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'绿色荧光蛋白(GFP) 前言2008年10月8日，诺贝尔化学奖揭晓。日本科学家下村修、美国科学家马丁•查尔非和钱永健因发现和改造绿色荧光蛋白（GFP）而获奖。GFP大家都不陌生，细胞中散发着点点绿光，煞是好看。1962年被发现，1992年被克隆，中间隔了30年。而在最近十几年它才在生物界中被广泛应用。C:UsersAdministratorDesktop分子细胞钱永健希望更多中国青年投身基础研究_标清.mp4 2008年诺贝尔化学奖获得者1928年出生于日本京都市，毕业于名古屋大学，是日本化学家、海洋生物学。1960年开始，在美国普林斯顿大学学者约翰逊的邀请下，前往美国，先后在普林斯顿大学、波士顿大学和麻省伍兹霍尔海洋生物实验所工作。下村修 2008年诺贝尔化学奖获得者查尔菲的实验室用秀丽隐杆线虫来研究神经细胞的发育和功能。这类线虫的发育、解剖、遗传和分子信息都很丰富，为研究提供了强有力和多元的支持。绿色荧光蛋白基因在秀丽线虫的表达。马丁·查尔菲（MartinChalfie） 2008年诺贝尔化学奖获得者他与TulleHazelrigg结了婚。她后来加入了哥大。她允许他引用她在"GreenFluorescentProteinasaMarkerforGeneExpression"上的未发表研究，条件是他在一个月的时间内煮咖啡、做饭、每晚倒垃圾。马丁·查尔菲（MartinChalfie） 2008年诺贝尔化学奖获得者2008年度诺贝尔化学奖获得者之一，我国著名的钱氏家族的一员，美国生物化学家。1994年起，钱永健开始研究GFP，改进GFP的发光强度，发光颜色（发明变种，多种不同颜色），发明更多应用方法，阐明发光原理。世界上应用的FP，多半是他发明的变种。他的专利有很多人用，有公司销售。钱永健 2008年诺贝尔化学奖获得者“我总是被色彩所吸引，”钱永健说，正是色彩，让他的工作更有趣，“当工作进展得不顺利时，因为色彩，我可以把工作继续进行下去。如果我天生是色盲，估计我不会取得今天的成就了。”钱永健经钱永健改造后的各色荧光蛋白。 目录绿色荧光蛋白简介GFP应用前景最新进展 绿色荧光蛋白（GFP）GFP由238个氨基酸组成，分子量为26.9kDa，最初是从维多利亚多管发光水母中分离出来的，在蓝光照射下会发出绿色荧光。来源于水母的野生型GFP在395nm和475nm分别有主要和次要的激发峰，它的发射峰在509nm，处于可见光谱的绿色区域（图1）。来源于海肾的GFP只在498nm有单个激发峰。 绿色荧光蛋白（GFP）GFP是典型的β桶形结构，包含β折叠和α螺旋，将荧光基团包含在其中（图2）。严密的桶形结构保护着荧光基团，防止它被周围环境淬灭。GFP表达后折叠环化，在氧存在下，内部面向桶形的侧链诱导Ser65–Tyr66–Gly67三肽环化，导致荧光基团形成。 绿色荧光蛋白（GFP）其蛋白性质极其稳定，易耐受高温处理，甲醛固定和石蜡包埋不影响其荧光性质，并且无光漂白现象。如用酸、碱或盐酸胍处理，一旦恢复中性环境．或去除变性剂，荧光就可恢复并具有和原来一致的发射光谱。 绿色荧光蛋白（GFP）绿色荧光蛋白的优势：1．不需加任何底物．荧光性质稳定。2.相对分子质量小，对细胞无毒性。3.作为荧光靶使用方便,可直接用于活体测定 绿色荧光蛋白的应用前景骨架和细胞分裂动力学和泡囊运输发育生物学生物技术中的应用研究肿瘤发病机制的应用在信号转导中的应用光伏发电神经生物学 绿色荧光蛋白的应用前景将绿黄红荧光蛋白质植入鱼的DNA分子结构中 绿色荧光蛋白的应用前景1．分子标记将GFP作为蛋白质标签（proteintagging），利用DNA重组技术，将目的基因与GFP基因构成融合基因，转染合适的细胞进行表达，然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋白质进行细胞内活体观察。利用GFP的这一特性已经加深了我们对细胞内一些过程的了解，如细胞分裂、染色体复制和分裂，发育和信号转导等。除用于特定蛋白的标记定位外，GFP亦大量用于各种细胞器的标记如细胞骨架、质膜、细胞核等等。GFP标记的微管 绿色荧光蛋白的应用前景2.药物筛选荧光探针的概念：利用信号传导中信号分子的迁移功能，将一荧光蛋白与信号分子相偶联，根据荧光蛋白的分布情况即可推断信号分子的迁移状况，并推断该分子在迁移中的功能。由于GFP分子量小，在活细胞内可溶且对细胞毒性较小，因而常用作荧光探针。筛选原理：受体常常被用作药物筛选的目标，若某一药物具有与信号分子类似的功能，那么该药物即具有潜在的医药价值。利用GFP荧光探针，将很容易从数量众多的化合物中判断出哪些化合物具有与信号分子相似的能引起配体一受体复合物迁移并介导生理反应的功能，且这一筛选过程简单方便，所需成本也很低。由于GFP在细胞内的穿透性强及独特的发光机制，因而在药物筛选中具有相当大的应用潜力。 绿色荧光蛋白的应用前景3.对于肿瘤的机制阐明及治疗的应用绿色荧光蛋白有助于人们肿瘤的深入了解：以肿瘤细胞浸润性举例，浸润性指肿瘤细胞粘连、酶降解、移动和基质内增殖等一系列表现，其根本原因在于肿瘤细胞内某些基因表达异常。利用GFP的示踪特性，将目的基因标记为绿色，即可定量分析目的基因的表达水平，研究肿瘤细胞内某些基因异常表达与肿瘤细胞浸润的关系，即可揭示肿瘤细胞浸润的某些机制。C:UsersAdministratorDesktop分子细胞机制.mp4C:UsersAdministratorDesktop分子细胞TED.mp4 绿色荧光蛋白的应用前景肿瘤切除手术的现状：凭借医生经验，难以根除，容易残留，容易转移。为了能够准确的标记肿瘤，科学家们利用荧光蛋白发明了这样的一种标记分子： 绿色荧光蛋白的应用前景说明：肿瘤细胞表面比正常细胞表面具有更多的阴电荷，造成细胞表面电荷不平衡，使细胞之间粘附力下降，组织遭破坏。但是，除了肿瘤细胞表面带阴电荷外，正常血液里的细胞尤其是红血球也带有较多的表面阴电荷。 绿色荧光蛋白的应用前景其他应用包括：1、在转基因动物研究中的应用2、在融台蛋白中的应用3、在临床检验中的应用4、在基因治疗中的应用5、在其他方面的应用通过随机重组和基因定向突变得到了多种对环境敏感的GFP，它们可用作环境指示剂。 最新进展C:UsersAdministratorDesktop分子细胞美、德三名科学家分享2014年诺贝尔化学奖[看东方]_超清.mp4 谢谢观看谢谢观看 考前具体的一些措施（一）好作文，学生应知道好在哪里，有范文可学；差作文，学生应知道差在何处，以作前车之鉴；同一档次分数有差异的作文，能找出其好的及不足的地方，知道如何扬长避短。 考前具体的一些措施（一）另外应知道作文的评分标准，清楚什么样的文章能评一类文，什么样的文章是二类文、三类文，有助于学会审视自己的作文找出差距。 考前具体的一些措施（二）练开头。用南师大何永康教授的话说：“考场作文不象平时作文那样，必须有很强的视觉冲击力，让阅卷老师在一瞬间被它吸引，被它打动，太含蓄，犹抱琵琶半遮面，那是考场作文的大忌。” 考前具体的一些措施学生在作文的一开头，就要把自己的看家本领拿出来，千万不要故作高深，端着架子写文章。“要一亮相，就获满堂彩，不要搞图穷匕首见。”所以建议学生找一些题目专门练练如何开头。 考前具体的一些措施（三）学技巧。语文的功夫是平时练就的，不可能一蹴而就。但在最后阶段可以学一些写作技巧，如：倒叙、烘托、象征、托物言志、拟小标题等。 考前具体的一些措施（四）打腹稿、列提纲。在打腹稿时，应一直问问自己，如写议论文，就问：文章的中心论点在何处？分几个论述层次？论据的典型性何以体现？结合现实提出并解决了哪些新问题？引起人们哪些反思？哪里是深刻的辨证说理？有几组警策句？等等。 考前具体的一些措施（四）打腹稿、列提纲。若写记叙文，就问：故事的开端能否吸引人？有没有一波三折的情节？有没有意料之外情理之中的结局？故事隐含着哪些人生哲理？人物有没有鲜明的个性？有几个多重作用的环境描写？有几处细节描写？几种表达方式如何有机结合？有没有寓情于人于事于景？哪句堪称神来之笔？ 考前具体的一些措施（四）打腹稿、列提纲。想好了就把它落实到提纲上去，提纲中应包含以下几个方面：（1）题目（2）文体（3）中心思想或中心论点（4）主要写作素材或论据（6）结构安排，包括几节，每个小节的主要内容等等。越详细越好。 考前具体的一些措施（五）找材料。有同学平时缺少积累，写作时苦于无料可写，可尝试从课本上找材料，特别是议论文中的事实论据及引用论证。 考前具体的一些措施（六）查漏补缺，指的是在重点抓话题作文的同时，查查看各类作文题有没有都涉及到，避免意外。在文体上应重点训练记叙文、议论文。 （七）特别提醒1、要扣住题目写文章。写议论文不扣题：有的学生自始至终不提话题，议论了一个与话题无关的题目。建议：题目里有话题，开头部分见话题，中间部分扣话题，结尾不忘点话题。 （七）特别提醒1、要扣住题目写文章。有的学生写记叙文，选材不当，文不对题。有的学生写的素材是切题的，但是在叙事的行文中，只字不提所写的题目，直到最后才点题，这样的作文，在中考中写得再好，也只能算基本切题，拿不到高分。建议：题目里有话题，开头部分见话题，中间部分扣话题，结尾不忘点话题。 （七）特别提醒2、写作文一定要做到：感情真挚，内容充实，条理清楚，语言通顺，书写规范，标点正确。特别是一定要有真情实感。其中卷面的书写是否整齐；文章的层次是否清楚；文章的标点是否正确应运用，关系到给老师的第一印象如何，不可忽视。 （七）特别提醒3、不论写那一种文体的文章，都应当写“规范作文”，不能写得非驴非马，记叙文不象记叙文，议论文不象议论文。写记叙文以记叙描写为主；写议论文以议论为主，举例为议论服务，要有分析。 （七）特别提醒4、千万不要抄别人的文章，更不能用别人的“样文”。凡是抄别人文章的，一经核实，作文的分数都很低。我们反对考生抄袭套用别人的文章，但并不等于考生不能根据需要，灵活移用一些自己过去积累的作文素材。许许多多考场优秀作文的成功者也现身说法地证明了这一点。'