最新大黄鱼Rac基因cDNA全长克隆及分析PPT课件PPT课件 21页

'大黄鱼Rac基因cDNA全长克隆及分析PPT课件 主要内容研究背景与意义技术路线结果与分析结论致谢语 产物回收产物与载体的连接转化初筛重组子 图4凝胶电泳检测菌落PCR产物M：DNAMarker；1：以水作为模板的阴性对照；2:以PCR产物为模板的阳性对照；3-6：菌落PCR4、PCR筛选克隆子结果M123456随机挑4个克隆子均含有约530bp的目的条带，都为阳性克隆 5、3’RACE第一轮PCR结果图6凝胶电泳检测3ˊRACE第一轮反应产物M：DNAMarker；1：第一轮反应产物；第一轮扩增得到一条较亮的1100bp左右的条带，阴性对照无条带. 6、3’RACE第二轮PCR图7凝胶电泳检测3ˊRACE第二轮反应产物M：DNAMarker；1：第二轮产物第二轮扩增得到一条大小介于250-500bp之间的条带，与目的条带预期大小基本相符，阴性对照无条带，表明该片段可能就是所需片段，将琼脂糖块回收做后续实验。 7、3’RACE克隆产物的鉴定结果图8凝胶电泳检测菌落PCR产物M：DNAMarker；1：以水作为模板的阴性对照；2：第二轮PCR产物为阳性对照；3-4：菌落PCR扩增产物两个菌落均含有目的条带 8、5’RACE第一轮PCR结果图10凝胶电泳检测5ˊRACE第一轮反应产物M：DNAMarker；1：第一轮反应产物；2：阴性对照第一轮扩增产生100-400bp的拖带，但还没有明显条带 9、5’RACE第二轮PCR结果图11凝胶电泳检测5ˊRACE第二轮反应产物M：DNAMarker；1：以水作为模板的阴性对照；2：第二轮PCR产物经第二轮扩增,在300bp左右处有特异性条带出现并且阴性对照无条带 产物回收产物与载体的连接转化初筛重组子 10、5’RACE克隆产物的鉴定图12凝胶电泳检测菌落PCR产物M：DNAladder；1：以水作为模板的阴性对照；2：以第二轮PCR产物为阳性对照；3-5：菌落PCR扩增产物3个菌落均含有目的条带 图14Rac基因部分序列及由此推测的氨基酸序列图中阴影部分是编码区；下划线标注为终止密码TAA；方框中是加尾信号AATAAA获得的片段大小为1272bp，其中包含的编码区579bp，编码193个氨基酸。5’端非编码区长80bp3’端非编码区长613bp，具有脊椎动物典型的加尾信号AATAA和polyA尾巴 结论本实验根据其它动物Rac基因序列设计简并引物，通过RT－PCR和RACE方法扩增出大黄鱼Rac基因cDNA全长1272bp,其中编码区（ORF）为579bp,编码193个氨基酸。 致谢语感谢韩芳老师在整个毕业论文设计过程中给予的悉心指导，感谢她对我孜孜不倦的教诲！同时感谢课题组的全体老师和同学给予的鼓励和无私的帮助！ '