最新真菌常用的体外药敏试验方法比较(1)课件PPT.ppt 61页

'真菌常用的体外药敏试验方法比较(1) 真菌药敏试验临床难以开展的原因1.按照NCCLS推荐的稀释法,操作繁琐2.有些药只能用于某种菌的抗菌活性测定3.纸片法试验未得到NCCLS认可4.E试验价钱太贵5.药敏孵育时间因菌种而不同 体外敏感试验与临床治疗相关性真菌体外药敏试验结果与口咽部真菌感染结果相关性好对于深部的真菌感染，抗真菌药物敏感性试验同临床治疗的相关性还有待进一步证实体外敏感试验没有考虑到真菌对抗真菌药物在体内的动力学和复杂的生物学作用 菌液制备将受试菌在沙保罗培养基上转种，以保证其纯度和活性。用0.85%的盐水制成酵母菌悬液，调整其浊度达到0.5麦氏比浊标准（约为1~5×106CFU/ml）。常量稀释法：用RPMI1640液体稀释2000倍接种浓度约为0.5~2.5×103CFU/ml微量稀释法：用RPMI1640液体稀释1000倍接种浓度约为1～5×103CFU/mlE-test法和NCCLS纸片扩散法：用菌液浊度为0.5麦氏单位。Rosco纸片扩散法：1.念珠菌：0.5麦氏浊度，生理盐水1：10稀(1~5×105CFU/ml)2.隐球菌属：1.0麦氏浊度3.其它酵母菌：0.5麦氏浊度，生理盐水1：1稀释 常量肉汤法(M27-A)先将氟康唑粉末溶于蒸馏水，然后用配制好的RPMI1640液倍比稀释，使其起始浓度为640µg/ml,终末浓度为1.25µg/ml，分装无菌洁净的12mm×75mm试管：64321684210.5.25.125＋－前10管：0.2ml氟康唑＋1.8ml菌液念珠菌属35℃孵育48小时新型隐球菌72小时读取MIC结果2ml菌液1.8ml1640 常量稀释法药敏结果判定氟康唑，伊曲康唑，两性霉素为100%抑制其他唑类药物为80%抑制（取0.2ml的生长对照菌液加入0.8mlRPMI液体培养基的菌液浓度）质控株克柔念珠菌ATCC6258近平滑念珠菌ATCC22019白念珠菌ATCC90028白念珠菌ATCC24433 微量肉汤法氟康唑的稀释方法同常量法，但起始浓度为2×常量法的浓度（即128µg/ml），终浓度为0.25µg/ml。。37℃。37℃6432168421.5.25.125＋－氟康唑：1-10孔分别为100ul菌悬液：1-10孔分别为100ul200ulRPMI汤200ul菌悬液35℃新型隐球菌72小时，其余菌株48小时读取MIC结果 酵母菌的NCCLSM27-A各药物折点粘膜及系统性感染：氟康唑（除克柔念珠菌）敏感：≤8µg/ml中介：－耐药：≥64µg/ml粘膜感染：伊曲康唑敏感：≤0.125µg/ml中介：－耐药：≥1µg/ml粘膜及系统性感染：5-氟嘧啶敏感：≤4µg/ml中介：8~16µg/ml耐药：≥32µg/ml 酵母菌E-test法瑞典ABBiodisk优点：有较好的重复性和稳定性MIC E-test法0.5麦氏比浊液（约为1~5×106CFU/ml）。菌悬液均匀涂布于药敏板上35℃培养24小时读取结果光滑念珠菌新型隐球菌等生长较慢的菌种需适当延长培养时间。 E-test法评价准确性高,且操作简便E-test法得到的MIC值在某些菌种中要低于NCCLS推荐的常量肉汤稀释法测得的MIC20%浓度CO2的环境中，可使此方法的结果更真实反映药物对致病菌的敏感性缺点：1.价格太高每片40-50元2.吡咯类MIC终点不好确定 酵母菌纸片扩散法敏感试验NCCLSM44-P.2003培养基：Mueller-Hinton琼脂补充2％Glucose0.5ug/mlMethylenebluedyePH7.2-7.4优点：有较好的重复性和稳定性操作简便，价廉缺点：目前只限氟康唑 NCCLS纸片扩散法0.5麦氏比浊标准（约为1~5×106CFU/ml）。菌悬液均匀涂布于药敏板上步骤同细菌敏感试验操作一致，35～37℃孵育18～24小时，对于生长缓慢的菌株如新型隐球菌，菌液需调至1麦氏单位，孵育48小时，光滑念珠菌也需孵育48小时读取抑菌环直径。 酵母菌纸片扩散法敏感试验NCCLSM44-P.2003氟康唑解释标准和相应的最小抑菌浓度抑菌环直径（mm)MIC（ug/ml)敏感（S)>=19<=8剂量依赖性敏感（SDD)15-1816-32耐药（R)<=14>=64S＝SusceptibleSDD=Susceptible－DoseDependentR=Resistant 酵母菌纸片扩散法敏感试验NCCLSM44-P.2003氟康唑对标准菌株24h抑菌环直径（mm)的质控允许范围标准菌株氟康唑25ug沃尔康唑1ug白念珠菌ATCC9002828-3931-42近平滑念珠菌ATCC2201922-3328-37热带念珠菌ATCC75026-37－克柔念珠菌ATCC6258－16-25 ROSCO纸片扩散法ROSCO纸片扩散法：1.克柔念珠菌：0.5麦氏浊度，生理盐水1：10稀释菌液为5×105CFU/ml2.隐球菌属：1麦氏浊度3.其它酵母菌：0.5麦氏浊度，生理盐水1：1稀释菌液为2.5×106CFU/ml将稀释好的菌液涂布在改良的SHADOMY（PH7.0）培养基上其它操作同细菌。 读取抑菌环直径近似到mm在大约80%抑制区为测量边界在抑菌环内个别细小或中等大小的菌落，<15可忽略不计Rosco纸片扩散法药敏结果判定 两种纸片扩散法的比较Rosco纸片扩散法检测菌种念珠菌属，隐球菌属培养基改良SHADOMY琼脂，PH7.0试验药品及剂量AMB10µg，IT8µg，FLA15µg，FC1，10µg，FC10µg，KET15µg等接种的菌量：5×105CFU/ml（克柔念珠菌先制成0.5麦氏浊度，再用生理盐水1：10。隐球菌属配1.0麦氏不稀释）其它菌种配0.5麦氏浊度，1：1稀释培养条件念珠菌属35℃培养18~24小时，新型隐球菌30℃培养42~48小时结果判读FC及AMB100%被抑制唑类药物80%抑制质控株光滑念珠菌2238NL白念珠菌ATCC64548白念珠菌ATCC64550NCCLS纸片扩散法检测菌种念珠菌属，隐球菌属培养基Mueller-Hinton琼脂中补充2%的葡萄糖和0.5μg/ml的美蓝试验药品及剂量FLA25µg接种的菌量1～5×106/mL隐球菌1.0麦氏浊度培养条件35℃孵育18～24小时新型隐球菌培养42~48小时结果判读FC及AMB100%被抑制，唑类药物80%抑制质控株白念珠菌ATCC90028近平滑念珠菌ATCC22019 Rosco纸片扩散法各药物折点粘膜酵母菌感染氟康唑，克霉唑，酮康唑，氟胞嘧啶1ug，特比奈吩，咪康唑等敏感：≥20mm中介：12~19mm耐药：≤11mm两性霉素B，制霉菌素伊曲康唑敏感：≥15mm中介：10~14mm耐药：无抑菌环氟胞嘧啶10ug敏感：≥30mm用于黑曲霉中介：23~29mm耐药：≤22mm灰黄霉素敏感：≥10mm中介：－耐药：无抑菌环 系统性酵母菌感染氟康唑15ug18-24h敏感：≥30mm≤4中介：29~23mm8-16耐药：≤22mm≥32伊曲康唑8ug18-24h敏感：≥20mm≤0.06中介：19~12mm0.125耐药：≤11mm≥0.25这个MIC标准为纸片法的相应值Rosco纸片扩散法各药物折点 系统性酵母菌感染酮康唑15ug纸片和培养基广州乐通公司可供应敏感：≥30mm≤0.12中介：23-290.25耐药：≤22mm≥0.5两性霉素10ug敏感：≥15mm≤1中介：14-102耐药：≤9mm≥4氟胞嘧啶1ug敏感：≥20mm≤4中介：12-198-16耐药：≤11mm≥32氟胞嘧啶10ug用于黑曲霉敏感：≥30mm≤4中介：23-298-16耐药：≤22mm≥32Rosco纸片扩散法各药物折点 氟孢嘧啶氟康唑-制霉菌素伊曲康唑两性霉素B克霉唑-特比奈酚 结论1.常量稀释法难以推广2.微量板浪费3.NCCLS纸片法只做氟康唑4.建议目前用Rosco纸片5.寄希望将来推行Etest法 简单的C程序设计顺序程序设计 4.1C语句概述一、C程序结构C程序源程序文件1源程序文件2源程序文件n••••••预处理命令全局变量声明函数1函数n••••••函数首部函数体局部变量声明执行语句 1.控制语句：完成一定的控制功能。C有9种控制语句：⑴if()~else~（条件语句）⑵for()~（循环语句）⑶while()~（循环语句）⑷do~while()（循环语句）⑸continue（结束本次循环语句）⑹break（中止执行switch或循环语句）⑺switch（多分支选择语句）⑻goto（转向语句）⑼return（从函数返回语句） 2.函数调用语句由一次函数调用加一个“;”构成。如：printf(“HelloWorld!”);函数调用分号3.表达式语句由表达式加上“;”构成。如：x+4*y；算术表达式语句4*7，4+8；逗号表达式语句x=4*7;赋值表达式语句(赋值语句) 4.空语句由一个“;”构成。即：;作用：①程序转向点；②什么也不做的循环体。whiel(i<=11);5.复合语句用{}括起的一组语句。如：if(x1>x2){y=x1*x1+x2;printf("y=%d",y);}不能省略不能加“;” 4.空语句由一个“;”构成。即：;作用：①程序转向点；②什么也不做的循环体（待开发）。5.复合语句用{}括起的一组语句。①复合语句中的每一个语句还可以是复合语句；②复合语句尽管可由多个语句组合，但它只相当于一个语句，在任何单一语句可以存在的地方，复合语句都可以存在。 4.2赋值语句⑵赋值表达式和赋值语句不同，赋值表达式可以被包含在其它表达式之中。如：if((a=b)>0)t=a;其执行过程是：先进行赋值运算（将b的值赋给a）,然后判断a是否大于0，如大于0，执行t=a。如果写成：if((a=b;)>0)t=a;错了。在if的条件中不能包含赋值语句⑴C语言中的赋值号“=”是一个运算符。注意： 4.3数据输入输出的概念及在Ｃ语言中的实现一、数据输入输出的概念计算机的输入输出是以计算机主机为主体而言。输入：从外部通过输入设备（如，键盘、磁盘、光盘、扫描仪等）向计算机输入数据。输出：从计算机向外部设备（如，显示屏、打印机、磁盘等）输出数据。 二、数据输入输出在Ｃ语言中的实现１．调用输入输出函数实现输入输出操作Ｃ语言本身不提供输入输出语句，输入和输出操作是通过调用Ｃ语言库函数中输入输出函数来实现的。如：putchar函数——输出字符getchar函数——输入字符printf函数——格式输出scanf函数——格式输入puts函数——输出字符串gets函数——输入字符串 1、C语言库函数已被编译成目标文件（二进制形式）2、源程序必须先编译成目标文件。源程序中的输入输出函数等库函数，在编译时并不被翻译成目标指令。3、生成好的目标文件（.OBJ）必须与与系统的函数库（以及其他的目标文件）进行连接，，形成可执行文件（EXE）4、运行EXE文件时，调用已被连接的函数库中的系统函数。 main(){inta,b;a=10;b=20;printf(“a=%d,b=%d”,a,b);}printf()的目标代码系统函数库………………. 2．文件开头应有“#include”命令在调用标准输入输出库函数时，文件开头应有预编译命令：#include或#include“stdio.h”其中，stdio.h是“头文件”，包含了与用到的标准输入输出函数有关的信息。系统允许在使用printf和scanf两个函数时可不加“#include”命令。 4.4字符数据的输入与输出一、putchar函数（字符输出函数）一般格式：putchar(c)必须有预编译命令∶#include功能∶从终端输出一个字符,且转换成ascii码返回。说明：其中c可以是字符型常量、字符型变量、整型常量、整型变量表达式。 例：#includemain(){chara,b,c;a=‘B’;b=‘O’;c=‘Y’;putchar(a);putchar(b);putchar(c);putchar(‘’’);}输出结果:BOY’ 一般格式：getchar()——没有参数必须有预编译命令∶#include功能∶从终端输入一个字符。#include”stdio.h”main(){charc;c=getchar();putchar(c);}a例：a二、getchar函数(字符输入函数) 4.5格式输入输出函数printf();scanf();格式字符说明d,i用来输入有符号的十进制整数u用来输入无符号的十进制整数o用来输入无符号的八进制整数x,X用来输入无符号的十六进制整数c用来输入单个字符s用来输入字符串f用来输入实数（小数或指数）e,E,g,G与f作用相同，e与f,g可以互相替换 4.5.1printf函数（格式输出函数）功能：向终端输出若干个任意类型的数据。(一)printf函数的一般格式printf（格式控制，输出表列） 举例：main(){inta=3,b=4;printf(“a=%db=%dn”,a,b);}输出结果:a=3b=4格式说明(格式字符)普通字符输出表列转义字符 main(){charc1=‘a’,c2=‘b’,c3=‘c’,c4=‘101’,c5=‘116’;printf(“a%cb%ctc%ctabcn”,c1,c2,c3);printf(“tb%c%c”,c4,c5);}aabbccabcAN printf（格式控制，输出表列）1.格式说明,由“%”和格式字符组成,如%d,%f等。说明：“输出表列”是需要输出的一些数据(变量、表达式)。“格式控制”是用双引号括起来的字符也称“转换控制字符串”，它包括三种信息：3.转义字符,将后面的字符转换成另外的意义P48表2.普通字符,即需要原样输出的字符。 (二)格式字符对不同类型的数据用不同的格式字符。1.d格式符——用来输出十进制整数。(1)%d：按整型数据的实际长度输出。如：inta=123;printf(“%d”,a);结果：123 (二)格式函数对不同类型的数据用不同的格式字符。1.d格式符——用来输出十进制整数。(2)%md：m为指定的输出字段的宽度。若数据位数小于m，则左端补以空格;若大于m，则按实际位数输出。如：inta=123,b=12345;printf(“%4d,%4d”,a,b);结果：123,12345 (二)格式函数对不同类型的数据用不同的格式字符。1.d格式符——用来输出十进制整数。(3)%ld：输出长整型数据。也可以对长整型数据指定字段宽度。如：longa=1234567;printf(“%ld,%8ld,%5ld”,a,a,a);结果：1234567,1234567,1234567 2.o格式符——以8进制数形式输出整数.输出的数值不带符号,即将符号也一起作为八进制数的一部分输出。如：inta=-1;printf（“%d,%o”,a,a）;结果：-1，177777o格式符同d格式符一样，可以输出长整型数据，也可以指定字段宽度。1111111111111111 3.x格式符——以16进制数形式输出整数。同样不会出现负的十六进制数。4.u格式符——以十进制形式输出unsigned型数据如：main(){unsignedinta=65535;intb=-2;printf(“a=%d,%o,%x,%un”,a,a,a,a);printf(“b=%d,%o,%x,%un”,b,b,b,b);}输出结果：a=-1,177777,ffff,65535b=-2,177776,fffe,65534 二、scanf函数（格式输入函数）(一)scanf（格式控制，地址表列）1015main(){inta,b,c;scanf(“%d,%d”,&a,&b);printf(“a=%d,b=%d”,a,b);输入：10，15输出：a=10,b=15ab 如：inta,b,c;scanf(“%d%d%d”,&a,&b,&c);输入形式：1017181inta,b,c;scanf(“%d,%d,%dn”,&a,&b,&c);输入形式：10，11，12scanf(“%3d%3d%c”,&a,&b,&ch);输入形式：123456abc结果：a=123b=456ch=‘a’scanf(“%d%d%c”,&a,&b,&ch);输入形式：123456abc结果：a=123b=456ch=‘a’ main(){charc1,c2;scanf(“c1=%c,c2=%c”,&c1,&c2);printf(“%c%c”,c1,c2);}输入数据：c1=a,c2=b输出数据：ab main(){intx,y,z;charch;scanf(“%7.2d%d%d%c”,x,y,z,ch);}main(){intx,y;scanf(“%5d,%3d”,&x,&y);}输入数据：345,567有错吗？ 说明：1.%后的“*”附加说明符，用来表示跳过它相应的数据。如：scanf(“%2d,%*3d,%2d”,&a,&b);输入：12,456,67结果：a=12b=672.输入数据时不能规定精度。╳Scanf(“%7.2f”,&a);3、scanf(“a=%d,b=%d”,&a,&b);输入：a=12,b=134、scanf(“%c%c%c”,&a,&b,&c);输入：abc空格和转义字符都作为有效字符输入 main(){inta,b;floatx,y;charc1,c2;scanf(“a=%db=%d”,&a,&b);scanf(“%f%e”,&x,&y);scanf(“%c%c”,&c1,&c2);printf(“%d,%d,%f,%f,%c,%c”，a,b,x,y,c1,c2);}输入数据：a=10b=201010ab输出数据：10,20,10.00000,20.00000,a,b输入方式2：a=10b=201020ab main(){inta,b;floatx,y;charc1,c2;scanf(“a=%db=%d”,&a,&b);scanf(“x=%fy=%e”,&x,&y);scanf(“c1=%cc2=%c”,&c1,&c2);printf(“%d,%d,%f,%f,%c,%c”,a,b,x,y,c1,c2);}输入数据：a=10b=20x=10y=10c1=ac2=b输出数据：10,20,10.00000,20.00000,a,b 4.6顺序结构程序设计(顺序结构)(选择结构)(循环结构) 二、顺序结构程序设计特点：程序按语句从上到下的排列顺序依此执行，每条语句必须执行且只能执行一次，没有执行不到或执行多次的语句。例如：已知圆柱体半径6米，高7米，求体积。#definePI3.14159main(){floatr,h,s,v;r=6;h=7;s=PI*r*r;v=s*h;printf(“V=%fn”,v);} 例4.11从键盘输入一个大写字母，要求改用小写字母输出。分析：已知∶字符变量c1为大写字母。求解∶将字符变量c2中放入相应的小写字母。计算公式∶c2=c1+32(小写改成大写字母？）开始计算c2=c1+32输出c1结束输入一大写字母放入c1中输出c2#includemain(){charc1,c2;c1=getchar();/*键盘输入一个大写字母*/printf(“%c,%dn”,c1,c1);c2=c1+32;printf(“%c,%dn”,c2,c2);}输入:A输出:A,65a,97'