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'2-蛋白质的基本机构和功能 主要内容蛋白质的分子组成蛋白质的分子结构蛋白质的理化性质蛋白质的分离纯化 蛋白质(Protein)的种类繁多大肠杆菌约含蛋白质3000种，人体内含蛋白质10万余种。蛋白质是细胞中含量最丰富的生物大分子约占人体固体成分的45%，可达细胞干重的70%。 二、蛋白质的基本组成单位——氨基酸蛋白质受酸、碱或蛋白酶水解产生游离氨基酸。因此，组成蛋白质的基本单位是——氨基酸(aminoacid)。 （一）氨基酸的分类根据R侧链基团的结构和性质的不同，可将20种氨基酸分为4类：1.非极性疏水性氨基酸2.极性中性氨基酸3.酸性氨基酸4.碱性氨基酸 1.非极性疏水氨基酸侧链为烃基、吲哚环、甲硫基等疏水性基团。这类氨基酸在水中的溶解度小于极性中性氨基酸。2.极性中性氨基酸侧链为羟基、巯基、或酰氨基等极性基团，有亲水性，但在中性水溶液中不电离的氨基酸。 3.酸性氨基酸侧链上有羧基，在水溶液中能释放出H+而带负电荷的氨基酸。有谷氨酸、天冬氨酸。4.碱性氨基酸侧链上有氨基、胍基或咪唑基，在水溶液中能结合H+而带正电荷的氨基酸。有赖氨酸、精氨酸和组氨酸等。 POLARNON-POLARTyrHisGlyAcidicNeutralBasicAspGluGlnCysAsnSerThrLysArgAlaValIleLeuMetPheTrpPro氨基酸按照极性分类极性或非极性，是氨基酸性质的基础 LeuL-C-C-CONH2-C-CONH2-C-COOH-C-C-COOH-H-CH3-C-OH-C-SH-C-C-S-CPPro-C-CCNN+-C-C-C-C-NH3+-C--C--OH-C-NSouthlineCircularlineCentrallineNorthwestlineAliphaticAmideAcidicImino,CircularBasicSulfurHydroxyAromatic-C-C-C-N-C-NN+=C-C-C-CC-C-C-CCC-CCCCHNC-COOHa-C-COHGlnQAspDGluEPheFArgRLysKHisHGlyGAAAlaVValIIleSerSThrTCysC氨基酸代谢图TrpWNon-polarPolarArgRTyrYAsnNMetM (二)氨基酸的理化性质1.物理性质都是白色晶体，熔点较高。能溶于强酸和强碱溶液；在水中的溶解度各不相同。2.两性解离与等电点氨基酸是两性电解质，其解离方式取决于所处溶液的酸碱度。 氨基酸的等电点（isoelectricpoint,pI)在某一pH溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液的pH称为该蛋白质的等电点。 3.紫外吸收性质色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸对紫外光有吸收作用。其最大吸收峰在280nm附近，以色氨酸吸收最强。利用此性质可采用紫外分分光度法测定溶液中蛋白质的含量。 4.氨基酸的化学反应（1）茚三酮反应氨基酸与水合茚三酮在溶液中共热，发生一系列反应，生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm。此反应可用于氨基酸的定性和定量分析。注：脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色化合物。 氨基酸分析仪图解AspThrThrLysGlyGluSerProAlaCysValMetIleLeuTyrPheHisNH3Arg0.20.41.00.60.8光吸收流出液(mL)15cm柱，pH3.25，0.067mol/L柠檬酸钠15cm柱，pH4.25，0.067mol/L柠檬酸钠15cm柱，pH5.25，0.12mol/L柠檬酸钠缓冲液泵显色反应管茚三酮泵已分开的氨基酸离子交换柱样品注入口记录仪光电倍增管光源 （2）与亚硝酸反应:VanSlyke法测定氨基酸氨基酸的氨基在室温下与亚硝酸作用，生成氮气。通过在标准条件下测定生成的氮气体积，即可计算出氨基酸的量。生成的氮气只有一半来自氨基酸。可用于氨基酸定量和蛋白质水解程度的测定。 （3）桑格（Sanger)反应氨基酸的－NH2与2，4一二硝基氟苯（DNFB）反应，生成DNP-氨基酸；黄色，提取、层析法鉴定来测定氨基酸。 （4）丹磺酰氯（DNS-Cl）反应氨基酸的－NH2与DNS反应；由于丹磺酰氯基具有强烈的荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，并且水解后的DNS－氨基酸不需要提取，可直接用纸电泳或薄层层析加以鉴定。 (5)埃德曼反应(Edmanreaction）苯异硫氰酸酯，PITC苯乙内酰硫脲衍生物（PTH-氨基酸），无色，可以用层析法分离鉴定。被Edman用来鉴定多肽的NH2末端氨基酸 三、氨基酸在蛋白质分子中的连接方式（一）肽键和肽肽键（peptidebond)是由一个氨基酸分子的α-羧基与另一个氨基酸的α-氨基脱水缩合形成的化学键。 命名、编号 第二节蛋白质的分子结构 蛋白质是由许多氨基酸单位通过肽键连接形成的具有特定分子结构的高分子化合物。蛋白质的分子结构可分为一级、二级、三级和四级。一级结构是蛋白质的基本结构，二级、三级、四级结构称为高级或空间构象。 一、蛋白质的一级结构概念是指蛋白质分子中氨基酸的排列顺序。主要的化学键肽键、有些蛋白质还含有二硫键。一级结构是决定蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础，但不是决定蛋白质空间构象唯一因素。 二、蛋白质的空间结构空间结构指蛋白质分子内各原子围绕某些共价键的旋转而形成的各种空间排布及相互关系，称为蛋白质的构象。蛋白质的构象分为主链构象和侧链构象。 （一）蛋白质的二级结构概念是指蛋白质多肽链主链原子局部的空间排列，不涉及氨基酸残基侧链的构象。维系蛋白质二级结构的主要化学键是氢键。 2.蛋白质二级结构的主要形式α-螺旋β-折叠β-转角无规卷曲 （1）α-螺旋 α-螺旋的结构特点①多肽链以肽键平面为单位，α-碳原子为转折点，有规律的盘绕成右手螺旋结构。②每3.6个氨基酸残基盘绕一圈，螺距为0.54nm。③相邻螺旋的肽键之间形成氢键，方向与长轴基本平行，维持螺旋的稳定。④R基团伸向螺旋外侧，其大小、形状及电荷性质均影响α-螺旋的形成。 （2）β-折叠 β-折叠的结构特点①多肽链呈伸展状态，肽键平面沿长轴折叠呈锯齿状，两平面间夹角为110°，R基交替地伸向锯齿状结构的上下方。②若干肽段互相靠拢，平行排列，通过氢键连接。氢键的方向与长轴垂直。③若两条肽段走向一致（N端、C端方向相同），称为顺向平行；反之，称之为逆向平行，逆向更稳定。 β-折叠包括平行式和反平行式两种类型 （3）β-转角 β-转角的特点①主链骨架本身以大约180°回折②回折部分通常由4个氨基酸残基构成③构象依靠第一残基的-CO基与第四残基的-NH基之间形成氢键来维系。 （4）无规卷曲是指多肽链中除了以上几种比较规则的构象外，其余没有确定规律性的那部分肽链构象。 （二）蛋白质的三级结构概念是指整条肽链中所有原子的空间排布，它包括主链构象和侧链构象。主要化学键疏水键、氢键、盐键等非共价键和二硫键。疏水键是维持三级结构稳定的最主要作用力。 结构域（domain）分子量大的蛋白质在形成三级结构时，肽链中某些局部的二级结构汇集在一起，形成发挥生物学功能的特定区域，称为结构域。由一条多肽链形成的蛋白质，其最高级结构为三级结构。只有具有三级结构的蛋白质才具有生物学活性。 （三）蛋白质的四级结构体内有许多蛋白质分子是由两条或两条以上具有独立三级结构的多肽链通过非共价键聚合而成，中每条具有独立三级结构的多肽链称为亚基。概念蛋白质分子中各亚基之间的空间排布和相互接触关系。化学键氢键、盐键、范氏引力、疏水键等非共价键。 蛋白质结构中应注意的几个问题由一条多肽链形成的蛋白质其最高级结构为三级，具有三级结构的蛋白质才具有生物学活性。形成蛋白质的四级结构至少要有两条多肽链。两条或两条以上的多肽链靠共价键连接的蛋白质没有四级结构。由一条多肽链形成的蛋白质与亚基不同。 三、蛋白质的结构与功能蛋白质一级结构与功能的关系一级结构决定蛋白质的空间结构；一级结构决定蛋白质的生物学功能。蛋白质空间结构与功能的关系蛋白质构象是其生物学功能的基础，构象改变功能改变。 第三节蛋白质的理化性质 一、蛋白质的两性解离与等电点1.蛋白质是两性电解质蛋白质分子中可解离的基团多肽两端游离的α-氨基和α-羧基多肽侧链R上解离的基团决定蛋白质解离成正负离子的因素蛋白质所含酸性和碱性基团的数目蛋白质所在溶液的pH值 2.蛋白质的等电点（pI）当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。蛋白质等电点性质为电泳分离的依据。 NH2COO-PrNH3+COOHPrNH3+COO-OH-H+Pr(pH＜pI)(pH＝pI)(pH＞pI)蛋白质的阳离子蛋白质的兼性离子蛋白质的阴离子OH-H+ 体内大多数蛋白质的等电点在pH5.0左右，因而在生理条件下以阴离子形式存在。 3.电泳带电粒子在电场中向电性相反的电极移动的现象。蛋白质在带电场中泳动的速度和方向与其所带电荷的性质、数量及分子的大小、形状有关。带电荷多，分子小的泳动速度较快；反之则泳动较慢，从而达到分离蛋白质的目的。 二、蛋白质的胶体性质1.蛋白质有胶体性质蛋白质是生物大分子，分子量在1万～10万Da之间，分子直径在胶体颗粒的范围（1~100nm），因此，蛋白质具有胶体的性质。 2.蛋白质亲水胶体稳定的因素蛋白质分子表面的水化膜和同种电荷。去掉两个稳定因素，则蛋白质从溶液中析出而产生沉淀。3.蛋白质胶体性质的应用透析用于分离纯化蛋白质超速离心用于蛋白质的分离纯化及分子量的测定。 变性的概念在某些物理或化学因素的作用下，蛋白质特定的空间构象被破坏，从而导致其理化性质改变和生物活性丧失，称为蛋白质的变性。变性的实质次级键断裂，空间结构破坏三、蛋白质的变性、沉淀和凝固 引起变性的因素物理因素高温、高压、紫外线、电离辐射、超声波等。化学因素强酸、强碱、有机溶剂、尿素、重金属盐等。 变性蛋白质的特点A.生物学活性丧失B.溶解度降低，易于沉淀C.粘度增加D.结晶能力消失E.易被蛋白酶水解 蛋白质变性的应用应用变性的因素进行消毒、灭菌。保存生物制剂则要防止蛋白质变性。蛋白质的复性大多数蛋白质变性后，空间构象严重破坏，不能恢复其天然状态，称为不可逆性变性；若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素，有些可恢复其天然构象和生物活性,称为蛋白质的复性。 牛核糖核酸酶的变性与复性 蛋白质沉淀概念蛋白质从溶液中析出的现象称为沉淀。方法盐析法、有机溶剂的沉淀、重金属盐沉淀、生物碱试剂沉淀。变性的蛋白质易于沉淀，但不一定都发生沉淀。沉淀的蛋白质易发生变性，但并不都变性，如盐析。 四、蛋白质的紫外吸收性质蛋白质分子中含有共轭双键的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸残基，具有紫外吸收能力，在280nm处有最大吸收峰。此特性常用于蛋白质含量的测定。 五、蛋白质的免疫学性质蛋白质作为大分子，往往具有免疫原性，同时，抗体也是蛋白质。抗原（免疫原）：凡能刺激机体免疫系统产生免疫应答，并能与相应抗体或致敏淋巴细胞受体发生特异性结合的物质。抗体：机体中因抗原刺激而产生的能与相应抗原特异结合并具免疫功能的免疫球蛋白。单克隆抗体：由针对某一个特定抗原决定簇而分化、增殖而来的B淋巴细胞群合成并分泌的抗体。 六、蛋白质的呈色反应1.双缩脲反应：肽键与双缩脲试剂反应呈紫色；氨基酸无此反应，可用于检查蛋白质的水解程度。碱性溶液中与Cu2+产生蓝色，mg级测定2.茚三酮反应:酸性条件下，与茚三酮共热产生蓝紫色3.Folin—酚试剂反应碱性+Cu2++磷钼酸-磷钨酸→蓝色范围:25-250μg(Tyr,Trp的反应) 1.紫外分光光度法:280nm,0.1-0.5mg/ml(样品含核酸时)蛋白质(mg/ml)=1.55A280-0.75A2602.福林-酚试剂法:碱性+Cu2++磷钼酸-磷钨酸→蓝色范围:25-250μg(Tyr,Trp的反应)七、蛋白质的含量测定 3.Biuret法：蛋白质+碱性+Cu2++BCA试剂(4,4‘-二羧酸-2,2’-二喹啉钠)→紫色(562nm)范围:10-1200μg/ml4.Bradford蛋白分析法:考马斯亮蓝G-250+乙醇+酸性→淡红色+蛋白质→蓝色(595nm)范围:10-100μg/ml 5.双缩脲法肽键+碱性+Cu2+→紫红色范围:0.5-10mg/ml6.凯氏定氮法1g氮相当于样品含有6.25g蛋白质 第四节蛋白质的分离纯化 一、蛋白质的提取1.选材：新鲜、富含目的蛋白且来源方便2.组织细胞的粉碎：胞内及膜中蛋白物理法：如超声、匀浆、加砂研磨、高压挤压等化学法：如EDTA、SDS等酶法：如自溶法、外加酶法（纤维素酶、果胶酶、溶菌酶等）3.提取：适当溶媒、适当条件、适当提取时间和次数 二、蛋白质的分离纯化（一）根据溶解度不同1.等电点沉淀:蛋白质在pI时溶解度最小2.盐析(分级):大量中性盐如(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl加入蛋白质溶液中,破坏蛋白质在水溶液中的稳定性因素而沉淀.各种蛋白质盐析时需盐浓度及pH不同.3.低温有机溶剂沉淀(分级):降低水的介电常数 （二）根据分子大小不同1.透析和超滤(分级):根据分子量的大小，用透析袋或滤膜将大、小分子物质分开2.凝胶过滤(分子排阻层析):又称分子筛，柱内填满带有小孔的颗粒，一般为葡聚糖3.密度梯度离心:根据粒子密度差进行分离。蔗糖,CsCl (三)根据电离性质不同1.电泳法:蛋白质泳动的方向和速度取决于蛋白质分子所带电荷的性质、数量及质点的大小和形状1)醋酸纤维素薄膜电泳2)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)3)等电聚焦电泳4)免疫电泳2.离子交换层析（如下页图）1)离子交换纤维素2)离子交换凝胶3)大孔型离子交换树脂 (四)根据配基特异性亲和层析:根据生物大分子与其配基间特异的亲和结合(可逆)如Ag-Ab、蛋白A与其补体、酶与其底物或抑制剂、互补的核酸链间等 三、蛋白质的纯度鉴定1.层析法:单一洗脱峰→层析纯(HPLC)2.电泳法:单一区带→电泳纯高效毛细管电泳(HPCE)3.免疫化学法:→免疫纯放射免疫分析法(RIA)酶标记免疫分析法(EIA) 半饱和硫酸铵离心球蛋白沉淀血清血清离心饱和硫酸铵白蛋白沉淀不同浓度硫酸铵对血清的盐析结果返回 分子筛层析原理示意图 返回 密度梯度离心示意图返回 肝脏基本功能:参与多种物质的代谢过程，如蛋白质、糖、脂类、维生素、激素等物质的代谢。还有分泌、排泄、生物转化及胆红素代谢等方面的功能。人体“中心实验室”或“物质代谢中枢”①蛋白质代谢功能检查；②胆红素代谢检查；③血清酶检查；④肝纤维化常用标志物检测；⑤病毒性肝炎常用标志物检测等。肝脏病常用实验室检查 一、蛋白质代谢功能检查血浆白蛋白、α1、α2及β球蛋白由肝脏合成，几乎所有的凝血因子在肝脏制造。γ球蛋白主要来自浆细胞,当肝实质细胞受损、间质细胞增生时,γ球蛋白生成便增加。此外，肝脏还具有维持血氨平衡的作用。当肝脏有病变时其对血氨的处理能力下降，导致血氨增高，引起肝性脑病。 （一）血清总蛋白和白蛋白、球蛋白比值测定【参考值】血清总蛋白：60～80g/L；白蛋白：40～55g/L；球蛋白：20～30g/L；A/G比值：1.5～2.5:1。【临床意义】1.急性肝损害总蛋白不下降,γ球蛋白生成增加。2.慢性肝病慢性肝炎肝硬化肝癌。白蛋白减少,球蛋白增加,A/G比值减低,并随病情加重。 3.低蛋白血症肝外因素如摄入不足消化不良,蛋白质丢失过多。4.高蛋白血症或高球蛋白血症总蛋白高于80g/L或球蛋白高于35g/L。主要以γ球蛋白增加为主,见于肝硬化、淋巴瘤、慢性炎症、自身免疫性疾病、浆细胞病。 （二）血清蛋白电泳【参考值】白蛋白0.61～0.71（61%～71%）α1球蛋白0.03～0.04（3%～4%）α2球蛋白0.06～0.10（6%～10%）β球蛋白0.07～0.11（7%～11%）γ球蛋白0.09～0.18（9%～18%）【临床意义】1.肝病血清白蛋白、α1、α2及β球蛋白减少,γ球蛋白增加,是肝病患者血清蛋白电泳的共同特征。γ球蛋白增加是受损的肝细胞作为抗原刺激机体免疫系统所致。2.肝癌α1、α2球蛋白常增高,偶可在白蛋白与α球蛋白之间出现一条甲胎蛋白区带。 (三)血清前白蛋白测定前蛋白在肝脏合成,半衰落期较其他血浆蛋白短(约2天),比白蛋白降低更能早期反映肝细胞损害。(四)血浆凝血因子测定大多数凝血因子都在肝脏合成,且凝血因子的半衰落期比大多数白蛋白短,尤其是维生素K依赖因子,故血浆凝血因子测定可作为肝脏疾病的早期诊断。(五)阻塞性脂蛋白-X测定阻塞性脂蛋白-X是胆道阻塞、肝汁淤积时,胆汁内的磷脂逆流入血而形成的。阻塞性脂蛋白-X是诊断阻塞性黄疸灵敏且特异的指标,而有助于胆汁淤积性黄疸的诊断。 (六)血氨测定体内80%～90%的氨主要在肝中合成尿素而解毒，当肝脏功能严重受损时，血氨升高。血氨升高见于严重肝脏损害，如重型肝炎、肝硬化、肝癌等疾病，亦见于上消化道大出血、高蛋白饮食或剧烈运动、休克，尿毒症等肝外因素。血氨升高是诊断肝性脑病的重要依据。 二、胆红素代谢检查(一)血清结合胆红素与总胆红素定量试验【参考值】总胆红素3.4—17.1μmol/L结合胆红素0—6.8μmol/L非结合胆红素1.7—10.2μmol/L【临床意义】1.反映黄疸的程度隐性黄疸——总胆红素17.1～34.2lμmol/L临床黄疸——总胆红素>34.2lμmol/L2.鉴别黄疸类型肝细胞性黄疸＼溶血性黄疸＼阻塞性黄疸 （二）尿胆红素定性试验【参考值】尿中含微量结合胆红素（约为3.4μmol/L）,定性为阴性。【临床意义】确定黄疸及类型肝细胞性黄疸——尿内胆红素中度增加阻塞性黄疸——尿内胆红素明显增加溶血性黄疸——尿内胆红素定性试验为阴性 （三）尿胆原检查【参考值】定性为阴性或弱阳性反应。【临床意义】溶血性黄疸尿胆原明显增高。肝细胞性黄疸时，尿胆原增加或不增加。高热＼心衰＼便秘，亦可增加。阻塞性黄疸尿胆原减少。 血清胆红素定量（μmol/L）尿液粪便总胆红素非结合胆红素结合胆红素尿胆原尿胆红素颜色粪胆原健康人3.4-17．１11.7-10.20-6.81:20(一)(一)黄褐色正常溶血性黄疸↑↑↑↑轻度↑或正常强（+）（一）加深增加阻塞性黄疸↑↑轻度↑或正常↑↑（一）（+）变浅或灰白色↓或消失肝细胞性黄疸↑↑↑↑（+）或（-）（+）变浅或正常↓或正常三种黄疸的鉴别 三、肝脏常用的血清酶及同工酶检查 （一）血清氨基转移酶及其同工酶测定用于肝功能检查的主要是丙氨酸基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）。在肝细胞中，ALT主要存在于非线粒体中，而大约80%的AST存在于线粒体内。【临床意义】1．转氨酶升高见于各种肝病。急性病毒性肝炎ALT与AST均显著升高，以ALT升高更加明显。急性重症肝炎一般以AST升高为主。但病情恶化时，出现“胆-酶分离”现象，提示肝细胞严重坏死，预后不良。 急性心肌梗死AST升高为主，6～8小时上升，18～24达高峰,与心肌梗死范围和程度有关。2.ALT/AST比值一般ALT>AST,严重肝病慢性肝炎活动AST>ALT。3.AST同工酶存在于胞浆中ASTS；存在于线粒体中ASTm。轻中度肝损以ASTS升高为主,重症肝病ASTM升高。 (二)碱性磷酸酶（ALP）及其同工酶测定血清中ALP主要来源于肝脏和成骨细胞，肝内及来自肝外的ALP经胆汁排入小肠。碱性磷酸酶同工酶有6种类型。【临床意义】1.生理性增加见于生长中的儿童（ALP3）及妊娠中晚期妇女（ALP4）。2.病理性增加胆道梗阻:ALP明显升高，以ALP1为主。黄疸的鉴别诊断肝脏疾病:肝炎肝硬化肝胆外疾病 (三)γ谷氨酰转移酶（γGT）及同工酶测定血清中γGT主要来自肝胆系统，因此当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时，血清中γGT增高。血清中γGT的同工酶有3种形式。【临床意义】1.肝癌可达参考值上限的10倍以上，以γGT2增高为主。2.胆道阻塞明显升高,5～10倍。3.肝脏疾病急性慢性肝炎,肝硬化等4.其他疾病胰腺炎/肿瘤,前列腺肿瘤 (四)乳酸脱氢酶（LDH）及其同工酶测定乳酸脱氢酶广泛存在于人体各组织中,以心肌骨骼肌肾脏最多。【临床意义】肝脏疾病:乳酸脱氢酶活性升高见于急性肝炎和慢性活动性肝炎、肝癌等。LDH5增高且LDH5＞LDH4，是诊断肝细胞坏死的敏感指标。急性心肌梗死时，LDH1和LDH2均增高，且LDH1＞LDH2。其他疾病:溶血性疾病,恶性肿瘤,白血病等。 四、肝纤维化常用标志物检测(一)Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢP）测定慢性肝炎、肝硬化患者，肝脏结缔组织的生物合成增加，其主要成分是胶原。在胶原生成初期，首先生成前胶原，前胶原受到肽酶切割分离而成为Ⅲ型胶原和PⅢP。PⅢP是诊断肝纤维化和早期肝硬化的良好指标。 (二)透明质酸（HA）测定肝内储脂细胞是合成HA的主要部位，慢性肝炎、肝纤维化活动时HA明显升高，并与PIIIP呈显著相关。(三)脯氨酰羟化酶（HP）测定HP是胶原纤维合成酶，当肝纤维化时，血清中HP增高，因此测定血中PH活性可作为肝纤维化的指标。(四)单胺氧化酶（MAO）测定血清中MAO活性与体内结缔组织增生呈正相关，因此血清中MAO活性的高低能反映肝纤维化的程度，是诊断肝硬化的重要指标。 五、病毒性肝炎标志物检测甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、丁型肝炎病毒（HDV）和戊型肝炎病毒（HEV）。(一)甲型肝炎病毒标志物检查RNA病毒，粪口途径传播，多引起急性肝炎。抗HAV-IgM阳性——早期特异性指标抗HAV-IgG阳性——提示既往感染HAVAg——急性甲肝HAV-RNA——诊断特异性,早期 (二)乙型肝炎的病毒标志物检测HBV属嗜肝DNA病毒。HBV的传播途径是体液传播和母婴传播，唾液传播方式。HBV的3种抗原HBsAg、HBcAg、HBeAg，对应的抗体为抗-HBs、抗-HBc和抗-HBe。1.HBsAg及抗-HBsHBsAg是感染HBV的标志，HBsAg的多少与HBV的生成量相平行。抗-HBs一般在发病后3～6个月才出现，是一种保护性抗体。临床上约有10%～20%的慢性乙肝患者HBsAg可同时存在，这是由于HBsAg发生变异，抗-HBs不能完全中和HBsAg所致。 2.HBcAg及抗-HBc血液中测不到游离的HBcAg。抗-HBc不是中和抗体,而是反映肝细胞受到HBV侵害的可靠指标,主要有IgM和IgG两型。抗-HBcIgM最早的特异性抗体。抗-HBcIgG在机体感染HBV后1个月左右开始升高，能反映抗-HBc总抗体的情况。3.HBeAg及抗-HBeHBeAg阳性表示HBV在复制，传染性强。抗-HBe多见于HBeAg转阴的病人，是传染性降低的一种表现。抗-HBe并非保护性抗体，它不能抑制HBV的增殖。4.HBV-DNA和DNA聚合酶灵敏,特异 (三)丙型肝炎病毒标志物检测HCV为RNA病毒，主要通过输血而感染，占输血后肝炎的80%～90%。抗-HCVIgM阳性见于急性丙型肝炎患者。抗-HCVIgG阳性表明已有HCV感染（现症感染或既往感染），输血后肝炎有80%-90%的患者抗-HCVIgG阳性。HCVRNA阳性是HCV感染和复制的直接指标。 (四)丁型肝炎病毒标志物检测HDV是必须借助HBV外壳才能复制的缺陷性RNA病毒。抗-HDVIgM————丁型肝炎的早期诊断。抗-HDVIgG————诊断丁型肝炎，可以持续多年。HDV-RNA————特异性的确诊丁型肝炎。 (五)戊型肝炎病毒标志物检测HEV是RNA病毒，通过粪口途径传播，主要引起急性肝炎。抗-HEVIgM阳性(持续2～3月)是确诊HEV感染较为可靠的指标,急性期感染。抗-HEVIgG阳性(持续1年)保护性抗体,近期感染。'