检查必须报告细菌的种属、菌落计数(cfu/m1)及药敏结果。4.2、革兰氏阴性菌落计数大于105cfu/ml，革兰氏阳性菌计数大于104cfu/ml，真菌大于103cfu/ml有诊断意义。4.3、一般常规结核培养要8周方能报告。阳性结果可提前报告。但不做菌落计数只报告“抗酸杆菌生长，，的报告，如做了进一步的分型和鉴定，才能报告有××型结核杆菌生长。4.4、用专用培养基培养淋球菌经鉴定可直接报告有淋球菌生长但不做菌落计数，如涂片发现细胞内或外有革兰氏阴性双球菌可报告“发现革兰阴性双球菌”。4.5、如尿液培养同时有三种或以上细菌生长时，可视为污染标本，建议重留送检。6、检验程序尿标本离心、沉淀涂片染色（革兰及抗酸染色）分离培养直接药敏试验（一级报告）（二级报告）血平板、Mac涂片染色镜检纯培养鉴定、药敏试条最终报告（三级报告）130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—016文件名称脓汁及病灶分泌物细菌学检验操作规程执行时间（第1版）2012.01.01脓汁及病灶分泌物细菌学检验操作规程1、脓汁及病灶分泌物培养常见病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌葡萄球菌肠杆菌科细菌链球菌假单胞菌炭疽芽孢杆菌拟杆菌破伤风芽孢杆菌腐败谢瓦纳拉菌产气荚膜梭菌嗜血杆菌结核分枝杆菌产碱杆菌放线菌、奴卡菌弧菌属细菌念珠菌气单胞菌2、标本采集：标本由临床医师行无菌操作术采集，但应注意以下几点：2.l、闭锁性脓肿疑为厌氧菌感染时，取材后立即将空气排空，同时针尖插入橡皮塞内防止空气进入，连同注射器一并送检。2.2、开放脓肿、脓性分泌物可在患部直接用棉拭或纱布擦抹，如为瘘管亦可在无菌操作下取组织碎片分散在无菌盐水中。2.3、烧伤创面的分泌物，用灭菌棉拭取多部位创面的脓液或分泌物，置无菌试管中送检。2.4、取尿道分泌物必须先清洗、消毒尿道后用挤压法使分泌物从尿道溢出用无菌生理盐水浸湿拭子直接采集标本。如女性做宫颈分泌物细菌培养，应尽量避免杂菌污染。2.5、组织脏器碎片的收集，先要消毒表面的污染菌，后用无菌刀切开，取内容物及碎片分散于无菌生理盐水中，然后增菌、接种，如活体微量标本可直接放人肉汤增菌培养基中增菌。3、检验步骤3.1、涂片检查：脓汁及分泌物标本均应做涂片检查。涂片做革兰氏染色镜检，根据形态和染色特点，可报告“找到革兰氏×性菌，形似××菌’’或报告“未发现细菌”。涂片检查包括涂片找细菌、淋球菌、酵母菌等。3.2、培养普通细菌培养：标本接种血平板、巧克力平板和麦康凯平板各一只，35℃培养18～24小时，根据菌落特性和形态染色，选择相应的鉴定及药敏试条进行鉴定和药敏试验，如培养48小时无菌生长，即报告130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书菌生长”。4、报告结果4.1、涂片报告发现革兰氏×性××菌，淋球菌要报告在白细胞内外是否发现革兰氏阴性双球菌。4.2、对正常无菌部位的感染，从脓汁或分泌物分离到细菌，均有临床意义，按分离鉴定结果报告细菌名称及药敏试验。5、操作流程脓汁、分泌物涂片染色需氧培养(革兰氏染色、抗酸染色等)35—37℃18—24小时（血平板、巧克力、麦康凯）观察菌落初步报告涂片镜检纯培养血清学试验鉴定、药敏确定报告130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—017文件名称生殖系统标本的处理执行时间（第1版）2012.01.01生殖系统标本的处理1、生殖系统标本培养的主要病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌葡萄球菌淋病奈瑟菌肠球菌大肠埃希菌化脓性链球菌拟杆菌厌氧链球菌铜绿假单胞菌结核分枝杆菌变形杆菌2、标本收集：阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由临床医师采集，收集于无菌试管内送检。3、涂片检查：3.1、一般细菌、淋病奈瑟菌和杜克雷嗜血杆菌：革兰染色镜检作初步报告。3.2、结核杆菌：抗酸染色镜检后作初步报告。4、检验过程：4.1、用棉拭子划完第一区后，用接种环继续分区划线，35℃普通培养箱孵育18～24小时，如有要求培养淋球菌和真菌则加种专用培养基。4.2、流程：标本需氧培养涂片厌氧培养分离培养涂片检查血平板巧克力（CO2环境）革兰氏染色厌氧血平板、巧克力麦康凯平板35℃孵育抗酸染色镜检平板35℃、48小时分离纯化涂片染色鉴定、药敏鉴定、药敏血清学试验血清学试验确定报告5．结果报告：报告细菌鉴定及药敏试验结果。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—018文件名称超广谱β—内酰胺酶(ESBLs)检测执行时间（第1版）2012.01.01超广谱β—内酰胺酶（ESBLs）检测1、NCCLS推荐的纸片扩散法确诊试验：按NCCLSM2-A2的纸片琼脂扩散法试验步骤进行，并遵守以下基本步骤。1)培养基为MHA，菌落直接悬液法，菌悬液为0.5麦氏单位。2)在同一个MHA平板上贴两组药物纸片。(头孢他啶30ug/片，头孢他啶/棒酸30/10ug/片)和(头孢噻肟30ug/片，头孢噻肟/棒酸30/10ug/片)3)35℃，空气条件下，孵育16—18h。4)结果判断：任何一组药敏纸片或两组药敏纸片中的加有棒酸的药敏纸片抑菌圈直径减去不加棒酸的药敏纸片菌圈≥5mm即为ESBLs。5)阴性质控：大肠埃希菌ATCC25922；加棒酸药片减不加棒酸药片抑菌圈直径≤2mm。阳性质控：肺炎克雷伯菌ATCC700603，加棒酸药片减不加棒酸药片抑菌圈直径≥5mm(CA2，CAZ／CLAV)，I3m(CTX，CTX／CLAV)。2．稀释法ESBL确诊试验：按NCCLSMT-A2的操作程序进行，严格按下基本要求操作。1)药物浓度范围为CAZ0.25～128ug／m1，CAZ／CLAV，0.25／4～128／4ng／m1，CTX0.25～64ug／ml，CTX／CLA0.25／4～64／4ug／m1，两组药物需同时试验。2)接种阳离子增强的MH肉汤。3)35℃，空气，孵育16～20h。4)结果判断：两组药物中的任何一组或两组，加有CLAV的与不加CLAV的MIC值降低3个以上对倍稀释度即判为ESBL。5)质控菌：大肠埃希菌ATCC25922生长；肺炎克雷伯菌ATCC700603生长。临床意义：对青霉素、头孢菌素和氨曲南治疗无效。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—019文件名称一、消毒灭菌效果监测执行时间（第1版）2012.01.01一、消毒灭菌效果监测医院必须对消毒、灭菌效果定期进行监测。灭菌合格率必须达到100％；不合格物品不得进入临床使用部门。1.1、使用中的消毒剂、灭菌剂：应进行生物和化学监测。生物监测：消毒剂每季度一次，其细菌含量必须<100cfu／ml，不得检出致病性微生物：灭菌剂每月监测一次，不得检出任何微生物。化学监测：应根据消毒、灭菌剂的性能定期监测，如含氯消毒剂、过氧乙酸等应每日监测，对戊二醛的监测应每周不少于一次。应同时对消毒、灭菌物品进行消毒、灭菌效果监测，消毒物品不得检出致病性微生物，灭菌物品不得检出任何微生物。1.2、紫外线消毒：应进行日常监测、紫外灯管照射强度监测和生物监测。日常监测包括灯管应用时间、累计照射时间和使用人签名。对新的和使用中的紫外灯管内进行照射强度监测，新灯管的照射强度不得低于100uW／cm2。使用中灯管不得低于70uw／cm2照射强度监测应每半年一次、生物监测必要时进行，经消毒后的物品或空气中的自然菌应减少90.00%以上，人工染菌杀灭率应达到99.90％。五、各种消毒后的内窥镜(如胃镜、肠镜、喉镜、气管镜等)及其它消毒物品：应每季度进行监测，不得检出致病微生物。1.3、各种消毒后的内窥镜(如胃镜、肠镜、喉镜、气管镜等)及其它消毒物品：应每季度进行监测，不得检出致病微生物。1.4、各种灭菌后的内窥镜(如腹腔镜、关节镜、胆道镜、膀胱镜、胸腔镜等)、活检钳和灭菌物品：必须每月进行监测，不得检出任何微生物。1.5、血液净化系统；必须每月对入、出透析器的透析液进行监测。当疑有透析液污染或有严重感染病例时，应增加采样点，如原水口、软化水出口．反渗水出口。透析液配液口等，并及时进行监测。当检查结果超过规定标准值时，须再复查。标准值为：透析器入口液的细菌菌落总数必须≤200cfu/ml，出口液的细菌的落总数必须≤2000cfIu／ml，并不得检出致病微生物。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—020文件名称二、环境卫生学监测执行时间（第1版）2012.01.01环境卫生学监测环境卫生学监测：包括对空气、物体表面和医护人员手的监测。医院应每月对手术室、重症监护病房／室(ICU)、产房、母婴室、新生儿病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供应室无菌区、治疗室、换药室等重点部门进行环境卫生学监测。当有医院感染流行，怀疑与医院环境卫生学因素有关时，应及时进行监测。环境类别范围标准空气cfu/m3物体表面Cfu/cm2医护人员手cfu/cm2Ⅰ类层流洁净手术室、层流洁净病房≤10≤5≤5Ⅱ类普通病房、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌室、烧伤病房、重症监护病房≤200≤5≤5Ⅲ类儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁室、急诊室、化验室、各类普通病房和房间≤500≤10≤10Ⅳ类传染病科及病房—≤15≤152.1、进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品必须无菌。2.2、接触粘膜的医疗用品：细菌菌落总数应≤20cfu/g或100cm2；致病性微生物不得检出。2.3、接触皮肤的医疗用品细菌菌落总数应≤20cfu/g或100cm2；致病性微生物不得检出。2.3、使用中消毒剂细菌菌落总数应≤100cfu/ML；致病性微生物不得检出。2.4、无菌器械保存液：必须无菌。污物处理卫牛标准：污染物品无论是回收再使用的物品，或是废弃的物品：必须进行无害化处理。不得检出致病性微生物。在可疑污染情况下，进行相应指标的检测。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—021文件名称三、采样及检查原则执行时间（第1版）2012.01.01三、采样及检查原则采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测：送检时间不得超过6h，若样品保存于0—4℃条件时。送检时间不得超过24h。3.1、空气采样及检查方法3.1.1、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。3.1.2、采祥高度与地面垂直高度80—150cm。3.1.3、布点方法室内面积≤30M2，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙lm处各取一点；室内面积>30m2，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。3.1.4、采样方法用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后立即送检培养。3.1.5、结果计算空气细菌菌落总数(cfu／m3)＝式中：A一平板面积。cm2：T一平板暴露时间，minN一平均菌落数，cfu／平皿。3.2、物体表面采样及检查方法3.2.1、采样时间选择消毒处理后4h内进行采样。3.2.2、采样面积被采表面<100cm2，取全部表面；采表面≥loocm2，取100cm2。3.2.3、采样方法用5×5cm2的标准灭菌规格板：放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水平样液的棉拭子1支，在规格权内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭于。连续采样4个规格板面积：剪去手接触部分，将棉拭于放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2.4、结果计算物体表面细菌菌落总数(cfu／cm2)＝……（A2）3.3、医护人员手采样及检查方法3.3.1、采样时间在接触病人、从事医疗活动前进行采样。3.3.2、采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次(一只手涂擦面积30cm2)，并随之转动采样棉试子，剪去手接触部位；将棉试子放入装有10ml采样液的试管内。采样面积按平方厘米(cm2)计算。3.3.3、细菌菌落总数检查3.3.4结果计算手细菌菌落总数(cfu／cm2)＝3.4.5、正确洗手(1)、选用质量好的洗手液，保护手被皮肤。(2)、用质量好的消毒液。(3)、选用合适的洗手设备。3.4.5.1、正确洗手步骤：3.4.5.1.1、收下饰物及手表，用自来水淋湿双手。3.4.5.1.2、取无菌皂液或洁净肥皂于手上。3.4.5.1.3用力擦搓掌心、指缝、手背、手指关节、指腹、指尖、拇指10—15分钟。3.4.5.1.4、流动水冲洗3.4.5.1.5、用擦手纸巾包住龙头将水关闭，或用肘、脚等关闭水龙头。3.4.5.1.6、用擦手巾擦干双手或用烘器烘干。洗手后，细菌菌落数应符合手质控标准。3.4、医疗用品采样及检查方法3.4.1、采样时间：在消毒或无菌处理后存放有效期内采样；3.4.2、采样量和采样方法：（1）破坏性方法取样：如输液．输血器．注射针等，剪碎取一定量于培养基内培养，35℃，48小时培养。（2）不能用破坏性方法取样：可用浸有无菌生理盐水采样棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面<100cm2，取全部；被采表面≥100cm2，取100cm2于培养基里35℃，48小时培养。3.4.3、质控标准：(1)、进入人体无菌组织，器官或接触破损皮肤粘膜的医疗用品必须无菌。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书(2)、接触粘膜的医疗用品，细菌落数应≤20cfu／g或100cm2，不得检出致病菌。(溶血性链球菌，沙门氏菌，金黄色葡萄球菌，绿脓杆菌等。)3.5、使用中消毒剂与无菌器械保存液3.5.1、采样时间采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。3.5.2、采样量及方法在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入9ml稀释液中混均，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在肉汤中加入0.1％硫代硫酸钠；对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3％(W／V)吐温80和0.3％卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3％甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入3％(WN)吐温80，以中和被检药液的残效作用。复方中和剂：(1)0.03M磷酸缓冲液(PBS)：磷酸氢二钠2.84g磷酸二氢钾1.36g蒸馏水1000mlPH7.2—7.4(2)复方中和剂：0.5％硫代硫酸钠2％吐温80l％卵玲脂l％甘氨酸用PBS配制消毒剂使用中污染菌量测定：被检消毒液混匀后，用无菌吸管取样1ml加至9ml含相应中各剂的稀释液中，取0.5ml接种平板培养于36±1℃3天和28℃7天，每次采样平行作3次样品计算每毫升消毒液在连续使用过程中污染微生物数量。每毫升微生物数(cfu/m1)＝3.5.3、结果分析平板上有菌生长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板的落数在10个以下，仍可用于消毒处理(但不能用于灭菌)，若每个平板菌落数超过10个，说明每毫升被检样液含菌量己超过100个，即不宜再用。一、医疗用品采样检查方法：l、采样时间：在消毒或无菌处理后存放有效期内采样；130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2、采样量和采样方法：(1)破坏性方法取样：如输液．输血器．注射针等，剪碎取一定量于培养基内培养，35℃，48小时培养。(2)不能用破坏性方法取样：可用浸有无菌生理盐水采样棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜100cm2，取全部；被采表面≥100cm2，取100cm2于培养基里35℃，48小时培养。二、质控标准：l、进入人体无菌组织，器官或接触破损皮肤粘膜的医疗用品必须无菌。2、接触粘膜的医疗用品，细菌落数应≤20cfu／g或lOOcm2，不得检出致病菌。(溶血性链球菌，沙门氏菌，金黄色葡萄球菌，绿脓杆菌等。)主要监控的病原微生物：溶血性链球菌检查沙门氏菌检查绿脓杆菌检查金黄色葡萄球菌检查130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—022文件名称四、各部位的消毒执行时间（第1版）2012.01.01四、各部位的消毒1、空气消毒臭氧对空气中的微生物有明显的杀灭作用，采用30mg／m3浓度的臭氧，作用15min，对自然菌的杀灭率达90％以上。臭氧消毒空气，必须是在封闭空间，人不在条件下进行，消毒后30min才能进入。另有①循环风紫外线空气消毒器；②静电吸附式空气消毒器；③过氧乙酸：3～5％水溶液，加热蒸发，在60～80％相对湿度，室温下，按1g／m3计算，薰蒸时间2小时。④季铵盐类消毒液：每立方米1.2ml(折合药物浓度10mg／m3)，作用30min。⑤含氯消毒剂：用药1.5mg／m3，点燃后关闭门窗I～2小时等。2、各种物体表面的消毒.2.l、地面消毒当地面没有明显污染时，用清水每日l～2次；病原菌：含有效氯500mg／L消毒液或0.2％过氧乙酸；肝炎病毒：含有效氯1000mg／L消毒液；结核病人污染：0.2%过氧乙酸或用5％煤酚皂溶液2.2、病房各类用品表面的消毒含有效氯200～500mg／L消毒液、0。2％过氧乙酸或紫外线。2.3检验相关器材与环境的消毒2.3.1、贵重仪器局部轻度污染，可用2％碱性或中性戊二醛溶液或5000mg／L洗必泰酒精溶液擦拭；污染严重时，可用环氧乙烷消毒。2.3.2、手的消毒用肥皂流水洗手1～2分钟，再用流水冲洗。在污染时，应立即用含有效氯1000mg／L消毒液或0．2％过氧乙酸浸泡3分钟，然后用清水冲洗。2.3.3、废弃标本每100毫升加漂白粉5克或二氯异氰尿酸钠2克。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书文件编码ZYY-XJ—022文件名称细菌测定系统使用说明书执行时间（第1版）2012.01.01一．仪器名称、型号【名称】细菌测定系统【型号】DL-96III二．原理、性能与用途【工作原理】细菌测定系统，是对已分离培养出来的细菌、真菌等微牛物进行种、属鉴定，并同时测定该菌对各种抗菌药物MIC的专用设备：细菌测定系统由检测装置、嵌入式控制装置组成，测定系统用比色、比浊法对随机体外诊断试剂板微量反应孔的阴阳性结果进行检测和分析，并自动牛成细菌种类和抗菌药物MIC半定量分析结果。【正常工作条件】环境温度：5-40℃相对湿度：≤80％大气压力：76KPa-106KPa电源电压：AC220V±22V，50Hz±lHz光照度：避免阳光直射。【性能指标】鉴定能力：准确鉴定500余种细菌(包括真菌)，百余种抗牛素MIC半定量分析。读板时间：≥50块／小时【适用范围】该产品用于进行临床致病菌的鉴定和抗菌药物MIC半定量分析。三、结构示意说明【体积】600mm×466mm×427mm【重量】10Kg【结构示意图】四、安装1)仪器放置在稳固的台面上，连接本设备并装有我公司相应软件的电脑需要符合IEC60950-1相关的安全要求。2)应使用有接地良好的市电。3)仪器背面距离墙等障碍物20cm以上。五、操作说明1、系统登录：双击桌面上图标LETSQL，出现如下画面130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书输入用户名及用户密码，注意：初始用户名是“DL”，初始密码是“l”。再点击“确认”即可登录，出现以下画面：2、检测2.1录入资料在收到标本后，先进行被检者资料录入，依次输入标本编号和姓名等被检者资料（其中“检验目的”、“标本种类”、“病区（科）”、“检验者”和“报告期”等蓝色项目是必须录入的项目）。2．2无菌在对标本进行处理、分离、培养后，如果选择“无菌”则即可出具无菌报告：选择“无菌”，再从“报告内容”中选择要打印的内容，结束后按“打印报告”。（注意：无菌报告采用的是A5纸打印）如下图所示：2．3有菌在对标本进行处理、分离、培养后，如果发现有菌，则按随机试剂操作说明书的要求将被测细菌接种于相应的试剂板，在37℃的环境中培养24小时。若需要出具初步报告。则选择“有菌”，点击“初步报告”，在空白框中输入相关内容即可。（注意：初步报告在正式检验报告生成后会自动消失）2．3．1细菌鉴定鉴定前的资料及条件输入：选择“有菌”及“菌落种类”，如有必要可选择“手工鉴定+药敏”。备注：“菌落计数”仅对“中段尿”标本有意义，其他标本可跳过不录入此项：“菌落种类”为必选项；2.3.2读板选择试剂板，按“判别”，系统显示如下界面：此时系统会在左方自动伸出托盘，将试剂板置入托盘，按“YES”，开始读取试验结果。系统读取完毕后会显示“读取完毕，请取出试剂板”的提示，如下图所示，取出测试板后，按“OK”。2.3.3细菌鉴定与药敏结果系统自动回收检测托盘，同时屏幕显示出试剂板结果。按“判定”，系统显示鉴定结果，如用户需要更改鉴定结果，则可以自行选择“菌属”“菌种”再按“确定”即可，如下图所示。点击“结束”后，药敏结果会根据实际情况显示，如果药敏结果出现了异常等情况，专家系统会自动提示异常表型和药敏结果中不合理的现象。可选择以下三种处理方法的一种：130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书1．是：修正结果2．否：不修正结果3．不报告：不能确定结果或需再重复测试的情况下，选择不报告此种结果。“补充药敏”可以输入测试板上没有的药敏结果。2．3．4鉴定报告按“确认”，系统进入打印报告模块，此时出现“选择打印药物”窗口，按“确认”即可生成报告细菌测定系统随机体外诊断试剂板使用说明书1【产品名称】细菌测定系统随机体外诊断试剂板【包装规格】DI-96STAPH【预期用途】适用于触酶试验阳性的革兰氏阳性球菌的鉴定和抗菌药物MIC测定。【适用仪器】DL-96细菌测定系统。【原理】试剂板由生化反应孔和抗菌药物MIC测定试验孔组成，在生化反应孔中加入细菌悬液，抗菌药物MIC测定试验孔中加入培养基，经35-37℃孵育．生化反应在细菌代谢作用下直接产生颜色变化或经加入显色剂后产生颜色变化，抗菌药物MIC测定试验根据试验孔是否出现浑浊(沉淀)确定细菌是否生长，通过细菌测定系统分析从而将细菌快速、准确的鉴定到种属同时分析抗菌药物MIC值。【主要组成成份】1．DL-96STAPH试剂板10块2．肉汤培养基、稀释液10人份3．辅助试剂：VP试剂AB、PYR显色试剂、硝酸盐还原试剂AB、无菌石蜡油l0人份4．说明书1份【样本要求】使用本试剂板的被测菌应符合以下三项要求：●无特殊营养要求的革兰氏阳性球菌：●触酶试验阳性；●18-24小时分离培养的单个纯菌落(或纯培养物)。【检验方法】生化试验操作方法1．菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液(0．5麦氏单位)。2．用连续移液器(配无菌吸头)取该菌液加入试剂板Al-A12孔，B1-B10{}lO孔，每孔100ul。3．在A1(URE)、A2(ORN)和A3(C)孔分别滴加2滴无菌石蜡油。抗菌药物MIC测定试验操作方法1．用无菌吸头吸取菌悬液50ul，加至肉汤培养基中，混匀，继续加入B1-B12、c1-c12、D1-D12、E1-E12、F1-F12、G1-G12、Hl-H12孔L，每孔100ul。2．撕开不干胶对齐贴于试剂板，35-37℃孵育24小时(个别生长缓慢者可延长至36-48小时)后判读结果。【结果判读】1．先在A12孔滴加VP试剂A、B各一滴，30分钟后，在A10孔滴加PYR试剂一滴及A11孔滴加硝酸盐还原试剂A、B各一滴，立即判读结果。2．将试剂板放进细菌测定系统分析，分析完毕后，自动判定细菌种属和抗菌药物MIC半定量结果，并打印报告单(细菌测定系统的详细操作另介绍)。【主要性能指标】1、准确率130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书试剂板对质控菌株鉴定的准确率为100％；试剂板对质控菌株抗菌药物MIC测定的准确率为100％。2、重复性试剂板对质控菌株鉴定的重复性为100％；试剂板对质控菌株抗菌药物MIC测定的重复性为100％。3、批内不精密度试剂板对质控菌株鉴定和抗菌药物MIC测定的批内不精密度无差异。4、批问不精密度试剂板对质控菌株鉴定和抗菌药物MIC测定的批间不精密度无差异。【注意事项】1．所有的操作过程应避免杂菌污染。2．必须做好板外的鉴定试验：A革兰氏染色镜检B触酶试验c凝聚因子试验(玻片法)上述A、B为选板的依据，如果未做或做得不准确，将可能导致选板错误，c为鉴定的“关键试验”，必须输入其阴、阳性结果才能完成细菌的鉴定。3．被测菌必须是新鲜的纯培养物，严格避免从平皿上刮取两种或两种以上的菌落或用陈旧的培养物进行试验。4．孵育48小时以后的反应结果不能作为判断的依据。5．本试剂板各孔底物在无菌条件下冷冻干燥，密封包装，临用时先置室温预温再在无菌环境下打开，板盖不可随意掀启，以防空气杂菌污染。6．操作过程必须有必要的防护措施以防止操作人员感染，废弃物应作为传染源处理。7．本产品仅用于体外诊断，供一次性使用，试剂板包装出现漏气或破损一律禁用。8．使用前请仔细阅读本说明书。【检验方法的局限性】1．细菌测定系统是根据数据库的背景资料鉴定细菌，数据库资料的不完整将直接影响鉴定的准确性。【参考文献】1．PanickR.Murray,MannalofclinicalMICrobiology,．7thedition．2．闻玉梅，现代医学微生物学，第一版，上海医科大学出版社。【保存及有效期】2—8℃保存，有效期12个月。开封后，立即使用。【产品标准编号】YZB／粤0397—2008【产品注册号】粤食药监械(准)字2008第2400466号【生产许可证号】粤食药监械生产许20030756号【批准日期】2008年12月3日【生产企业】企业名称：珠海迪尔生物工程有限公司注册、生产地址：珠海市金湾区三灶镇金海岸大道19号邮编：519041电话：(0756)3391888传真：(0756)3391389http：www．biohema,comE-mail：biohema@sohu.com130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书真菌测定系统随机体外诊断试剂板使用2【产品名称】细菌测定系统随机体外诊断试剂板【包装规格】DL-96FUNGUS【预期用途】适用于真菌的鉴定和抗菌药物MIC测定。【适用仪器】DL-96细菌测定系统。【原理】试剂板由生化反应孔和抗菌药物MIC测定试验孔组成，在生化反应孔中加入细菌悬液，抗菌药物MIC测定试验孔中加入培养基，经30℃孵育．生化反应在真菌同化、利用代谢作用下观察是否出现浑浊(沉淀)的现象来确认实验的阴阳性。抗菌药物MIC测定试验根据试验孔是否出现浑浊(沉淀)确定细菌是否生长，通过细菌测定系统分析从而将细菌快速、准确的鉴定到种属同时分析抗菌药物MIC值。【主要组成成份]1．DL-96FUNGUS试剂板10块2．稀释液、同化稀释液、药敏稀释液10人份3．说明书1份【样本要求】使用本试剂板的被测菌应符合以下要求：●新鲜分离的单个纯菌落(或纯培养物)；●培养物经显微镜检查为酵母样真菌；【检验方法】1．菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈菌悬液(为1个麦氏单位)。2．用连续移液器(配无菌吸头)吸取菌悬液100UL加到同化稀释液中，充分混匀，加到试剂板c1-c11孔和D1-D12孔，每孔100UL。3．用连续移液器(配无菌吸头)从药敏稀释液体中取100UL加入E12。4．再从菌悬液中吸取菌悬液20UL加入药敏稀释液中，充分混匀后，分配到E1-E11及F2-F12，每孔100UL。5．撕开不干胶的纸对齐贴于试剂板，30E湿盒内孵育。6．从菌悬液2滴置小试管内，加入o．5ml羊血清(小牛血清也可)，35℃孵育3小时，立即用显微镜检查芽管形成。7．试剂板孵育24-72小时，每日观察，当D12、F12阳性对照孔明显变浊时，立即判读结果。【结果判读】将试剂板放进细菌测定系统分析，分析完毕后，自动判定细菌种属和抗菌药物MIC半定量结果，并打印报告单(细菌测定系统的详细操作另介绍)。表A抗菌药物MIC测定试验抗菌药物表缩写代号药物名称FLU氟胞嘧啶FlucytocineFLZ氟康唑FluconCzoleITR伊曲康唑ItrCconCzoleVRC伏力康唑VoriconazoleAMB两性霉素AmphoterricinB130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书【主要性能指标】1、准确率试剂板对质控菌株鉴定的准确率为100％；试剂板对质控菌株抗菌药物MIC测定的准确率为100％。2、重复性试剂板对质控菌株鉴定的重复性为100％：试剂板对质控菌株抗菌药物MIC测定的重复性为100％。3、批内不精密度试剂板对质控菌株鉴定和抗菌药物MIC测定的批内不精密度无差异。4、批间不精密度试剂板对质控菌株鉴定和抗菌药物MIC测定的批问不精密度无差异。【注意事项】1．将同化试验与空白对照孔比较，若同化试验孔比空白对照孔浊度高，判定为阳性；若同化试验孔与空白对照孔浊度一致，判定为阴性。2．药敏试验混浊为阳性，清亮为阴性。3．对于氟康唑FLZ、氟胞嘧啶FLu，伊曲康唑ITR、伏力康唑VRC，由于存在残余生长现象，需将药敏试验与生长对照孔比较，MIC值判定为相对于阳性生长对照有50%或更多的生长减少时最低药物浓度，此孔需录入未生长。4．芽管试验需另取无菌小试管操作，该试验是鉴定白色念珠菌的关键试验，操作和镜检时应严格按规定进行，许多动物血清(如兔、牛、羊、人等)及蛋清均可使用，以小牛血清及羊血清较好。一定要在孵育三小时左右镜检，观察时，取一滴孵育后的血清置于玻片上，立即用低倍镜检视，芽管看似酵母细胞的附枝，宽约胞体的1／2，长约胞体的3-4倍，芽管和胞体连接处不出现收缩现象，不能将某些酵母样菌产生的起始菌丝体误作为芽管。芽管与起始菌丝的区别见下表胞体出芽处特征出现时间芽管起始菌丝不出现收缩现象呈紧缩现象孵育4小时以内孵育4小时以后5．被测菌必须是新鲜的纯培养物，严格避免从平皿上刮取两种或两种以上的菌落或用陈旧的培养物进行试验。6．本试剂板各孔底物在无菌条件下冷冻干燥，密封包装，临用时先置室温预温再在无菌环境下打开，板盖不可随意掀启，以防空气杂菌污染，所有的操作过程应尽可能避免杂菌污染。7．操作过程必须有必要的防护措施以防止操作人员感染，废弃物应作为传染源处理。8．本产品仅用于体外诊断，供一次性使用，试剂板包装出现漏气或破损一律禁用。9．使用前请仔细阅读本说明书。【检验方法的局限性】1．细菌测定系统是根据数据库的背景资料鉴定细菌，数据库资料的不完整将直接影响鉴定的准确性。【参考文献】1．PanckR．Muttay,Mannal0fclinicalMICrobiology,7thedition2．闻玉梅，现代医学微生物学，第一版，上海医科大学出版社。【保存及有效期】2-8℃保存，有效期12个月。开封后，立即使用。【产品标准编号】YZB／粤0397-2008【产品注册号】粤食药监械(准)字2008第2400466号【生产许可证号】粤食药监械生产许：20030756号【批准日期】2008年12月3日【生产企业】130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书企业名称：珠海迪尔生物工程有限公司注册、生产地址：珠海市金湾区三灶镇金海岸大道19号细菌测定系统随机体外诊断试剂板使用说明书3【产品名称】细菌测定系统随机体外试剂板【包装规格】DL-96NE【预期用途】适用于氧化酶试验阳性或氧化酶试验阴性但厌氧葡萄糖不产酸的革兰氏阴性杆菌的鉴定和抗菌药物MIC测定。【适用仪器】DL-96细菌测定系统。【原理】试剂板由生化反应孔和抗菌药物MIC测定试验孔组成，在生化反应孔中加入细菌悬液，抗菌药物MIC测定试验孔中加入培养基，经35－37℃孵育．生化反应在细菌代谢作用下直接产生颜色变化或经加入显色剂后产生颜色变化，抗菌药物MIC测定试验根据试验孔是否出现浑浊(沉淀)确定细菌是否生长，通过细菌测定系统分析从而将细菌快速、准确的鉴定到种属同时分析抗菌药物MIC值。【主要组成成份】1．DL-96NE试剂板10块2．肉汤培养基、稀释液10人份3．辅助试剂(硝酸盐还原试剂A、硝酸盐还原试剂B、无菌石蜡油、靛基质试剂)lO人份4．说明书1份【标本要求】使用本试剂板的被测菌应符合以下三项要求：●无特殊营养要求的革兰氏阴性杆菌；●氧化酶试验阳性，或氧化酶阴性但厌氧葡萄糖不产酸。●18-24小时分离培养的单个纯菌落(或纯培养物)【检验方法】生化试验操作方法1．菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液(O．5麦氏单位)。2、连续移液器(配无菌吸头)吸取该菌液加入试剂板A1-A12孔，B1-B12孔，每孔100ul。3．在Al-A7孔分别滴加无菌石蜡油2滴。抗菌药物MIC测定试验操作方法1．吸取菌悬液50ul，加至肉汤培养基，混匀，继续加入试剂板的其余各孔(所有的MIC测定试验及生长对照c+及6.5NacL)，每孔100ul。2．剩余的菌液及吸头浸入杀菌溶液内浸泡灭菌。3．撕开不干胶的纸对齐贴于试剂板，35-37℃孵育18-24h后，判读结果。【结果判读】1．先于All孔(IND)滴加靛基质试剂一滴，数分钟后再于A10孔(NTT)滴加硝酸盐还原试剂A、B各一滴，立即判读结果。2．将试剂板放进细菌测定系统分析，分析完毕后，自动判定细菌种属和抗菌药物MIC半定量结果，并打印报告单(细菌测定系统的详细操作另介绍)。【主要性能指标】1、准确率试剂板对质控菌株鉴定的准确率为100％；试剂板对质控菌株抗菌药物MIC测定的准确率为100％。2、重复性试剂板对质控菌株鉴定的重复性为100％；试剂板对质控菌株抗菌药物MIC测定的重复性为100％。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书3、批内不精密度试剂板对质控菌株鉴定和抗菌药物MIC测定的批内不精密度无差异。4、批间不精密度试剂板对质控菌株鉴定和抗菌药物MIC测定的批问不精密度无差异。【注意事项】1．所有的操作过程应避免杂菌污染。2．霍乱孤菌必须立即用诊断血清作玻片凝集试验，并在规定的时间内迅速报告。3．必须事先做好板外的鉴定试验，即革兰氏染色镜检和氧化酶试验(必要时还要观察动力)，如果未做，或做得不准确，板上的鉴定结果将可能出现根本性的错误。4．被测菌必须是新鲜的纯培养物，严格避免从平皿上刮取两种或两种以上的菌落或用陈旧的培养物进行试验。5．孵育48小时以后的反应结果不能作为判断的依据。6．本试剂板各孔底物在无菌条件下冷冻干燥，密封包装，临用时先置室温预温再在无菌环境下打开，板盖不可随意掀启，以防空气杂菌污染。7．操作过程必须有必要的防护措施以防止操作人员感染，废弃物应作为传染源处理。8．本产品仅用于体外诊断，供一次性使用，试剂板包装出现漏气或破损一律禁用。9．使用前请仔细阅读本说明书。【检验方法的局限性】1．细菌测定系统是根据数据库的背景资料鉴定细菌，数据库资料的不完整将直接影响鉴定的准确性。【参考文献】1．PatrickR．Murray,MannalofclinicalMICrobiology,7thedition．2．闻玉梅，现代医学微生物学，第一版，上海医科大学出版社。【保存及有效期】2-8℃保存，有效期12个月。开封后，立即使用。【产品标准编号】YZB／粤03972008【产品注册号】粤食药监械(准)字2008第2400466号【生产许可证号】粤食药监械生产许20030756号【批准日期】2008年12月3日【生产企业】企业名称：珠海迪尔生物工程有限公司注册、生产地址：珠海市金湾区三灶镇金海岸大道19号邮编：519041电话：(0756)3391888传真：(0756)3391389http：www．medicaldl．comE-mail：biohema@sohu．com130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书细菌测定系统随机体外诊断试剂板使用说明书【产品名称】细菌测定系统随机体外诊断试剂板【包装规格】DL-96STREP【预期用途】适用于触酶试验阴性的革兰氏阴性杆菌的鉴定和抗菌药物MIC测定。【适用仪器】DL-96细菌测定系统。【原理】试剂板由生化反应孔和抗菌药物MIC测定试验孔组成，在生化反应孔中加入细菌悬液，抗菌药物MIC测定试验孔中加入培养基，经35-37℃孵育.生化反应在细菌代谢作用下直接产生颜色变化或经加入显色剂后产生颜色变化，抗菌药物MIC测定试验根据试验孔是否出现浑浊（沉淀）确定细菌是否生长，通过细菌测定系统分析从而将细菌快速、准确的鉴定到种属同时分析抗菌药物MIC值。【主要组成成份】1.DL-96STREP试剂板　　　　10块2.肉汤培养基A、肉汤培养基B、稀释液10人份3.辅助试剂（VP试剂A、B试剂PVR显色试剂、马尿酸盐试剂）10人份4.说明书1份【标本要求】使用本试剂板的被测菌应符合以下三项要求：●革兰氏阴性杆菌，主要是单个、成对或链状排列。　●触酶试验阴性。　●18-24小时分离培养的单个纯菌落（或纯培养物）；【检验方法】生化试验操作方法1．记录菌落溶血类型(a-溶血、β-溶血)。2．挑取纯培养单个菌落于0.3ml无菌水中，混匀。3．将以上菌悬液浇于或用无菌棉拭子均匀涂于血平皿上。4．对于β-溶血链球菌和肠球菌，经以上24小时孵育，一般能形成较大的菌落，对于其它链球菌需经48小时孵育才可形成较大的菌落。对于某些对营养要求极高的苛养菌，则取菌落于链球菌专用培养液(1m1)中35-37℃孵育5小时，将以上菌悬液均匀浇于血半帆上，再置35-37℃，孵育18-24小时。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书5．用无菌棉拭子取菌落(培养物)于稀释液中，使呈菌悬液（2麦氏单位）。6．用移液器(配无菌吸头)吸取该菌悬液加入试剂板A5-A12孔，每孔100ul。7．从以上菌悬液中取500UL加入肉汤培养基A，再将此培养液加入试剂板A1-A4孔，Bl—B7孔，每孔100ul。8．在A1-A4、A9、B1-B7孔分别滴加无菌石蜡油2滴。抗菌药物MIC测定试验操作方法1．从剩余肉汤培养基A中取50ul，加至肉汤培养基B，混匀，继续加入到B8-B12、C1-C12、Dl-D12、E1-E12孔、Fl-F12孔、Gl-G12、H1-H12孔内，每孔100UL，并在c1孔里滴加无菌石蜡油2滴。2.撕开不干胶对齐贴于试剂，35-37℃孵育24小时(个别生长缓慢者可延长至36—48小时)后，判读结果。【结果判读】1．在A11孔滴加VP伏普试剂A、B各一滴，在A10孔滴加PYR吡咯烷酮试剂一滴，再在A12孔滴加马尿酸盐试剂一滴，30分钟后判读结果。2.将试剂板放进细菌测定系统分析，分析完毕后，自动判定细菌种属和抗菌药物MIC半定量结果,并打印报告单（细菌测定系统的详细操作另介绍）。【主要性能指标】1、准确率试剂板对质控菌株鉴定的准确率为100%；试剂板对质控菌株抗菌药物MIC测定的准确率为100%。2、重复性试剂板对质控菌株鉴定的重复性为100%；试剂板对质控菌株抗菌药物MIC测定的重复性为100%。3、批内不精密度试剂板对质控菌株鉴定和抗菌药物MIC测定的批内不精密度无差异。4、批间不精密度试剂板对质控菌株鉴定和抗菌药物MIC测定的批问不精密度无差异。【注意事项】1．所有的操作过程应避免杂菌污染。2．必须做好板外的鉴定试验：A、革兰氏染色镜检B、触酶试验上述A、B为选板的依据，如果未做或做得不准确，将可能导致选板错误。3．被测菌必须是新鲜的纯培养物，严格避免从平皿上刮取两种或两种以上的菌落或用陈旧的培养物进行试验。4．孵育48小时以后的反应结果不能作为判断的依据。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书5．本试剂板各孔底物在无菌条件下冷冻干燥，密封包装，临用时先置室温预温再在无菌环境下打开，板盖不可随意掀启，以防空气杂菌污染。6．操作过程必须有必要的防护措施以防止操作人员感染，废弃物应作为传染源处理。7．本产品仅用于体外诊断，供一次性使用，试剂板包装出现漏气或破损一律禁用。8．使用前请仔细阅读本说明书。【检验方法的局限性】1．细菌测定系统是根据数据库的背景资料鉴定细菌，数据库资料的不完整将直接影响鉴定的准确性。【参考文献】1．PatlickR．Murray．MannalofclinicalMICrobiology、7thedition．2．闻玉梅，现代医学微生物学，第一版，上海医科大学出版社。【保存及有效期】28℃保存，有效期12个月。开封后，立即使用。【产品标准编号】YZB／粤0397-2008【产品注册号】粤食药监械(准)字2008第2400466号【生产许可证号】粤食药监械生产许20030756号【批准日期】2008年12月3日【生产企业】企业名称：珠海迪尔生物工程有限公司注册、生产地址：珠海市金湾区三灶镇金海岸大道19号邮编：519041电话：(0756)3391888传真：(0756)3391389130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书细菌测定系统随机体外诊断试剂板使用说明书4【产品名称】细菌测定系统随机体外诊断试剂板试剂板【型号及包装规格】DL-96E，10人份／盒。【预期用途】适用于革兰氏阴性杆菌中氧化酶阴性菌的鉴定和抗菌药物MIC测定。【适用仪器】DL一96细菌测定系统。【原理】试剂板由生化反应孔和抗菌药物MIC测定试验孔组成，在生化反应孔中加入细菌悬液，抗菌药物MIC测定试验孔中加入肉汤培养基，经35～37℃孵育，生化反应在细菌代谢作用下直接产生颜色变化或经加入显色剂后产生颜色变化，抗菌药物MIC测定试验根据试验孔是否出现浑浊(沉淀)确定细菌是否生长，通过细菌测定系统分析从而将细菌快速、准确的鉴定到种属同时分析抗菌药物MIC值。【主要组成成份】1．DL一96E试剂板lO块2．稀释液、肉汤培养基10人份3．辅助试剂(VP试剂A、VP试剂B、靛基质试剂、苯丙氨酸试剂、无菌石蜡油)10人份4．说明书1份【标本要求】使用本测试板的被测菌应符合以下三项要求：●氧化酶试验阴性；●无特殊营养要求的革兰氏阴性杆菌；●18—24小时分离培养的单个纯菌落(或纯培养物)。【检验方法】生化试验操作方法1．菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液0．5麦氏单位。2．用连续移液器(配无菌移液吸头)吸取该菌液加入试剂板A1－A12、B1－B12和c1一c4孔内，每孔100UL。3．在A1－A7孔分别滴加无菌石蜡油2滴。抗菌药物MIC测定试验操作方法1．吸菌悬液50uL，加至肉汤培养基内，混匀，继续加入测试板的其余各孔(所有的抗菌药物MIC测定试验孔及生长对照孔c+)，每孔100UL。2．撕开不干胶对齐贴于测试板，35—37℃孵育18—24h后判读结果。【结果判读】1．先于A12孔(vP)滴加VP试剂A、B各l滴，20分钟后，再于A11孔(IND)滴加靛基质试剂一滴，数分钟后，于A10孔(PHE)滴加苯丙氨酸试剂一滴，立即判读结果。2．将试剂板放进细菌测定系统分析，分析完毕后，自动判定细菌种属和抗菌药物MIC半定量结果，并打印报告单(细菌测定系统的详细操作另介绍)。【主要性能指标】1．准确率试剂板对质控菌株鉴定的准确率为100％；试剂板对质控菌种抗菌药物MIC测定的准确率为100％。2．重复性试剂板对质控菌株鉴定的重复性为100％；试剂板对质控菌种抗菌药物Mlc测定的重复性为100％，。3．批内不精密度130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书试剂板对质控菌株鉴定和抗菌药物MIC测定的批内不精密度无差异。4．批间不精密度试剂板对质控菌株鉴定和抗菌药物MIC测定的批问不精密度无差异。【注意事项】1．所有的操作过程应避免杂菌污染。2．必须事先做好板外的鉴定试验，即氧化酶试验和革兰氏染色镜检(必要时还需观察动力)，若未做，或做得不准确，板上的鉴定结果将可能出现根本性的错误。3．沙门及志贺菌属的所有菌种，均应做血清凝集试验(玻片凝集)确定。4．被测菌必须是新鲜的纯培养物，严格避免从平皿上刮取两种或两种以上的菌落或用陈旧的培养物进行试验。5．孵育48小时以后的反应结果不能作为判断的依据。6．本测试剂板各孔底物在无菌条件下冷冻干燥，密封包装，临用时先置室温预温再在无菌环境下打开，板盖不可随意掀启，以防空气杂菌污染。7．操作过程必须有必要的防护措施以防止操作人员感染，废弃物应作为传染源处理。8．本产品仅用于体外诊断，供一次性使用，试剂板包装出现漏气或破损一律禁用。9．稀释液、培养基瓶内出现混浊沉淀等异常现象不得使用。10．使用前请仔细阅读本说明书。【检验方法的局限性】1．细菌测定系统是根据数据库的背景资料鉴定细菌，数据库资料的不完整将直接影响鉴定的准确性。【参考文献】1．PatrickR．Murray,MannalofclinicalMICrobiology,7thedition．2．闻玉梅，现代医学微生物学，第一版，上海医科大学出版社。【保存及有效期】2-8~C保存，有效期12个月。开封后，立即使用。【产品标准编号】YZB／粤0397—2008【产品注册号】粤食药监械(准)字2008第2400466号【生产许可证号】粤食药监械生产许20030756号【批准日期】2008年12月3日【生产企业】企业名称：珠海迪尔生物工程有限公司注册、生产地址：珠海市金湾区三灶镇金海岸大道19号邮编：519041电话：(0756)3391888传真：(0756)3391389E－maiL：biohema@sohu．com130固镇县中医院细菌室管理及操作指导书130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书真实性声明本单位已对实验室填写的备案登记表内容的真实性进行了认真审核，并对实验室负责人进行了相关授权，保证本表以及附件中所提供的信息真实、完整、准确，保证实验室负责人有有效的实验室生物安全管理权限，如有失实或隐瞒，本单位将承担相应的法律责任。实验室设立单位（盖章）　　法定代表人（负责人）签字：　　　　　年月日单位主管部门审核意见（盖章）年　月　日备案部门意见（盖章）年　月　日备案登记编号有效期自年月日至年月日130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书固镇中医院微生物实验室风险评估报告依据《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》、《医疗废物管理条例》，2014年3月20日，由医院生物安全委员会主持，检验科生物安全管理小组参与，对检验科生物安全作风险评估，形成报告如下：一、生物因子已知或未知的特性评估国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或群体的危害程度，将病原微生物分为四类，其中一类和二类统称高致病病原微生物。我院检验科属二级生物安全实验室，主要从事临床血液体液等低致病性微生物鉴定，及医院的院感检测工作。不得从事高致病病原微生物的检测工作，但在临床工作中，必须将强调高致病病原微生物的监测，发现可疑高致病病原微生物，必须采取积极措施，及时报告。1、我院潜在的一类和二类病原微生物评估：炭疽芽孢杆菌、布鲁氏菌、鼻疽伯克菌、结核分枝杆菌、霍乱弧菌、鼠疫耶尔森菌等。对上述高致病性生物因子的种类、来源、传染性、传播途径、易感性、潜伏期、剂量-效应（反应）关系、致病性（包括急性与远期效应）、变异性、在环境中的稳定性、与其他生物和环境的交互作用、相关实验数据、流行病学资料、预防和治疗方案，做全面的了解，引领全科职工共同学习掌握。2、防控措施：2.1立即对可疑高致病病原微生物培养物封存。2.2立即分别报告医院感控科、卫生局和市疾病预防控制中心。2.3对实验室进行全面消毒，包括工作台面、地面、仪器表面、空气等。2.4接触人员更换个人防护用品，并对用品进行消毒。2.5感控科收集病人相关信息资料，对病人实施隔离，协助市疾病预防控制中心进行流行病学调查。2.6对接触者进行严密的健康监护。二、实验室常规活动和非常规活动过程中的风险评估（包括所有进入工作场所的人员和可能涉及的人员的活动）130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书1、风险评估：我院检验科属二级生物安全实验室，实验室布局分为清洁区、半污染区和污染区，由于三区划分不是太明显，实验室进出人员存在污染和感染的风险。具体可能体现在：病原微生物的带入和带出，标本的污染，意外事件的发生（如跌倒、划伤等）。2防控措施：2.1本科室工作人员2.1.1进入实验室的本科工作人员，在缓冲间内穿戴好工作服、工作冒、手套等个人防护用具后方能进行实验室工作。2.1.2任何原因需要离开实验室，必须洗手（七步法）脱去个人防护用品，在此洗手方能离开实验室。2.2其他医务人员2.2.1运送样本护工将样本送至各班组的样本接收处，核对验收后方可离开，不得在实验室中随意行走。2.2.2医护人员到实验室查询结果、业务咨询等，本科工作人员引导至相应的位置，结束后建议手部清洁后离开实验室。2.3病人或病人家属尽量让其在实验室外等候，不得已时由本科职工引导致指定位置，结束后建议手部清洁后离开。2.4特殊人群孕妇、儿童及免疫缺陷等人群不得进入实验室。除实验室工作人员外的任何人员需进入实验室，工作人员必须告知实验室内具有潜在的生物危害因素，请遵守实验室的规定和工作人员的指导。三、实验室设施、设备等相关的风险评估：1风险评估：安全保卫风险，实验室“五防”（防火、防爆、防盗、防事故、防泄漏）风险，大型精密贵重仪器设备使用安全风险、普通样本泄漏或损毁风险等。2、防控措施：2.1实验室工作人员必须牢固树立安全保卫意识，做好“五防”（防火、防爆、防盗、防事故、防泄漏）工作，保证实验室安全和检验工作顺利进行。2.2凡进入实验室者，必须遵守生物安全管理制度及其他管理制度。2.3科主任是科室安全第一责任人，班组长是本班组第一责任人，负责安全管理，定期进行安全检查。对不安全的隐患及时采取有效措施进行处理，同时上报医院保卫科。2.4实验用仪器设备按照“操作规程”，操作，以免发生意外。对违反“操作规程”的行为，任何人都有权制止。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2.5大型精密贵重仪器设备设置责任人，负责仪器的维护保养，仪器使用者如实记录使用情况。2.6垃圾废物严格按照实验室垃圾废物处理执行，所有实验室产生的垃圾废物不能作为可利用废物处理或变卖。2.7实验室不得使用电路或取暖设备，未配置空调实验室，当冬天室温达不到仪器设置温度是，可采用取暖器升温，但要严防过热过载，人员一旦离开必须关闭电源。2.8实验室要根据实际情况设置有消防器材。工作人员应掌握基本消防知识。一旦发生灾情，及时扑救、报警，同时上报医院保卫科。2.9门窗、玻璃、锁子，应保证完好无损。2.10实验完毕，工作人员要认真检查实验室的环境和实验用器具，及时断水断电，清除不安全因素，注意关窗锁门。2.11.如有重大事故，及时科主任、医院总值班和保卫处联系。四、实验室工作人员相关的风险评估1、风险评估：传染性物品致皮肤粘膜损伤风险、腐蚀、刺激、，物理因素风险（如紫外灯照射风险）、实验室感染风险等。2、防控措施：2.1严格遵守科室生物安全规章制度，遵照《生物安全手册》，2.2严格执行《实验室个人防护》2.3遵照《锐器物品的使用与处理》2.4科室做好职工健康监护和监护档案；2.5落实《实验室感染事件应急预案》五、医疗废弃物处理的风险评估1、风险评估：检验科涉及到的垃圾主要有感染性垃圾、损伤性垃圾、生活垃圾、化学性垃圾。主要风险为：人员感染、环境污染等。2、防控措施：各类垃圾的处理2.1废弃大便的处理：试验余下的大便样本，连同样本盒置于套有黄色垃圾袋的污物桶内，密封送医院感染性垃圾收集站统一处理。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2.2废弃小便、各种体液的处理：试验余下的小便、体液应倾倒入2000mg/L的含氯消毒液中，处理6小时后按医院废水处理，样本管置于套有黄色垃圾袋的污物桶内，密封送医院感染性垃圾收集站统一处理。2.3废弃的反应液体，不含氰化物血球分析仪废液，按5000mg/L的有效氯，24小时后按医院废水处理，含氰化物的血液分析仪废液，按4%的84消毒处理24小时后按医院废水处理。2.4废弃血液标本的处理：血液标本检测完毕，生化、免疫（除HIV标本）3天后方可处理，其他样本于检测当日由清洁员统一收集，戴双层手套，移入黄色垃圾袋中，密闭送医院感染性垃圾收集站统一处理。2.5一次性吸管、滴头、样品杯、子弹头的处理：用完后应置于含有效氯2000mg/L的消毒液中浸泡24小时后移入黄色垃圾袋中，密闭送医院感染性垃圾收集站统一处理。2.6HIV标本的处理：HIV标本检测后应留取足够血清冰冻保存1年以上，一年以后由市疾控中心抽样复查结果无误，清点样本例数无误后，在疾控中心人员监督下送医院感染性垃圾收集站，按感染性垃圾统一处理。留取血清后剩余标本按“废弃血液标本的处理”方法处理。2.7口痰及分泌物的处理：口痰及分泌物连同样本盒置于黄色感染性垃圾袋中，密封送医院感染性垃圾收集站统一处理。2.8培养基、基因扩增产物的处理：使用过的培养基无论有无细菌生长，基因扩增产物无论阴阳，均需高压灭菌后，黄色感染性垃圾袋收集，密封送医院感染性垃圾收集站统一处理。2.9损伤性垃圾的处理：使用过的注射器、针头、破损的玻璃制品、采血针等锐器，应统一放置于一次性锐器盒内，容器不能装得太满，不能超过容量的3/4，密封送医院感染性垃圾收集站统一处理。2.10使用后的酶标板，应先置于5000mg/L的含氯消毒剂中，浸泡6小时以上，按感染性垃圾密闭送医院感染性垃圾收集站统一处理。2.11其他接触过血液或体液的物品如：金标反应板、密封送医院感染性垃圾收集站统一处理。六、实验室应急措施及预期效果评估1、风险评估：评估实验室应急预案预期效果和存在风险，包括：实验室感染事件判定和预案的启动、实验室感染事件的解除、实验室感染的应急响应、实验室感染的现场调查控制、实验室感染监测与报告、实验室感染的预防、督察和责任追究等。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2、防控措施：2.1实验室感染事件判定和预案的启动医院院生物安全负责人接到报告，应立即召集生物安全管理委员会成员，对所发生的实验室差错或事故的严重程度与可能产生的危害进行分析评估，以确定实验室差错或事故性质和后果，并对受暴露的实验人员采取医学观察或隔离治疗等措施，最后根据所造成的后果的危害大小和严重程度进行感染事件等级认定。发生实验室感染后由生物安全管理委员会及时上报市卫生局。2.2实验室感染事件的解除实验室感染警报的降级或解除，由市医疗中心医院提出，上报市卫生局，经市卫生局组织专家咨询委员会进行判定，由市相关领导小组批准，宣布实验室感染事件的降级或解除警报。2.3实验室感染的应急响应2.3.1一般实验室感染应该做好以下工作:①生物安全领导小组立即组织有关部门，全面了解感染发生的情况，督促各有关部门履行各自的职责，落实各项防控措施。②发生感染的实验室停止与感染发生病原微生物的实验活动。③立即组织专家组进入实验室进行调查。④感染人员送定点医院检查，对密切接触者和同实验室工作人员进行检查。2.3.2严重的实验室感染在一般实验室感染措施的基础上，应该做好以下工作：①停止发生感染的实验室所有工作，组织专家进行调查。②感染人员立即送定点医院隔离治疗。③对发生感染事件的实验室的所有实验室人员进行隔离检查。④事件判定后的2小时内报市卫生局。2.3.3重大实验室感染在严重实验室感染措施的基础上，应该做好以下工作：①对发生感染的实验室进行封锁，组织专家进入进行调查。②事件判定后立即报市卫生局。130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书2.4实验室感染的现场调查控制2.4.1现场流行病学调查2.4.2实验室隔离消毒措施2.5.3病例的救治与隔离治疗2.5.4接触者的判定和医学观察2.6实验室感染监测与报告2.6.1实验室感染的监测2.6.2监测资料的分析与预警2.6.3实验室感染事件的报告2.7实验室感染的预防2.7.1一般预防2.7.2紧急预防措施2.8督察和责任追究2.8.1工作督查2.8.2责任追究本次实验室生物安全风险评估，按照相应法律法规和我院实验室生物安全风险评估程序，对我院检验科上述六方面做了全面的风险分析，落实了防控措施和整改措施，但可能存在评估不全面、风险分析不到位、防控措施待改进等缺点，风险评估是一个持续进行的过程，我们将在以后的评估中不断完善。医院生物安全委员会！中医院检验科生物安全管理小组20160320签字：张拥军张同娥孙重兰，曹敏、殷献军130 固镇县中医院细菌室管理及操作指导书固镇中医院微生物实验室个人防护用品清单1、口罩，面罩2、洗眼器3、防护服（实验服隔离衣4、护目镜5、鞋套、手套130'