(4)实验鼠繁育、保种要求及规则----王桂琴课件PPT.ppt 74页

'(4)实验鼠繁育、保种要求及规则----王桂琴 小鼠繁育、保种的规则分笼和预留鼠的管理初生鼠的代乳操作方法职业道德与动物福利小鼠吃仔的原因及解决方法繁殖鼠的合笼要求及操作工程基因鼠检栓交配方法 小鼠繁育、保种的基本规则和操作方法（一）繁殖鼠的合笼要求小鼠的一般寿命为1-2年，生育期为1年。随着年龄的增长，其繁殖能力将逐渐下降。而且有的雌鼠会出现难产、食仔、幼仔畸形,年龄偏大造成皮肤溃烂等情况。因此，繁殖鼠的年龄为8-10个月，超过10个月时应淘汰。并根据实验计划合理安排小鼠繁殖笼的数量。提醒：繁育期的计算是从小鼠出生日开始，而不是从合笼日期开始。 合笼前首先要明确繁殖鼠的遗传背景，品系名称以及基因型和代数，不可混淆。合笼时要先将雄鼠放入笼内，再按1:2或1:1的比例将雌鼠放置雄鼠笼内。如果将雄鼠放入雌鼠笼内配繁，雄鼠会显得胆小畏缩，有时还会发生雌鼠追咬雄鼠的情况，影响繁育的进行。在配繁殖笼操作中要注意雌雄鼠的放入顺序。繁殖鼠的合笼操作 图示：雄鼠因学生操作不当造成二雄打架斗殴所致图示：雄鼠因放入顺序不当被雌鼠追咬致伤 在制定繁育计划时，应根据品系的繁殖特点配置繁殖笼数。例如，繁育OB、DB品系时发现获取纯合子后代出生几率较低，是通过杂合子互配的方式繁育的（纯合子不育），后代出现纯合子的几率为1/4，而出现纯合子雄鼠的几率为1/8。繁育BALB/c-Nu获得纯合子的几率为1/2，出现纯合子雄鼠的几率为1/4。免疫缺陷的Scid、Ncg品系，繁殖能力差，产仔率低，产仔3胎后繁殖鼠的体质就逐步下降。这类品系繁育期较短，因此繁殖笼数量应较大，并且要定期更新繁殖笼。繁殖鼠的合笼要求 合笼的繁殖鼠年龄不宜过大或过小,如果超过4个月才合笼，其繁殖能力会明显下降。繁殖鼠以两月龄、体重25克左右为宜；不能用瘦小或肥胖鼠、掉毛的鼠配繁殖笼。合笼时要查看小鼠的生殖器官发育是否正常，尤其要检查雌鼠是否为双阴道，为防止交配受阻，发现双阴道雌鼠应淘汰。繁殖鼠的合笼操作图示：双阴道雌鼠 繁殖鼠的合笼操作合笼后应注意观察雌鼠的产仔情况。正常为合笼后19至20天产仔。如发现2个月后仍未产仔，要根据情况考虑更新淘汰注意：当日产仔的雌鼠不宜加喂葵花子或花生米。会影响刚出生的小仔哺乳。 繁殖鼠的合笼操作小鼠有的症状往往是品系本身的固有特征。年龄到6周后表型特征会越明显。所以，实验人员、保种员要注意在观察中不应把固有特征的小鼠作为异常鼠淘汰。注意：这类鼠不能选择繁殖能力强，体格健壮缺乏固有表型特征的鼠配繁殖笼，以防止将原有的特定基因丢失。小鼠本身的固有表型特征 小鼠吃仔的原因及解决方法小仔被吃的原因：母鼠在怀孕和哺乳期间营养不良、窝产仔数量多，导致泌乳量相对不足时会使其吞食幼仔。孕鼠年龄偏大且无泌乳能力，为维持自己的体力而食仔。产前产后缺水。孕鼠在生产过程中要消耗大量的体液和能量，产后口渴在舔食胎盘时引发吃仔。母鼠以维持种群的正常生存。对出生后不健康、畸形的幼仔会产生吃仔的习惯，。刚产仔的母鼠受到惊吓感到危险也会吃仔。包括噪音、光照和人为经常性的观察等。有些繁育鼠是首次产仔，不知道如何处理自生幼仔，吃仔是正常的。第二次产仔就不会发生此现象。 针对吃仔问题的解决方法：对产仔胎数多的母鼠在怀孕期间食物中要适当增加葵花籽或花生给孕鼠补充营养。对当天出生的幼仔尽量避免用手触摸，不要打扰母鼠哺乳，母鼠产仔的三天内不要换笼，要保持原有的气味。要及时分出离乳小仔，防止母鼠超量哺乳而丧失母性行为。要处理和淘汰年龄大、习惯性吃仔的母鼠。可以将无泌乳能力的孕鼠提前与母性好、泌乳好的受孕鼠放一笼代养。要控制噪音或有震动等不利的环境影响。 小鼠繁育、保种的基本规则和注意事项（二） 繁殖笼的管理要求及操作方法标签（挂牌）是小鼠的身份证。在填写繁殖笼标签时，应仔细核查标签内容，做到万无一失。标签的主要内容包括：品系名称、脚趾编号、基因型、性别、代数；每笼繁殖鼠的出生日期、合笼日期、负责人姓名、所属实验室、手机号。图中标签内容信息不清晰、填写不规范 繁殖笼的管理要求及操作方法繁殖鼠的饲养环境很重要，必须减少噪音和人为因素的干扰。繁殖笼一般应放置于人员走动较少的角落；白化鼠的繁殖笼不可放在笼架的顶层（强光照度损伤视网膜），白化小鼠放在笼架的中下层为宜。比如：BALB/c、FVB、Scid、Nu/Nu、Ncg等品系。不同品系的小鼠在同一面架子上挂牌要用不同颜色区分；命名和表型相似的小鼠不要放在同一层笼位上，以免混淆。比如：DB、OB、DBA/1J、DBA/2J、CBA/caJ、BALB/c、BALB/c-Nu等品系。 繁殖笼的管理要求及操作方法当雌鼠产仔胎数较多时，容易出现子宫脱垂情况。因此，在繁殖笼日常管理中，要注意观察。出现这种情况应及时淘汰。 繁殖笼的管理要求及操作方法基因敲除鼠的繁殖年龄偏大，容易出现胚胎致死或难产的现象，如果能及时发现，可通过医疗器械帮助产仔（用小镊子将母鼠阴道口的死胎拽出）；采取剖腹产的方法来挽救活体小仔。同时给小仔找代乳鼠。注意：随时跟进被代乳小仔健康状况及代乳情况。图示：难产雌鼠图示：难产而死亡的雌鼠 繁殖初生鼠的代乳操作方法有的品系雌鼠虽有生育能力，但无泌乳能力，生育后经常食小仔。为避免这种情况，应采用代乳方法喂养幼仔。选择产仔1-2天、泌乳好、母性好的雌鼠为代乳鼠，如：Nu/Nu的杂合子、C57BL/6J、BALB/c、ICR鼠。 代乳鼠的注意事项产仔3天以上的雌鼠不可作代乳鼠（因为已认定自己小仔的气味）在选择代乳鼠时，应注意代乳鼠的毛色与所代喂的幼仔有较大差异,便于分辨。3.如果代乳鼠自身后代较多，可以丢弃部分小仔，以保证被代乳小仔的生存健康。4.注意：在标签上注明被代乳鼠的品系名称、出生日、代乳操作者姓名。要观察被代乳鼠的存活情况。 为什么工程基因鼠采取检栓交配方法？为尽快得到大量实验鼠，争取技术项目时间，在雄鼠少雌鼠多的情况下可采用检栓交配法。对繁殖能力弱或不能及时提供足够数量做实验的繁殖鼠，可采用检栓交配法。此方法可获得所需实验用鼠的统一时间及数量。检栓配方法可以更好的掌握雌鼠的分娩时间，避免出现难产和吃仔情况。实践证明，检栓交配方法对取胚胎的实验能准确掌握孕鼠的天数很有帮助。 检栓操作方法步骤提前2天将雄鼠单放。配笼时的第一天下午4:00将雌雄按2:1合笼；第二天早晨8:30至9:00检栓。对已交配的雄鼠登记日期,见栓标记“+”、未见栓标记“-”。提醒：同一只雄鼠得到的见栓雌鼠最多可以两只放在一笼中，且不同雄鼠得到的见栓雌鼠要分开放置。注：雄鼠不要连续交配使用。已见栓雌鼠 7-10天取胚胎对孕鼠的鉴别操作方法：用食指和拇指轻轻触摸雌鼠子宫部位。见右图：如感觉比绿豆略小1/2，则为7天左右孕期。10天的孕鼠肉眼即能分辨，小腹与正常鼠相比略有凸起（部分多胎生仔的雌鼠腹部较肥，肉眼不易与孕鼠区分，可采用指摸法加以辅助） 小鼠繁育、保种的基本规则和注意事项（三） 离乳分笼小鼠操作注意事项为了防止繁殖笼内出现多胎小仔，防止鼠群混乱交配。为此，小鼠出生20或21天后必须分笼。否则将造成代际混乱。分笼前准备好高压灭菌后的笼具、镊子、饮用水、饲料和小鼠记录牌；将操作台用0.2%新洁尔灭擦拭干净待用。 离乳分笼小鼠操作注意事项为了防止刚断奶的小鼠因为取食能力较弱而夭折。在分笼时可在小鼠笼内放置少许碎饲料和果冻，以帮助小鼠取食注：为防止小仔夭折，不要提前分笼。在分笼过程中如果发现分笼小鼠与剪尾只数不符合，需要仔细核对小鼠的脚号（小仔发生死亡现象）。 离乳分笼小鼠操作注意事项分笼后的小鼠按照标准密度5只一笼饲养，且尽量让其群居，不要单只放，因为孤独的小鼠也会产生忧郁症。若需要单只一笼饲养要注意它左右必须有“邻居”陪伴，要保证其生存环境相对合理。 离乳分笼小鼠操作注意事项分笼时要注意小鼠的生长发育情况。有的同龄小鼠生长状况差异较大如图所示：个头较小的鼠是因为它们的母亲连续怀孕，泌乳不足造成的。但分笼后只要正常饲养，个头较小的鼠仍然能够正常生长。 随着小鼠的生长，一些不良特征会逐渐显现出来。如掉毛、头大身小（脑水肿）、萎靡不振、牙长、皮肤溃烂、不停的转圈（中耳炎）等现象。发现这些情况的鼠可以考虑淘汰。图示：牙长小鼠图示：患脑水肿小鼠 保持种群延续，防止种群灭亡根据保种的实践经验，对产仔率较高（每胎6-8只）的繁殖鼠，可配2笼延续保种，库存量中雄雌各留种4-6只。对产仔率较低或产仔情况不正常的繁殖鼠（尤其是转基因鼠），要配3-5笼，库存量中雄雌各留8-10只,以便替换繁殖笼用。7-8周的年轻小鼠如果繁殖能力强，则淘汰较老的繁殖鼠。这样可避免盲目饲养、占用笼位。 调整预留鼠的注意事项在整理预留鼠时，不应把不同窝的成年雄鼠合放在一起，因为所有的雄鼠都有较强烈的领域意识。随着年龄的增长，雄鼠的斗殴现象会普遍存在。尤其是单个饲养的雄鼠攻击性更强。皮肤溃烂鼠为打架斗殴所致 “剃头”现象是小鼠排列优胜次序行为的一种特殊表现。占优势的小鼠把同笼内其它小鼠面部或背部的毛“剪光”。群体内最终仅剩一只“剃头者”未脱毛。虽然这种行为对小鼠本身无害处，但第一次发现时，很难将此现象与其它一些由疾病引起的较为严重的脱毛症区分开来。图中鼠为理毛行为 分笼及预留鼠的管理提醒:在淘汰预留小鼠时，基因鉴定结果未出来前，不得将现留的符合基因型要求的鼠处理掉。在给小鼠分笼时会淘汰部分小仔，应注意留下足够数量的库存鼠，以保证繁殖笼的更新。分笼时，饲料投放应恰当，放过多，易霉变。小鼠将长期吃不到新鲜饲料，造成脱毛、瘦弱等营养不良现象。饲料投放量以一周食量为宜（1只成年鼠日耗量为4g)。 分笼及预留鼠的管理有的品系小鼠性情活泼，易发生逃逸。我们在饲养区域如果发现有逃逸的小鼠，捕获后对背景不明确的应进行安乐死。或根据实验需要单独饲养，以防品系错乱。 职业道德与动物福利我们应该以尊重生命的态度尊重实验动物。在工作中应该重视实验动物的生活和试验环境。以人道主义的态度对待实验动物在发达国家已经成为共识，并已形成相关法规。遵守人道主义原则，不戏弄实验动物，不让实验动物遭受不必要的痛苦和伤害。 职业道德与动物福利如果痛苦和伤害在实验研究中不可避免，应尽量减少其强度，缩短其时间。看到动物的剧痛不能缓解时，应迅速采用可接受的方法使其安乐死。包括快速丧失其知觉。禁食和禁水实验只能短期进行，不应损害动物的健康。所有小鼠不得在动物房外的任何地方过夜（遇到野鼠或被污染后会直接影响实验结果）。当天取出的小鼠必须完成当天的实验。 各种品系的繁育特点及工作经验C57BL/6JB6.V-Lepob/JBALB/c-NuCBA/CaJ 介绍各种品系小鼠的繁育特点及工作经验品系名称C57BL/6J简称B6品系描述：B6鼠是使用最广泛的一种品系。被用于各种领域的研究，包括心血管生物学、发育生物学、糖尿病及肥胖症、遗传学、免疫学、神经生物学及感觉生物学的研究。同时可运用于转基因小鼠的生产。 B6鼠的繁育特点及工作经验雄性繁殖鼠的年龄应在10周；雌性繁殖鼠应在8周。2.由于B6鼠使用广泛，需求量较大。在保持一定数量繁殖笼的同时，应不断更新繁殖鼠，以保持较强的繁育能力。繁殖鼠的繁育年龄为8个月。3.B6鼠的母性较好，一般不需要代乳。 4.为了保持B6鼠的生育能力，每周应加喂葵花籽适量。均每只鼠约10粒。如果葵花籽饲喂量大，会导致肥胖，生育能力下降。5.当天产仔时不宜加喂葵花籽，否则会干扰雌鼠哺乳，易造成刚出生的小仔夭折。6.由于B6鼠的遗传特性，四周大的新生小鼠会出现脑水肿状况；成年雌鼠也会出现双阴道情况。遇到这种情况应及时淘汰，不能作为库存鼠保留。 品系名称B6.V-Lepob/J简称OB 品系描述：OB纯合子鼠可以应用于很多方面的支持性研究，包括：糖尿病和肥胖研究、免疫和炎症研究等。 OB鼠的繁育特点及工作经验１.OB雄性繁殖鼠的年龄应在8周；雌性繁殖鼠应在6周以上。２．只能用杂合子鼠作为繁殖鼠使用。野生型和纯合子鼠不能作为繁殖鼠用。因此应根据基因鉴定结果来选择繁殖鼠。第一胎小鼠容易死亡。大多数繁殖笼第二胎正常，但个别繁殖笼第二胎小仔也会死亡。在配繁殖笼的初期应加喂葵花籽。 5.OB繁殖鼠不可喂高脂饲料，否则后代会有脱毛现象。发现脱毛小仔后应立即处理。脱毛小鼠不能作为繁殖鼠使用。OB杂合鼠的生育年龄为10-12个月。由于新生小鼠中纯合子出现的比例较低。（后代出现纯合子的几率理论为1/4，纯合子雄鼠只有1/8）。因此为满足纯合子新生小鼠的需求，因适量增加繁殖笼数量，并要常观察、更新和淘汰繁殖笼。 品系名称BALB/c-Nu简称NU/NU 品系描述：纯合体裸鼠有两个主要的缺陷，毛发生长不正常和胸腺上皮细胞发育不全。虽然这些小鼠看起来无毛，但是它们出生就具有有功能的却不完善的毛囊。纯合体幼鼠在24小时内就能被识别出来，它们缺少胡须或胡须长得不好，起皱。BALB/c-Nu品系小鼠的特点 裸鼠可以应用于很多方面的研究，包括：皮肤病学研究;内分泌缺陷研究;用于免疫学、肿瘤学和炎症的研究;BALB/c-Nu鼠的特征：胸腺缺陷，生长发育不良，繁殖力低下，对感染性疾病敏感。 BALB/c-Nu繁育特点和工作经验用纯合子雄鼠与杂合子雌鼠配繁殖笼。纯合体雌鼠无生育能力（无乳液），不能作为繁殖鼠使用。雄性繁殖鼠的年龄应在8周；雌性繁殖鼠应在6周。雄性裸鼠的生育年龄为8个月。生育能力随年龄增长下降迅速。 BALB/c-Nu杂合子母鼠性情温顺，母性好，泌乳好，产仔率高。因此经常作为代乳鼠使用。由于BALB/c-Nu新生小鼠中纯合子出现的比例较低。因此为满足纯合子新生小鼠的需求，因适量增加繁殖笼数量。 分笼时如发现该笼纯合子小鼠较多时，可将同窝的杂合子雌鼠留作繁殖鼠用，以保证较高的纯合子出生率。分笼时可在纯合子小仔的笼内配放1～2只有毛的同性杂合子小仔。以便相互依偎保暖，6周后即可分开饲养。 品系名称CBA/CaJ品系描述：CBA/CaJ是一种寿命很长并且低肿瘤发生率的近交系小鼠。此品系小鼠可以应用于很多方面的支持性研究。包括：癌症研究，增加肿瘤的发病率（肝细胞瘤，淋巴瘤，晚期乳腺瘤）。糖尿病和肥胖症的研究。高血糖和高胰岛素血症（成年雄鼠）等等。 CBA雄鼠与B6雌鼠交配产生的杂交F1具有较强的生命力，对疾病抵抗力强，寿命较长，容易饲养。适合于携带保存某些有害基因和长期慢性致死疾病实验。也可作为胚胎和卵巢移植的受体。同时具有两个亲本品系特点。可接受两个亲本品系的细胞、组织、器官和肿瘤移植。适用于免疫学和发育生物学等领域的研究。 CBA/CaJ繁育特点和工作经验1.有的CBA/caJ母鼠无乳，小仔出生后必须代乳，否则容易被吃掉或夭折。分笼时将产仔多（6～8只）、存活率高的繁殖笼小仔留作种鼠传代用。3.CBA/caJ雌鼠母性好，对小仔守护仔细。因此，在取出小仔时需小心谨慎。 CBA/caJ鼠的繁殖年龄为6周以上。生育年龄为10-12个月。5.配繁殖笼初期，可加少许葵花籽以加强营养。但不宜过多饲喂，以免影响繁育。CBA/caJ鼠性情活泼，易乱串乱跳。分笼和换笼时一定要小心操作，防止逃逸。 踏踏实实做人，心胸要广大；稳稳当当做事，着眼宜深远。谢谢！ 猜一猜它是我的好朋友，每个同学全都有，笔墨书本帮我拿，可我还得背它走。书包 猜一猜小黑人儿细又长，穿着木头花衣裳，画画写字它全会，就是不会把歌唱。铅笔 猜一猜有方有圆又有长，生就一副好心肠，发现有人写错字，牺牲自己来帮忙。橡皮 猜一猜四四方方扁又长，外穿漂亮新衣裳，学习用品里面放，他是我的好伙伴。文具盒 我的学习伙伴——写一种学习用品 思考：1、你准备怎么把你最喜爱的文具介绍给大家？2、你要说它的哪些特征？ 分享：把你最喜爱的文具介绍给大家！ 总结：1、确定你喜爱的文具和它的来历。2、介绍外形（形状、大小、颜色、图案、材料）。3、文具有哪些作用。4、文具和你之间有没有发生的故事，可以和大家分享。5、表达对文具的喜爱之情。 题目：1、我的（）2、（）的文具盒（）的铅笔（）的橡皮（）的钢笔 开头：1、妈妈送了我一个新文具盒，这个文具盒是我和妈妈在网上选的，十分漂亮，我非常喜欢。2、我有一个小小的铅笔刨。一个小小的铅笔刨对其他人来说，是那么普通，而对我来说，是那么特别。3、有人喜欢五颜六色的文具盒，有人喜欢外观精美的橡皮，而我却喜欢默默无闻的铅笔。4、“像糖不是糖，有圆也有方，帮助改错字，它最不怕脏。”哈哈！你一定猜到这就是天天陪伴我们度过美好时光的小橡皮了吧。 外形：我的文具盒是长方体形状，盒面的图案是迪斯尼里的米奇、米妮和唐老鸭。米奇托着腮、跷着腿，唐老鸭歪着屁股，让人觉得很可笑。我的文具盒分两层，上面一层是放铅笔的。每一支铅笔都有一个固定的小套子，使铅笔们都有一个自己的家。下面一层是放尺子的。我的橡皮擦单独放在文具盒右侧的小盒子里，它就再也不会被铅笔弄脏了。 外形：我的书包是红色的，上面有四个可爱的哆啦A梦，一个是把眼睛瞪得滚圆滚圆，仿佛在说：“上课一定要专心哦！”一个小家伙则把眼睛眯起来，张大了嘴向着我笑，受其感染，我也总会和它相视而笑，周围的一切，也会美好起来。还有一个哆啦A梦眼里透着一股灵气，像是会给我带来无穷的力量，因此每当我考试遇到难题时，我会不由自主地看看它，它也像洞悉了一切，告诉我一定要冷静，要细心，层层剥茧难题自然会迎刃而解。最后一个是调皮蛋，它把舌头伸出来，似乎在向我讨东西吃。 外形：这枝漂亮的铅笔上面顶着一块粉红色的橡皮，它可不像其它的一些小橡皮，擦出来又黑又脏，而是帮我把书面调理得非常干净的小能手。仔细地看，这橡皮好像是一个小喇叭，我在做作业时，她时常给我鼓劲加油。每想到这儿，心里总会溢出丝丝甜蜜。我有了一块新橡皮，穿着粉红色的外衣，上面还有美丽的小熊图案，香香的，可漂亮了。 作用和故事：我的橡皮不但好看，而且用途也很大。平时我写作业一写错字时，它就会主动跳出来，跟敌人斗一斗，我们总是百战百胜。有一次，我在做数学作业，我做完了一道题，可觉得这道题不对，我又验算了一遍，发现错了，我就用橡皮擦了下去，我又算了一遍，一验算又错了，我把得数擦了下去，因为我当时太着急了，所以把纸给擦坏了，我生气极了，一气之下把橡皮往桌子上一扔，它调皮地在桌子上蹦了几下就掉到地上不知去向。第二天上学时正赶上考试，我答完卷子检查的时候，发现了一道错题，可我怎么也找不到橡皮了，我把书包翻了个底朝天，就是找不到我那块心爱的小橡皮了，急得我满头大汗。这时，下课铃响了，我只好把带着错题的卷子交了上去。放学了，我闷闷不乐地回到家里，坐在沙发上，看到了地上的橡皮，我把它捡了起来，掸掸上面的灰尘，对它说：“我以后再也不对你乱发脾气了。”于是，我小心翼翼地把它放进我的文具盒里。 作用和故事：打开文具盒首先看到了第一层，里面放着爱臭美铅笔和钢笔，在第二层里面躺着五大三粗的橡皮弟弟和我写错字时的好帮手——修正带，一声不吭的小刀姐姐和文静的尺子住在文具盒的第三层，它们相处得可好了！别看它们平时一声不响，到了需要它们的时候，它们就会毫不犹豫地挺身而出，直尺帮我把线条画直，橡皮，修正带帮我改错字…… 作用和故事：书包虽然不是很起眼，但我们也不能小看它。它的用处可大哩！不但能帮我装书，还可以当我的靠垫，当我的眼睛疲劳时，就可以坐在椅子上，靠着它，眯着眼睛，那种感觉舒服极了；当我上课开小差时，它就像一张严肃的脸，时刻提醒着我；当我放学时，它就像一张大嘴巴，把我的书“吞”了下去，使它们能够安安心心的回家。 结尾：1、朋友们，我的新文具盒，不但外形美丽，而且是我的“文具保管员”，并帮我打理好我的学习。你说我能不喜欢它吗？如果你也喜欢的话，就赶快去网购一个吧！2、我很喜欢我的小橡皮，因为它是我学习上的好帮手。3、我的铅笔真好啊！我一定要学习它无私奉献的精神！4、文具盒忠实地为我服务，是我学习上的好朋友。你说，我能不喜欢我的文具盒吗？'