最新TS16949乌龟图与章鱼图培训PPT课件.ppt 99页

'TS16949乌龟图与章鱼图培训 1、专心听讲（请手机“收声”）2、积极思维（杜绝“鱼眼”现象）3、互动学习（敞开心胸，积极投入）4、些许自由（允许小磕睡、短时外出，但须保持安静）5、拒绝干扰（非紧急情况下，请勿接受干扰）6、禁止在课室内吸烟。小憩后请准时回到课室切勿流连忘返温馨提示 第二讲TS16949---过程方法 过程方法输出输入步骤1步骤2步骤3步骤4步骤5步骤N2、过程方法1/4管理过程过程（活动）支持过程顾客满意具有需求的顾客期望需求被满足的顾客输入输出组织内诸过程的系统的应用，连同这些过程的识别和相互作用及其管理，可称之为“过程方法” 过程化管理输入输出过程程序—控制方法过程的有效性有能力达到所确定的目标过程的效率达到目标时所消耗的资源产品---过程的结果包括资源监控和测量的时机事前、事中、事后第一章:过程方法简介 2、过程方法（Processapproach）：2/4输入输出组织过程(Process)过程方法 2过程方法3/4质量管理体系的持续改进4.0质量管理体系5.0管理职责8.0测量、分析和改进6.0资源管理7.0产品实现产品顾客满意顾客要求输出输入COP在哪里？过程相互关系与作用10 过程方法实现过程顾客/相关方要求输入输出顾客/相关方满意管理过程支持过程2过程方法（Processapproach）：4/411 中世纪拦路抢劫的骑士每天的作业流程第一章:过程方法简介开始起床早餐登上塔楼了望骑马出发抢劫商人看见商人了吗？爬下塔楼掠夺东西拖回结束检查表从什么上面可以认出商人检查表行为方式常用的藏身术 3汽车行业的过程方法就是以顾客导向为基础的过程方法的总称。包括：COP过程：顾客导向过程SP过程：支持过程MP过程：管理过程 顾客导向的过程的分析OI组织这是一个过程接口组织—外部环境输入(I）接口组织—外部环境输出(O）第二章:章鱼图分析方法 过程方法3.1COP过程（CustomerOrientationProcess）：组织2支持过程1234输入（I）输出（O）1顾客导向过程（COP）是增值的为顾客导向过程，指那些通过输入和输出直接和外部顾客联系的过程。（如产品设计、合同评审、交付等）输入计划和项目确定产品设计和开发过程设计和开发产品和过程确认反馈/评审纠正措施输出12345顾客样件顾客图纸符合顾客图纸产品 过程方法组织组织2支持过程1234输入（I）输出（O）1顾客导向过程（COP）是增值的供方支持过程的子过程DCBA输入（I）输出（O）2支持过程3.2SP过程（SupportPro：1/2为支持过程，指支持COP过程实现的过程，可分为若干个层次。如人员培训、设备维护、品质保证等） 3.2SP过程（：2/2输入计划和项目确定产品设计和开发过程设计和开发产品和过程确认反馈/评审纠正措施输出12345FMEA过程流程图试生产CP编制作业文件包装标准产品实现策划采购过程顾客要求确定产品实现过程过程是有层次的 过程方法3.3MP过程agementProcess）：1/2供方组织输出（O）输入（I）输入（I）输出（O）输出（O）输出（O）输入（I）输入（I）支持过程支持过程支持过程支持过程支持过程支持过程支持过程支持过程支持过程管理过程指管理过程，为顾客导向的输入和输出交接处或COP过程与过程之间的过程（如管理评审、资源配置、数据分析等） 输入计划和项目确定产品设计和开发过程设计和开发产品和过程确认反馈/评审纠正措施输出12345阶段评审阶段评审阶段评审阶段评审3.3MP过程（ManagementProcess）：2/219 过程方法4IATF规定效分析的过程方法―顾客导向过程形成的组织“章鱼图”模式①②③④⑤⑥⑩⑦⑧⑨IIOO1.市场分析/顾客要求2.投标(成本分析、核算)3.订单/要求(合同评审)4.产品和过程设计(产品实现、设计和开发)5.产品和过程验证/确认6.产品生产(供应商)7.交付8.支付(财务追踪)9.担保/服务10.销售/顾客反馈20 1.市场调研2.产品/过程设计3.产品/过程设计确认4.订单评审5.生产制造6.交付7.销售/支付8.售后服务顾客得到需要的产品②③④⑤⑥⑦OIOIOIOIOII①OIO顾客需求导向顾客调研报告顾客对产品的要求满足顾客要求的图纸、工艺文件、设备、工装等图纸、文件等产品验证报告PPAP顾客产品的需求满足客户要求的产品顾客需求的产品顾客需求的产品、交付计划顾客想购买的产品/零件/价格顾客得到的产品和零件并支付顾客需要的服务⑧OIOIO生产计划、原辅材料顾客得到需要的服务TS16949及过程方法分析应用——“章鱼图” 范例超级市场史密斯先生正在休假,今天下雨,他决定用大部分时间购物.现在他在寻找超级市场.史密斯先生从指路牌上看到一家名叫“不可思议的好吃”的超级市场就在街道的拐角处,就决定去那里.到达超级市场后，史密斯先生找到一个车库，这样可以使他的车不被雨淋湿。然后史密斯先生开始寻找购物车，并在他的汽车附近找到一辆。史密斯先生进入超级市场，开始寻找妻子要求他采购的物品。他很容易找到了他们，因为所有的商品已经按类别划分，并有指示标志方向。现在史密斯先生准备付款并开始排队。没有拥挤，他很快付了款。在停车场指示牌的帮助下，他很快找到了自己的车。把物品放入后备箱内，然后交还了购物车。在下页我们将看到如何对这个场景使用顾客导向的过程分析方法 COP过程方法图想找到产品的顾客（I）2拿到购物车的顾客（O）想运送采购物的顾客（I）已经停好车的顾客（O）想要停车的顾客（I）知道“不可思议好吃”超级市场的顾客（O）不知道“不可思议好吃”超级市场的顾客存在（I）已经找到车的顾客存在（O）想要找到车的顾客存在（I）已经付款的顾客（O）想要付款的顾客（I）已经找到产品的顾客（O）13456 7.产品实现7.1策划7.2与顾客有关的过程7.4采购过程7.3设计和开发过程方法7.5生产和服务提供过程5产品实现过程24 过程方法6IATF规定的组织绩效分析的过程方法―过程分析和过程审核的“乌龟图”输出⑦填写详细的实际输出,这可能是产品、文件，而且应该和实际有效性的测量相联系输入⑥填写详细的实际输入,这可能是一份文件、材料、工具、计划等使用的关键准则是什么？（测量/评估）⑤填写过程有效性的测量，比如矩阵和指标如何做？（实现）②（方法/程序/技术）填写相关的过程控制，支持过程，程序，方法等的详细说明谁进行？④（能力/技能/培训）填写资源要求，特别注意要求的技能和能力准则，安全培训等使用什么方式？③（材料/设备）填写机器（包括试验设备），材料，计算机系统，过程中所使用的软件等的详细说明过程①填写COP或过程名称25 6乌龟图——过程设计开发示例输出⑦PPAP资料和合格产品输入⑥技术规范开发协议适用法规成本要求战略计划服务要求以往经验交付要求KCC/KPC……使用的关键准则是什么？（测量/评估）⑤设计目标质量目标完成进度开发成本开发业绩……..如何做？②APQP产品设计程序P-FMEA多方论证方法DOEQFD样件控制计划防错法…..谁进行？④技术人员工程人员营销人员财务人员质量人员管理人员技能资质培训……使用什么方式？③CADCAM检验试验设备试制设备试制材料供应商清单试制场地………过程①过程设计 过程方法7过程分析/改进过程标准化过程改进YES过程分析合理化？NO寻求最佳实务--BestPractice效果确认YESNO日常管理/过程监测过程再造(BPR) 过程绩效和有效性质量目标质量方针数据分析过程方法过程监控和测量知识管理过程改进经营理念8过程监控和测量 市场营销分析报告输入COP1市场营销销售额输出程序/方法顾客满意度处置及时率退货PPM公司客诉次数评价/监控电话/传真/电脑/国际互联网主导：市场营销部设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 合同正式订单输入COP2合同评审合同评审表内部销售订单/包装卡输出合同/订单评审控制程序程序/方法评审及时率评价/监控电话、传真、电脑、打印机、评审单、合同章主导：市场营销部协助：各相关部门设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 顾客要求相关法律法规类似经验输入COP3过程设计特殊特性清单图纸及技术规范PPAP文件输出产品质量先期策划控制程序程序/方法产品交样一次合格率样品交付准时率评价/监控统计技术、测量系统分析、计算机网络技术、CAD软件、办公软件等、以往类似产品的设计资料、设计标准、检验/试验设备主导：技术部设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 业务计划顾客订单生产计划生产变更通知单输入COP4产品生产满足合同/订单要求的合格产品输出产品质量先期策划控制程序程序/方法生产计划达成率生产目标达成率制程不良率报废率评价/监控1、台钻、车床、滚齿机、滚丝机、铣床、磨床、组装线、包装线等2、专用工装模具、刀具、弹簧夹具、橡胶夹具3、量具、专用测量仪器制造一部制造二部设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 顾客订单合格产品出货计划/出货通知单输入COP5产品交付交付准时率交付监控记录输出产品防护与交付控制程序程序/方法交付准时率附加运费发货出错次数评价/监控叉车、货运车辆、货运公司营业部物管部设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 销售及产品交付情况输入COP6货款回收货款输出销售核销管理办法程序/方法货款回收完成率评价/监控电话、电算化财务系统、应收帐款对帐、应收帐款帐龄分析主导：市场营销部管理统计部设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 顾客的客户信息技术服务协议顾客投诉,抱怨记录客户退货记录输入客诉抱怨分析表差异报告表输出电话/传真/电脑/国际互联网主导：质控部协助：营销部技术部制造部门客诉处理控制程序顾客满意度控制程序程序/方法顾客满意度处置及时率退货PPM公司客诉次数评价/监控COP7服务及顾客信息反馈设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 新产品开发、内部需求、产品/过程更改、顾客投诉、纠正预防措施改进、文件和资料控制要求体系运作产生的记录文件输入1、所有文件和资料的编制、审核、批准、标识、贮存、发放、使用、修改/更改、处置得到有效控制2、文件资料和记录的有效性和完整性3、便于查询输出内部网络、计算机、打印机、复印机、资料柜、各种管制印章主导：人力企划部技术部、质控部协助：各部门文件及资料控制程序文件制作控制程序技术资料控制程序质量记录控制程序程序/方法1、文件有效率2、记录保存完好率评价/监控SP1文件、资料/质量记录控制设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、市场资料2、公司经营计划和公司级数据输入1、成本报告表2、改善措施输出各质量成本活动查检表、各部门质量成本月报表主导：管理统计部协助：各部门质量成本管理控制程序程序/方法1、内部质量损失率2、外部质量损失率评价/监控SP2成本控制设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、岗位职责要求2、人员编制表3、培训记录输入1、培训记录2、合格人员3、员工档案输出电话、传真、电脑、网络、招聘广告、培训室、投影仪、培训教材、办公用品主导：人力企划部协助：各部门人力资源管理控制程序程序/方法1、培训计划完成率2、人员岗位要求符合率3、员工满意度评价/监控SP3人力资源管理及培训设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、生产计划及交付计划2、现场突发事件输入1、突发事件应急计划2、产品的准时交付输出电话、主导：营业/生管部市场营销部协助：各部门应急处理控制程序程序/方法1、交付准时率评价/监控SP4应急计划管理设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、顾客订单及顾客要求2、法律法规要求3、类似的经验输入1、可行性分析报告2、产品设计任务书3、项目计划输出统计分析技术、计算机网络技术、CAXA/CAPP等软件、试生产设备、检验/试验设备主导：技术部协助：营销、质控、制造、生管、采购、财务等产品质量先期策划控制程序程序/方法1、评审及时率评价/监控SP5可行性分析设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、顾客要求2、法律法规要求输入1、PFMEA报告2、改进措施输出统计分析技术、计算机网络技术、CAXA/CAPP等软件、办公设备技术部质控部PFMEA控制程序程序/方法1、产品交样一次合格率2、样品交付准时率评价/监控SP6潜在失效模式及其后果分析设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、APQP开发资料2、顾客要求输入1、PPAP文件2、产品、过程接收准则输出统计分析技术、计算机网络技术、CAXA/CAPP等软件、试生产设备、检验/试验设备技术部生产件批准控制程序程序/方法1、产品交样一次合格率2、样品交付准时率评价/监控SP7生产件批准过程设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、顾客信息2、成品图、技术要求输入1、更改诟合格的产品2、相关的工艺开发资料输出统计分析技术、计算机网络技术、CAXA/CAPP等软件、办公设备技术部工程更改控制程序程序/方法1、产品交样一次合格率2、样品交付准时率评价/监控SP8产品/过程更改设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、采购资料2、项目进度表计划3、初始材料清单4、采购通知单/申购单输入1、采购单2、合格供应商名单3、按时交付满足采购资料要求的产品4、供应商评价结果输出电话、电脑、打印机、传真机、主导：采购部生管部协助：质控部采购控制程序供方选择和控制程序托外加工控制程序程序/方法1、进货检查批次不合格率2、断料次数3、供方体系合格率4、采购成本单价下降率评价/监控SP9采购及供应商管理设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、顾客订单和顾客要求2、月、周生产计划3、生产工艺文件4、生产变更通知单输入1、满足合同/订单要求的合格产品2、过程监控记录3、过程确认记录（CPK报告）输出1、台钻、车床、滚齿机、滚丝机、铣床、磨床、组装线、包装线等2、专用工装模具、刀具、弹簧夹具、橡胶夹具3、量具、专用测量仪器制造一部制造二部物管部生产管理控制程序作业指导书/检验指导书程序/方法1、废品率2、生产计划达成率3、制程不良率4、生产成本目标达成率评价/监控SP10生产过程控制及确认设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 顾客订单和顾客要求输入准时产付的产品输出电脑、打印机、复印机机生管部生管控制程序程序/方法1、生产计划达成率评价/监控SP11生产计划及进度监控设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、设备增加申请单2、设备保养计划3、图纸、技术协议/技术资料输入1、设备验收报告单2、设备台帐及设备维护记录表3、设备维护保养记录4、CMK分析表输出测量仪器、检测设备、配件加工设备、专用工具主导：工程部协助：制造部门设备管理控制程序程序/方法1、设备保养缺失数2、设备维修返修率3、设备CMK符合率4、设备完好率评价/监控SP12设施、设备维护管理设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、模具及图纸技术要求2、模具保养计划输入1、完好的模具2、模具维护保养记录输出工装模具加工设备、检测量具、装配工具工程部工装、模具管理控制程序程序/方法1、工装完好率2、机物料备件断料次数评价/监控SP12.1工装模具管理设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、生产计划及交付计划2、检验结果3、现场管理要求输入1、合格证明2、管理有序的生产现场3、有明确标签进行标识且可追溯其来源的产品输出各类标识卡、各类质量记录表单制造一部制造二部物管部产品标识与可追溯性控制程序程序/方法1、5S考核评分2、工伤事故次数评价/监控SP13标识和可追溯性管理设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、顾客提供模具及图纸技术资料2、模具保养计划3、易损备件更换计划输入1、合格证明2、管理有序的生产现场3、有明确标签进行标识且可追溯其来源的产品输出电脑、打印机、叉车、液压车、仓库等物管部工程部技术部顾客财产控制程序程序/方法1、工装完好率评价/监控SP14顾客财产设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 1、质量体系要求2、顾客对产品防护要求3、仓库管理制度输入1、仓库报表2、合格的库存产品输出仓库等场地、塑料箱、货架、油布物管部产品防护与交付控制程序程序/方法1、库存产品合格率2、帐务准确率3、库存周转率评价/监控SP15产品防护设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 测量设备采购计划测量设备台帐测量设备周期校验计划控制计划MSA计划国家有关鉴定校正规程/量具操作指导书输入合格的检验、测量和试验设备验收、校准记录MSA结果输出检验、实验和测量设备/电脑主导：计量员协助：制造部检测设备控制程序测量系统分析控制程序程序/方法定期校准计划完成率MSA符合率评价/监控SP16计量管理与MSA分析设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 产品检验计划顾客要求法律法规输入产品检测报告输出金相显微镜橡胶性能试验设备万能试验机硬度机/投影仪/主导：试验/检验员协助：制造部采购部实验室管理程序试验设备操作规程程序/方法错检率漏检率定期试验计划完成率评价/监控SP17试验室管理设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 送检通知单待检验的产品控制计划输入进料检验履历表产品标识输出游标卡尺、千分尺量块、偏摆仪、高度尺、深度尺主导：IQC协助：仓管员《进料检验控制程序》外协检验作业标准外购检验作业标准程序/方法及时率误检率漏检率评价/监控SP18-1进料检验设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 游标卡尺、千分尺量块、偏摆仪、高度尺、深度尺、专用量具、量棒、投影仪主导：IPQC协助：作业员制程检验控制程序制程检验作业标准工艺文件程序/方法及时率误检率漏检率评价/监控待检验的产品控制计划输入首件单自主检验报告巡回检验报告产品标识输出SP18-2制程检验设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 已包装好的产品发货通知单控制计划输入产品检验报告单照片输出计算器、数码相机主导：OQC协助：市场营销部物管部出货检验控制程序出货检验作业标准包装标准程序/方法及时率误检率漏检率评价/监控SP18-3出货检验设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 进料不合格品制程不合格品成品不合格品顾客退回不合格品过期库存品、可疑产品输入品质异常报告返工/修单报废单退货通知单纠正和预防措施单输出标签、隔离区、有标识的箱子主导：质控部协助：制造部、物管部生管部、营销部不合格品控制程序纠正/预防措施控制程序返工/修作业指导书程序/方法产品入库不良率制程不良点评价/监控SP19不合格品控制设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 过程业绩数据/图表市场信息竞争对手资料输入业绩状态报告持续改进信息输出电脑、互联网、统计用软件主导：管理者代表协助：质控部统计过程控制程序程序/方法业绩考核完成及时率评价/监控SP20数据分析设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 信息综合分析报告竞争对手分析报告顾客满意度调查分析报告输入质量成本计划质量目标计划生产计划采购计划培训计划顾客满意度计划研究与开发计划输出报刊、互联网调查表、电脑主导：总经理协助：管理者代表经营计划控制程序程序/方法业绩考核完成率业绩指标达成率评价/监控MP1质量方针、目标及经营计划设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 组织架构图输入各质量职能部门和各级人员的职责、权限和能力明确规定输出计算机、打印机、复印机主导：总经理协助：人力企划部职责及权限控制程序程序/方法人员岗位要求符合率评价/监控MP2职责和权限管理设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 审核结果顾客反馈过程业绩和产品符合性纠正和预防措施的状况以往管理评审的跟踪验证可能影响质量管理体系的变更改进和建议实际的潜在的市场失效的分析.及其对质量、安全、环境的影响输入质量管理体系及过程有效性的改进与顾客有关的改进资源需求输出会议室、投影仪、电脑主导：总经理协助：管理者代表管理评审程序程序/方法改进措施有效率评价/监控MP3管理评审设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 年度内稽计划产品出现重大质量问题内、外部顾客发生重大投诉或抱怨产品、工序审核中出现系统性问题流程/职能出现重大调整输入质量管理体系及其过程有效性改进过程质量审核报告过程质量改进措施产品质量审核报告产品质量改进措施输出具有资格内部稽查员检查表主导：管理者代表协助：内稽小组各相关部门过程稽核控制程序产品稽核控制程序程序/方法内审计划完成率100%不符合项整改关闭及时率100%内审覆盖所有部门、生产班次率所有的不符合项的纠正改进预防措施完成率评价/监控MP4内部稽核设备、工具谁来做质量体系过程确认版次:A/0 持续改进计划合理化建议数据分析结果输入持续改进报告满足顾客要求输出分析跟踪技术和评价方法主导：管理者代表协助：各相关部门持续改进控制程序程序/方法改进措施完成率改进措施有效率评价/监控MP5持续改进分析跟踪技术和评价方法设备、工具主导：质控部协助：各相关部门谁来做质量体系过程确认版次:A/0 过程监控报告审核资料顾客反馈输入纠正和预防措施单8D报告输出分析跟踪技术和评价方法设备、工具主导：质控部协助：各相关部门谁来做纠正和预防措施控制程序程序/方法改进措施完成率改进措施有效率评价/监控MP6纠正和预防措施质量体系过程确认版次:A/0 愿携手共进！衷心感谢！Thankyou!65 一、实验目的掌握多抗制备的原理和过程熟悉常用的佐剂掌握福氏完全佐剂的作用机理和制备方法掌握研磨法和注射器法制备免疫乳剂，掌握制备成功的判别标准掌握动物的免疫方法 二、实验原理抗体：介导体液免疫的重要效应分子，是B细胞接受抗原激活后增殖分化为浆细胞所合成分泌的一类能与相应抗原特异性结合的、具有免疫功能的球蛋白。单克隆抗体：抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇激活具有相应抗原受体的B细胞产生的针对这一抗原决定簇的抗体，称为··· 天然抗原分子中常含有多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生的抗体中含有针对多种不同抗原表位的免疫球蛋白，称为多克隆抗体。多克隆抗体 多克隆抗体制备的意义免疫血清：将抗原注入机体所产生的抗体是针对多种抗原决定簇的混合抗体，含有这种特异性抗体的血清。免疫血清作用：对传染病的诊断、预防和治疗有重要意义，而且对器官移植，肿瘤以及某些科研工作也有重要意义。 多克隆抗体优缺点：优点：作用全面，具有中和抗原，免疫调理，介导补体介导的细胞毒作用，ADCC等作用，来源广泛，制备容易。缺点：特异性不高，易发生交叉反应，从而应用受限。 三、实验试剂与材料动物：健康家兔抗原：生化大实验中制备的LDL佐剂：弗氏佐剂注射器、研钵等 动物的选择动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与抗原的性质有关如要获得大剂量的抗体，则采用大动物；如要获得直接标记诊断用的抗体，则直接采用本动物；如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源动物制备抗体 动物的选择如果难以获得的抗原，且抗体的需要量少，则可以采用纯系小鼠制备免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，免疫时应同时选用数只动物进行免疫一般实验室采用的抗体，多用兔子和羊； 抗原就其化学成分而言，有蛋白质抗原、类脂抗原、多糖类抗原和核酸抗原等.根据物理性状可分为颗粒型抗原和可溶性抗原。就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。为了获得较好的抗血清，最好是选用蛋白质抗原 不同的抗原，其免疫原性的强弱均不相同，这种免疫原性的强弱取决于抗原的分子量、化学活性基团、立体结构、物理形状和弥散速度等本次实验采用抗原是生科大实验制备的LDL（至少有2mg，如量不够则用牛血清白蛋白），用生理盐水溶解。 抗原剂量的选择抗原的免疫剂量依照给予抗原的种类，免疫次数，注射途径，以及受体动物的种类，免疫周期及所要求的抗体特性等而不同。剂量过低，不能形成足够强的免疫刺激剂量过高，有可能造成耐受在一定范围内，抗体效价随注射抗原的剂量而增高。 抗原剂量的选择小鼠首次抗原剂量为：50-400μg/次大鼠为100-1000μg/次兔子为200-1000μg/次加强免疫的剂量为首次剂量的1/5-2/5 佐剂概念：预先与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强性物质。种类：一种本身具有免疫原性，如百日咳杆菌、抗酸杆菌（结核分枝杆菌）以及革兰阴性杆菌等；另一种本身无免疫原性，如氢氧化铝、磷酸钙、矿物油乳剂、表面活性剂等。目前应用最多的是弗氏佐剂。 佐剂佐剂的条件作为一种良好的佐剂，必须具备下列条件：（1）增加抗原的表面积，并改变抗原的活性基团构型，从而增强抗原的免疫原性；（2）佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间，减低抗原的分解速度，使抗原缓慢释放至淋巴系统中，持续刺激机体产生高滴度的抗体；（3）佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之增生，从而增强了体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能；（4）良好的佐剂应具有无毒性或副作用低的特点。 佐剂主要作用机制：①改变抗原物理性状，延缓抗原的降解和排除，延长抗原在体内滞留的时间②刺激单核-巨噬细胞系统，增强其对抗原的处理和提呈能力③刺激淋巴细胞的增殖分化，从而增强和扩大免疫应答的能力 佐剂主要用途：①增强特异性免疫应答，用于预防接种及制备动物免疫血清②作为非特异性免疫增强剂，用于抗肿瘤与抗感染的辅助治疗 弗氏佐剂动物实验中最常用的佐剂：①弗氏不完全佐剂(incompleteFreund"sadjuvantIFA)羊毛脂1份+石蜡油5份，混合，高压灭菌后保存。用时加热融化，冷却至50℃左右，加抗原进行乳化处理。②弗氏完全佐剂(completeFreund"sadjuvant,CFA)弗氏不完全佐剂10ml+卡介苗10mg～200mg卡介苗可100℃10min灭活处理。 四、步骤和方法颗粒性抗原多克隆抗体的制备——伤害杆菌O抗血清的制备（介绍）1、伤害杆菌O抗原的制备：接种37℃18-24h洗下菌苔（用NS）100℃1h过滤4000r/min,20min得到原液稀释109/ml应用液 颗粒性抗原多克隆抗体的制备——伤害杆菌O抗血清的制备（介绍）2、免疫方法：选择体重2-3kg的健康家兔，将已经稀释好的抗原按下列剂量及程序做皮内注射。第一天注射1ml，第8天注射1ml，第15天注射2ml，末次注射后7天颈动脉放血，测效价。 可溶性抗原多克隆抗体的制备第一次免疫（基础免疫）第一次加强免疫第二次加强免疫效价测定2-4周2-3周7天 第一次免疫（基础免疫）免疫乳剂的制备①研磨法:取1.2ml佐剂加入到无菌的研钵中，缓慢加入1ml抗原+0.2ml卡介苗混合液，每加一滴研磨至小滴消失，边加边往同一个方向研磨，抗原全部加入后继续研磨至乳白色粘稠的油包水乳剂。 ①研磨法本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。注意事项：⑴每加一滴应研磨至小滴消失，滴加速度要慢⑵边加边往同一方向研磨，否则不易制成乳白色粘稠的油包水乳剂，免疫效果就差。 免疫乳剂的制备②注射器法：取1.2ml佐剂+1ml抗原+0.2ml卡介苗混合液，用两个注射器用皮管对接，使佐剂和抗原往返推拉，直至乳化完全。适用于制备少量的抗原乳剂。本法优点是容易做到无菌操作，抗原损失少。 免疫乳剂制备成功的判别标准油包水状态鉴定方法是将乳化剂滴入4℃左右冷水中，若保持完整不分散，成滴状浮于水面，即乳化完全，为合格的油包水剂。 免疫将制成的乳剂吸入注射器，在兔子背部及颈部皮下注射8-10点，每点约0.2ml每隔14天用初次用量的2/5的抗原于不完全抗原中，在皮下多点注射加强免疫,每点0.2ml,共加强2次。第二次加强免疫开始,在免疫后第7天用免疫双扩散法检查抗体效价。 思考题佐剂的种类有哪些？佐剂的作用原理是什么？有何用途弗氏佐剂中弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂有何区别？抗原的免疫原性与哪些因素有关？ 第一次加强免疫实验目的1.掌握多克隆抗体的应答特点2.理解加强免疫的作用和必要性3.加强动物技能 实验原理体液免疫的一般规律在抗原诱导下，浆细胞产生的抗体经淋巴液和血液流向全身，血液中抗体的浓度随应答时间的持续而增高。在初次接受抗原刺激中，机体发生初次应答，再次接受相同抗原刺激，机体产生二次应答或称回忆应答。 初次应答和再次应答的特点和比较初次应答再次应答潜伏期长,5-10天短,2-5天,约为初次应答的一半抗体类型低亲和力的IgM类抗体为主高亲和力的IgG类抗体为主抗体浓度低高持续时间较短长 加强免疫的作用和必要性再次应答，增加抗体量增强抗体的亲和力 材料和试剂试剂：LDL抗原溶液，佐剂材料：注射器，研钵，消毒棉球 实验步骤免疫乳剂的制备（注射器法和研钵法任选）取抗原溶液（基础免疫的2/5）+弗氏不完全佐剂制备成油包水状态.免疫将制成的乳剂吸入注射器，在兔子背部及颈部皮下注射，每点约0.2ml. 第二次加强免疫实验原理及方法同第一次加强免疫'