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  • 2022-04-29 14:32:38 发布

最新框架剪力墙设计剖析课件PPT.ppt

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'进入夏天,少不了一个热字当头,电扇空调陆续登场,每逢此时,总会想起那一把蒲扇。蒲扇,是记忆中的农村,夏季经常用的一件物品。  记忆中的故乡,每逢进入夏天,集市上最常见的便是蒲扇、凉席,不论男女老少,个个手持一把,忽闪忽闪个不停,嘴里叨叨着“怎么这么热”,于是三五成群,聚在大树下,或站着,或随即坐在石头上,手持那把扇子,边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳,热得满头大汗,不时听到“强子,别跑了,快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套,跑个没完,直到累气喘吁吁,这才一跑一踮地围过了,这时母亲总是,好似生气的样子,边扇边训,“你看热的,跑什么?”此时这把蒲扇,是那么凉快,那么的温馨幸福,有母亲的味道!  蒲扇是中国传统工艺品,在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树,制作简单,方便携带,且蒲扇的表面光滑,因而,古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名,实即今日的蒲扇,江浙称之为芭蕉扇。六七十年代,人们最常用的就是这种,似圆非圆,轻巧又便宜的蒲扇。  蒲扇流传至今,我的记忆中,它跨越了半个世纪,也走过了我们的半个人生的轨迹,携带着特有的念想,一年年,一天天,流向长长的时间隧道,袅框架剪力墙设计剖析 框架剪力墙设计设计说明基本计算参数水平地震作用水平位移验算水平地震下的内力计算连梁刚结时构件内力123456 设计说明某10层房屋的结构平面及剖面示意图如图7.5.2所示,各层纵向剪力墙上的门洞尺寸均为1.5m×2.4m,门洞居中。抗震设防烈度8度。场地类别Ⅱ类,设计地震分组为第一组。各层横梁截面尺寸:边跨梁300mm×600mm,走道梁300mm×450mm。柱截面尺寸:1、2层为550mm×550mm,3、4层为500mm×500mm,5~10层为450mm×450mm。各层剪力墙厚度:1、2层为350mm,3~10层为200mm。梁、柱、剪力墙及楼板均为现浇钢筋混凝土。混凝土强度等级:1~6层为C30,7~10层为C20。经计算,集中于各层楼面处的重力荷载代表值为G1=9285kN,G2=8785kN,G3=G4=……=G9=8570kN,G10=7140kN,G11=522kN。试按协同工作分析方法计算横向水平地震作用下结构的内力及位移。 表3中框架柱侧向刚度层次层高边柱中柱∑D=10*(Dil+Di2)KαcDi1KαcDi28~1036001.8960.487109083.8960.66114810257178736002.0640.508113814.2400.679152292661035~636001.8960.487128333.8960.661174243025623~436001.2440.384154122.5560.56122547379598245001.0620.347104502.1830.52215720261701155001.2980.54589962.6680.67911197201935表3边框架柱侧向刚度层次层高边柱中柱∑D=4*(Dil+Di2)KαcDi1KαcDi28~1036001.4220.41693142.9220.59413305.60990478.929736001.5480.43697773.1800.61413758.89494145.2875~636001.4220.416109582.9220.59415653.658106445.7993~436000.9330.318127851.9170.48919669.510129818.123245000.7970.28585821.6370.45013558.93288562.304155000.9740.49681772.0010.62510313.51773962.253 (二)横向剪力墙截面等效刚度以底层墙为例第一层墙厚350mm,端柱截面为550mm×550mm,墙截面及尺寸如图所示。有效翼缘宽度应取翼缘厚度的6倍、墙间距的一半和总高度的1/20中的最小值,且不大于至洞口边缘的距离。经计算,bf=1940mm.Aw=5502×2+(6000-500)×350+(1940-550/2)×350=3095250mm2Iw=5504×2/12+(24352+35652)×5502+350/12×54503+350×5450×(3000-2435)2+1665×3502/12+350×1665×24352=14.44497×1012mm4由bf/t=(1940+350/2)/350=6hW/t=6550/350=19查表得μ=1.423。将表中各层的Aw,Iw,Ec,μ沿高度加权取平均值得 总剪力墙等效刚度EcIeq=2.68597×1017×4=10.74388×1017N·mm2 表5各层剪力墙刚度参数(一片墙)层数tbhbfybfμAwIw*1012EcIw*10^177~102004504501200265812001.32717100008.0565820.5445~62004504501200265812001.32717100008.0565824.1703~42005005001200268212001.32717900008.8124626.4371~23505505501200243519401.423309525014.4449743.335 (三)连梁的等效刚度为了简化计算,计算连梁刚度时不考虑剪力墙翼缘的影响,取墙形心轴为1/2墙截面高度处,如图4所示。另外,由于梁截面高度较小,梁净跨长与截面高度之比大于4,故可不考虑剪切变形的影响。下面以第一层连梁为例,说明连梁刚度计算方法。连梁的计算简图 连梁的转动刚度计算,其中刚域长度为al=(6000+550)/2-450/4=3163mml=3000+2400=5400mma=3163/5400=0.586另由表1得EcIb=3.0×104×4.556×109=1.33680×1014N·mm2将上述数据代入式得: 表6连梁剪切刚度Cbi层次层高/mm2b/mmh/mml/mmαEcIb/*10^14N*mm2S12*10^12S21*10^8C12*10^8Cbi/*10^9N7~10360045045054000.5761.161842.677110.719407.436422.974575~636004504500.5761.366883.149540.846358.748733.499493~436005005000.5813.264670.865169.068523.62741245005505500.5863.385210.884607.522683.00907155005505500.5863.385210.884606.154922.46197将表6中各层的按高度加权取平均值 (四)结构刚度特征值为了考察连梁的约束作用对结构内力和侧移的影响,下面分别按连梁刚结和铰结两种情况计算。考虑连梁约束作用时,λ按式(7.4.9)计算,连梁刚度折减系数取0.55,则得不考虑连梁约束作用时,λ按式(7.3.3)计算,即 水平地震作用(一)结构自振周期计算该结构的质量和刚度沿高度分布比较均匀,基本自振周期T1(s)可按下式计算式中,为计算结构基本自振周期用的结构顶点假想位移(m);ψ为结构基本自振周期考虑非承重砖墙影响的折减系数,本例可取ψ=0.8。 对带屋面局部突出间的房屋,上式中的应取主体结构顶点位移。突出间对主体结构顶点位移的影响,可按顶点位移相等的原则,将其重力荷载折算到主体结构的顶层,如图所示。对本例,其折算重力荷载可按下式计算Ut计算简图均布荷载q为结构顶点位移ut为均布荷载作用下结构的顶点位移 集中荷载作用下结构的顶点位移表7结构自振周期计算类别EcIeq/(N*mm2)λuq/muGe/muT/mT1/s连梁刚结10.74392*10^172.1170.2180.0040.2220.641连梁铰接1.4400.3240.0060.3300.782 (二)水平地震作用计算该房屋主体结构高度不超过40m,且质量和刚度沿高度分布比较均匀,故可用底部剪力法计算水平地震作用。结构等效总重力荷载代表值Geq结构总水平地震作用标准值FEK顶部附加水平地震作用标准值ΔFn质点的水平地震作用标准值Fi 水平地震作用计算层次Hi/mGi/kNGiHi/(kN·m)GiHi/∑GjHj连梁刚结连梁铰结FEK△FnFi/KnFiHi/(kN·m)FEK△FnFi/KnFiHi/(kN·m)1142.452222132.80.011646753.248819.57469.052927.875654.628749.58557.082420.311038.871402770320.145676753.248819.574864.3365335.515654.628749.585714.4956806.30819.57749.59935.285703016640.158626753.248819.574941.1833129.605654.628749.585778.0227386.43831.685702708120.142396753.248819.574844.9226699.625654.628749.585698.4522071.11728.085702399600.126176753.248819.574748.6720962.695654.628749.585618.8817328.71624.485702091080.109956753.248819.574652.4115918.815654.628749.585539.3113159.21520.885701782560.093736753.248819.574556.1511567.985654.628749.585459.749562.62417.285701474040.077516753.248819.574459.907910.215654.628749.585380.176538.93313.685701165520.061286753.248819.574363.644945.485654.628749.585300.604088.16210.08785878500.046196753.248819.574274.092740.895654.628749.585226.572265.7415.5928551067.50.026856753.248819.574159.33876.315654.628749.585131.71724.40∑85722.01901838.36753.25193014.985654.63162351.92 按上述方法所得的水平地震作用为作用在各层楼面处的水平集中力。当采用连续化方法计算框架-剪力墙结构的内力和侧移时,应将实际的地震作用分布转化为均布水平力或倒三角形分布的连续水平力或顶点集中力。根据实际地震作用基本为倒三角形分布的特点,下面按基底剪力和基底倾覆力矩分别相等的条件,将实际地震作用分布[图7.5.6(a)]转换为倒三角形连续地震作用[图7.5.6(b)]和顶点集中水平地震作用[图7.5.6(c)],即水平地震作用的转换式中由上式可得可得连梁刚结 连梁铰结 水平位移验算倒三角形水平荷载和顶点集中水平荷载作用下的位移分别按式(7.3.13)和式(7.3.19)计算,水平位移计算层次Hi/mmhi/mmECIeq/(N·㎜2)ξ连梁刚结连梁铰结qλPuq/㎜up/㎜ui/㎜△u/hqPλuq/㎜up/㎜ui/㎜△u/h1038800.036001.07439E+181.0002750392.116141734219.869.3129.171/110022736212437281.4424.5012.3736.881/805935200.036001.07439E+180.9072750392.116141734217.818.0925.901/108722736212437281.4421.7010.7132.411/804831600.036001.07439E+180.8142750392.116141734215.696.8922.591/107222736212437281.4418.869.0727.931/807728000.036001.07439E+180.7222750392.116141734213.515.7219.231/106522736212437281.4416.007.4823.471/820624400.036001.07439E+180.6292750392.116141734211.254.6015.851/107722736212437281.4413.125.9619.091/849520800.036001.07439E+180.5362750392.11614173428.973.5412.511/111822736212437281.4410.304.5514.851/903417200.036001.07439E+180.4432750392.11614173426.722.579.291/120622736212437281.447.603.2610.861/999313600.036001.07439E+180.3512750392.11614173424.601.716.311/138122736212437281.445.122.147.261/1173210000.045001.07439E+180.2582750392.11614173422.720.983.701/182722736212437281.442.981.224.191/159615500.055001.07439E+180.1422750392.11614173420.920.321.241/443222736212437281.440.990.391.381/3995由上表可见,无论连梁刚结还是铰结,各层层间位移角均小于1/800,满足弹性层间位移角限值的要求。此外当考虑连梁的约束作用时,结构侧移减小(11%~27%)。 水平地震作用下的内力计算(一)连梁铰结时内力倒三角形分布荷载及顶点集中荷载作用下的内力分别按式(7.3.15)(7.3.17)和(7.3.21)(7.3.23)总框架及总剪力墙内力(连梁铰结)层次Hi/mξλqP倒三角形荷载顶点集中力总内力MW/(kN﹒m)VW/kNVf/kNMW/(kN﹒m)VW/kNVf/kNMwi/(kN﹒m)Vwi/KnVwi/(kN﹒m)1038.81.0001.44227.361243.780.00-1150.411150.410.00558.05685.730.00-592.361836.15935.20.9071.44227.361243.78-2723.92-377.781158.312014.95563.04680.75-708.97185.251839.06831.60.8141.44227.361243.78-2819.35312.041173.084065.93578.09665.691246.58890.131838.787280.7221.44227.361243.78-561.79931.381182.396189.59603.48640.305627.801534.851822.69624.40.6291.44227.361243.783815.311491.311175.158423.91639.66604.1312239.222130.971779.28520.80.5361.44227.361243.7810116.402001.851141.3710808.83687.27556.5120925.242689.121697.88417.20.4431.44227.361243.7818180.332472.121071.9113386.99747.17496.6131567.323219.291568.53313.60.3511.44227.361243.7827877.462910.53958.3716204.48820.43423.3544081.943730.961381.732100.2581.44227.361243.7839107.343324.92792.9119311.66908.35335.4358419.014233.271128.3415.50.1421.44227.361243.7855191.363820.38501.8223688.241041.31202.4778879.604861.68704.29000.0001.44227.361243.7877829.794410.820.0029950.511243.780.00107780.305654.600.00 (二)连梁刚结内力计算层次Hi/mξλqP倒三角形荷载顶点集中荷载MW/(kN﹒m)V"W/kNV"f/kNm/KnVW/kNVf/kNMW/(kN﹒m)V"W/kNV"f/kNm/KnVW/kNVf/kN1038.81.0002.116275.0391417.3420.00-1814.061814.06974.50-839.56839.560.00336.731080.62580.50917.22500.12935.20.9072.116275.0391417.342-4839.89-898.701842.91990.0091.29852.911220.01343.241074.11577.00920.24497.10831.60.8142.116275.0391417.342-6622.76-110.261906.801024.32914.06882.482487.20363.021054.32566.37929.39487.957280.7222.116275.0391417.342-5749.34581.751975.261061.091642.85914.173850.57396.841020.50548.21945.05472.30624.40.6292.116275.0391417.342-2517.641204.102021.521085.942290.04935.575362.84446.01971.34521.79967.80449.54520.80.5362.116275.0391417.3422865.511780.842021.501085.942866.78935.577082.49512.42904.92486.12998.54418.81417.20.4432.116275.0391417.34210276.472334.281952.931049.103383.38903.839076.01598.65818.69439.801038.44378.90313.60.3512.116275.0391417.34219670.052885.821794.38963.923849.75830.4511420.49708.03709.32381.041089.06328.282100.2582.116275.0391417.34231077.693456.801524.53818.974275.76705.5614206.60844.78572.56307.581152.36264.9915.50.1422.116275.0391417.34248343.814231.61996.93535.544767.15461.3918476.361062.40354.94190.671253.07164.27000.0002.116275.0391417.34274555.965335.760.000.005335.760.0025244.981417.340.000.001417.340.00 总框架,总剪力墙及总连梁内力(连梁刚结)层次Hi/mMW/(kN﹒m)V"W/kNm/KnVW/kNVf/kN1038.80-1477.331555.0077.661339.68935.2-3619.88-555.471567.001011.531350.02831.6-4135.55252.761590.691843.451370.43728-1898.76978.591609.302587.891386.46624.42845.201650.101607.743257.841385.11520.89947.992293.261572.053865.311354.37417.219352.482932.931488.894421.821282.73313.631090.543593.851344.964938.811158.7321045284.294301.581126.545428.12970.5515.566820.165294.01726.226020.23625.660099800.946753.100.006753.100.00两种荷载共同作用下 连梁刚结和铰结时总剪力墙、总框架及总连梁内力沿高度的分布见图7。由此图及上述计算结果可见,对本例而言,考虑连梁的约束作用时,总水平地震作用增大16.3%;在结构上部,剪力墙弯矩增大,下部弯矩减小,最大弯矩减小7.5%;剪力墙承担的剪力增大,框架承担的剪力减小。总剪力墙、总框架及总连梁内力分布图 连梁刚结时构件内力计算(一)框架梁,柱的内力计算考虑连梁约束作用时,框架-剪力墙结构底部总剪力为由表可见,第1~4,9,10层的总框架剪力Vf小于0.2V0,应予以调整。另外,1.5Vmax,f=1.5×1349.77=2024.66kN>0.2V0,所以调整后的Vf取1350.05kN。框架柱的剪力和弯矩用值法计算,表13为⑤轴框架柱剪力和弯矩的计算结果,其余框架计算从略。表中反弯点高度比按式(5.4.9)确定,其中标准反弯点高度比yn由附表5.2.2查取。梁端弯矩、剪力及柱轴力计算结果见表14,柱轴力按调整前的梁端剪力计算。 表13水平地震作用下框架柱弯矩及剪力计算层次hi/mVfi/kNΣD/(*10^5kN/m)边柱中柱Di1/(*10^5)Di1/ΣDy调整前调整后Di2/(*10^5)Di2/ΣDy调整前调整后Vi1MucMlcVi1MucMlcVi2MucMlcVi2MucMlc103.61338.81347657109080.0310.3942.0192.2558.9842.3693.0259.47148100.0430.4557.03112.9292.3957.51113.8793.1793.61349.16347657109080.0310.4442.3385.3467.0542.3685.4067.10148100.0430.4957.47105.52101.3857.51105.59101.4583.61369.63347657109080.0310.4542.9785.0969.6242.9785.0969.62148100.0430.5058.35105.02105.0258.35105.02105.0273.61385.74360249113810.0320.5043.7878.8078.8043.7878.8078.80152290.0420.5058.58105.44105.4458.58105.44105.4463.61384.49409008128330.0310.4943.4479.7676.6343.4479.7676.63174240.0430.4958.98108.29104.0458.98108.29104.0453.61353.85409008128330.0310.5042.4876.4676.4642.4876.4676.46174240.0430.5057.67103.81103.8157.67103.81103.8143.61282.32509416154120.0300.5038.8069.8369.8340.8473.5273.52225470.0440.5056.76102.16102.1659.75107.56107.5633.61158.43509416154120.0300.5035.0563.0963.0940.8473.5273.52225470.0440.5051.2792.2992.2959.75107.56107.5624.5970.35350263104500.0300.5028.9565.1465.1440.2890.6390.63157200.0450.5043.5597.9997.9960.59136.33136.3315.5625.5727589789960.0330.6420.4040.3971.8044.0287.16154.95111970.0410.5725.3960.0479.5954.79129.58171.77 水平地震作用下梁端弯矩,剪力及柱轴力计算层次AB跨梁端弯矩,剪力BC跨梁端弯矩,剪力柱轴力l调整前调整后l调整前调整后A柱B柱10692.3055.0024.5593.0555.4424.752.458.0058.0048.3458.4858.4848.73-24.55-23.7996144.4096.3940.13144.9296.7840.282.4101.66101.6684.71102.07102.0785.06-64.68-68.3786152.22100.5242.12151.0299.8041.802.4106.01106.0188.35105.26105.2687.71-106.80-114.5976148.50102.4941.83145.45100.4240.982.4108.09108.0990.08105.91105.9188.26-148.63-162.8466158.63104.0743.78154.61101.4342.672.4109.76109.7691.47106.98106.9889.15-192.42-210.5256153.15101.2042.39151.0399.8041.802.4106.74106.7488.95105.26105.2687.72-234.81-257.0846146.35100.2841.10149.83102.7742.102.4105.77105.7788.14108.39108.3990.33-275.92-304.1136132.9694.6737.94147.11104.7441.972.499.8499.8483.20110.47110.4792.06-313.85-349.3826128.2592.6336.81164.22118.7547.162.497.6997.6981.41125.24125.24104.37-350.67-393.9816105.5476.9330.41177.86129.4751.222.481.1381.1367.61136.55136.55113.79-381.08-431.18 (二)连墙内力计算本题的4根连梁受力情况相同,只需要计算出1根连梁的内力即可。下面以第10层连梁内力计算为例,说明连梁内力计算过程,其它各层的计算结果见表。由式表一,并根据表7和表13中的有关数据由式(7.5.2)得连梁刚域端的弯矩:由式(7.5.5)得连梁端剪力: 连梁内力及剪力墙轴力计算层次hi/mmi/kNmihi/(kN·m)Sij/∑Sij1-a/1+aM12/(kN·m)M21/(kN·m)Mc12/(kN·m)Vb/KnNwi/Kn103.61555.005597.9910.250.2691399.498376.077376.077493.215493.21593.61567.005641.1910.250.2691410.298378.979378.979497.021990.23683.61590.695726.5020.250.2691431.625384.710384.710504.5381494.77473.61609.305793.4820.250.2691448.370389.210389.210510.4392005.21363.61607.745787.8520.250.2691446.963388.831388.831509.9432515.15653.61572.055659.3950.250.2691414.849380.202380.202498.6253013.78143.61488.895360.0140.250.2691340.003360.089360.089472.2483486.02933.61344.964841.8720.250.2691210.468325.280325.280426.5973912.62524.51126.545069.4320.250.2691267.358340.568340.568357.3174269.94215.5726.223994.1840.250.269998.546268.332268.332230.3414500.284 (三)连梁剪力计算本题的4片墙受力情况相同,可用式(7.5.6)计算每片墙的弯矩,每片墙的剪力用式(7.5.7)计算,表中剪力墙轴力用(7.5.8)计算,计算结果见下表。一片剪力墙弯矩及剪力计算层次Hi/mMwi/(kN·m)V"wi/kNMwil/(Kn/·m)mil/kNVwil/Kn1038.80.00-1477.330.250.00388.7519.42935.2-3619.88-555.470.25-904.97391.75252.88831.6-4135.55252.760.25-1033.89397.67460.86728-1898.76978.590.25-474.69402.33646.97624.42845.201650.100.25711.30401.93814.46520.89947.992293.260.252487.00393.01966.33417.219352.482932.930.254838.12372.221105.46313.631090.543593.850.257772.64336.241234.7021045284.294301.580.2511321.07281.641357.0315.566820.165294.010.2516705.04181.551505.060099800.946753.100.2524950.240.001688.27 谢谢大家! 胚胎嵌合技术 内容摘要研究概况嵌合体的制作应用前景嵌合体研究存在的问题 一、研究概况嵌合体(chimera)一词源自希腊文,古希腊神话中用它代表狮头、羊身、蛇尾这样一些不同种类动物所拼凑出的怪物。嵌合在生物学上是指同一个体中,基因型相异的细胞或组织混合存在的状态。 一、研究概况嵌合体动物:现代的胚胎工程技术中,也有一种叫胚胎嵌合的技术。它是将2个胚胎细胞(同种或异种动物胚胎)合并,共同发育成1个胚胎,即“嵌合胚胎”,然后将这个胚胎移植给受体,让其妊娠产仔。如果产下来的幼仔具有以上2种动物胚胎的细胞,则称其为“嵌合体动物”。例如,用同一种类的黑鼠和白鼠胚胎嵌合,可生下黑白相间的花小鼠;不同种类的绵羊和山羊胚胎细胞嵌合,可生下绵山羊,它既有绵羊的特征,又有山羊的特征。 一、研究概况美国科学家将人类的干细胞加入到了许多动物的胚胎中,制造长着人的器官的嵌合体动物,例如猪体内流着人的血液的“人猪”,羊体内的肝脏80%的成分属于人类的肝脏的“人羊”,老鼠头颅里加入人的脑细胞的“人鼠”等。“当人的器官在动物的体内生长,拥有人类细胞的猪或老鼠,是不是会像人类一样思考,却和动物一样行事?”“它们所带给人类社会的恐惧,早已超越了人类认知的界限和人类对科学成果的接纳空间”。 一、研究概况“嵌合体”是在生物界非常普遍的自然现象。孪生子在同一个子宫中发育时会发生细胞交流,大多数孪生子体内都携带着某些来自其同胞的细胞,他们都是嵌合体。在胎儿发育过程中,母体和胎儿也会发生细胞交流(从孕妇血液中可检测到胎儿的细胞),多数母亲体内终生携带着她们生下的子女的某些细胞,许多人体内也携带着他们的母亲的某些细胞,这些母亲、子女也都是嵌合体。那些接受器官移植的人,更全都是嵌合体。 一、研究概况不同的物种也可以形成嵌合体。例如把两个来自异种动物的胚胎嵌合成一个胚胎,就可以培育出异种嵌合体动物,像绵羊-山羊嵌合体、马-斑马嵌合体等都已培育成功。许多心脏病患者移植了猪或牛的瓣膜,也是异种嵌合体。重组DNA技术、转基因技术事实上也都是在制造分子层次上的嵌合体。 二、嵌合体的制作1、囊胚显微注射法:用显微操作技术将供胚的全部内细胞团注入除去部分内细胞团的受胚囊胚腔中,或将供胚的部分内细胞团注入受胚的囊胚腔中,也可以向受胚囊胚腔中(或卵周间隙)注入16细胞至桑甚胚的卵裂球、胚胎干细胞或已分化的细胞,使其发育为嵌合胚胎的方法即为囊胚注入法。 二、嵌合体的制作2、聚合法:是指将去除透明带的两枚8细胞至桑葚期胚胎,或来自两个不同胚胎的卵裂球,或卵裂球与胚胎聚合在一起的方法。采用酶消化法去除透明带:0.2-0.5%链霉蛋白酶在25-27℃下处理3min,移入含BSA(牛血清白蛋白)的培养液中终止酶的消化作用,用培养液洗净卵子(三次)。 二、嵌合体的制作裸胚聚合:移入胚胎联结液小滴(植物凝集素A,PHA,起粘合作用)中,培养10-20min,将融合胚轻轻移入20%PBS中洗涤两次,继续培养5h-10h后,移植入同期发情的受体输卵管或子宫角中。卵裂球聚合:取相同数量的两个不同种属的卵裂球装入空的透明带内,加入PHA使其聚合,用琼脂包埋后体外直接培养或移入兔输卵管中使其发育至囊胚,最后再移入受体子宫角内。 二、嵌合体的制作卵裂球与胚胎聚合:将解离好的卵裂球慢慢释放于另一个裸胚的正上方,使二者直接接触,借助于PHA的作用使之聚合。 二、嵌合体的制作两种方法的比较:聚合法:聚合法适用于同种、发育阶段处于同步或者差距不大的胚胎。通常情况下,8-细胞期的聚合率最高。囊胚注射法:囊胚注射法难度较大,但适用面更广,可用于种内和种间嵌合,供体和受体发育阶段可同步也可不同步。对于不能去除透明带的动物,如兔等(着床前需要透明带),只有用囊胚法制作嵌合体。 三、应用前景1.在发育及细胞生物学方面的运用(1)研究胚胎分化规律胚胎嵌合技术是研究分析哺乳动物发生机制的重要手段之一。将基因型不同的胚胎细胞嵌合在一起,根据其在嵌合体组织或器官中的分布及存活率情况,研究胚胎早期分化的规律。同时,通过嵌合胚胎内细胞团以外的细胞,可以研究各类胚细胞核的全能性及其正常分化能力。 三、应用前景(2)研究性分化机理利用嵌合体可以研究性别分化以及参与性分化的细胞及其规律。(3)孤雌生殖利用嵌合体技术,己获得了孤雌生殖小鼠。铃木达行等(1998)通过聚合从日本红牛获取的卵母细胞的孤雌生殖二倍体胚胎和用荷斯坦母牛卵母细胞进行IVF的胚胎,获得2死1活3头嵌合体犊牛。 三、应用前景2.在免疫学与医学方面的运用艾滋病病毒不能感染小鼠,无法用小鼠作为研究艾滋病的模型动物。但是如果我们设法让小鼠长有人的免疫系统,艾滋病病毒就可以感染这种嵌合体小鼠,它们目前已被用于试验治疗艾滋病的药物。(1)用于免疫功能的分析通过分析嵌合体中白细胞的免疫应答,可揭示正常的免疫防御机理。(2)建立遗传病动物模型人类大多数遗传疾病,都可以利用嵌合体技术建立特定的动物模型。 三、应用前景3.在动物生产中的应用(2)种间移植用于分析胎儿与母体的相互关系,如将斑马的受精卵,移植到马体内生产斑马(拯救珍稀濒危动物)。(1)人工制造有特殊经济价值的个体对水貂、狐狸、绒鼠等毛皮动物,利用胚胎嵌合体技术可以获得用交配或杂交法不能获得的毛皮花色类型。 三、应用前景(4)生产移植器官人兔胚胎嵌合体:将来发育成某种特定器官,如能克服免疫排斥反应,有望用于器官移植。(3)可作为外源基因的导入方法把外源目的基因先导入干细胞,再通过胚胎干细胞介导法将目的基因转入胚胎,这是转基因动物生产中基因导入的一种重要手段。 四、嵌合体研究存在的问题1、嵌合体组织器宫的特异抗原性在种内动物嵌合体制备过程中发现,不管是两种胚胎,还是多种胚胎制成的嵌合胚胎,细胞间均能协调的生长发育,不发生免疫排斥现象。但是,无论是进行供体-供体、供体-受体动物间,还是进行嵌合体-供体、嵌合体-受体动物间的组织或器官移植,均会发生强烈的免疫排斥反应。 四、嵌合体研究存在的问题因此,嵌合组织并没有因为成为嵌合体的一部分而改变免疫特性,而是在发育过程中,各自细胞的免疫抗原性表达可能被“掩盖”,因而嵌合体中不同基因型组织之间或细胞之间并不发生排斥现象。而一旦离开嵌合体,其特异抗原性又表现出来。这为将来利用嵌合体生产人用器官造成了很大障碍 四、嵌合体研究存在的问题2、种间嵌合体胚胎细胞分化、发育的局限性不同种间的胚胎聚合形成嵌合体胚胎后,一种胚胎细胞(供体)在另一种胚胎内的存活、分化和增殖会受到极大的限制。 四、嵌合体研究存在的问题如大鼠和小鼠胚胎嵌合构成的嵌合囊胚的组织学分析发现,大鼠来源的细胞和小鼠来源的细胞,虽然都能参与滋养层和ICM的形成,但有倾向性。大鼠来源的细胞更多地构成滋养层细胞,而小鼠来源的细胞更多地分化为ICM。而且,异种胚胎的细胞群并不混合,在任何场合都形成一定的群体。这一事实表明,卵裂球在嵌合胚中的移动是相当受限的。 四、嵌合体研究存在的问题另外,绵羊和山羊嵌合体的产生,是嵌合体研究的重大突破。但绵、山羊的嵌合体大多于出生前死亡,反映了种间嵌合体细胞种细胞分化的限制性问题,也可能反映了不同种间嵌合胚的发育与受体子宫的不协调关系,这主要来自以下3个方面的因素:一是受体胚胎细胞对供体细胞的排斥;二是两种胚胎细胞在分化、发育和增殖方面的不协调性;三是受体子宫对嵌合胚胎内异种胚胎的排斥。这些因素致使试验中出现频率较高的死胎、发育停滞或流产现象。'