最新连翘提取物提取分离工艺及其检测方法进展课件PPT.ppt 38页

'连翘提取物提取分离工艺及其检测方法进展 连翘连翘(FructusForsythiae)为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实,主产于我国山西、陕西、河南、山东等地。具有清热解毒、消肿散结之功效,主治温热、丹毒、斑疹、疮疡肿毒、瘰疬等症。我国药典规定，连翘的原植物为木犀科连翘(ForsythiasuspenseThund.Vahl)的成熟果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称青翘；果实熟透时采收,晒干，除去杂质，习称“老翘”在国际市场上，其同属植物金种花(F.viridissima)和朝鲜连翘(F.koreana)亦作为连翘正品使用[1]。 1.2连翘酯苷提取分离工艺王霖娇等提出了一种连翘酯苷提取新工艺，原料经乙醇冷浸、大孔树脂粗分离后过葡聚糖凝胶柱和C18中压柱精分离获得纯度达98%的连翘酯苷产品[8]。高学敏等采用回流提取，大孔树脂法分离制备连翘酯苷，并通过正交试验法考察加醇量、回流时间、回流次数、醇浓度4个因素，研究不同类型大孔树脂对连翘酯苷收率的影响，得到连翘酯苷纯度为18.3%-22.5%的产品[9]。 王进东等认为D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷能显著提高连翘酯苷的纯度，其最佳工艺为上样液浓度含连翘生药1.2g/ml,苷的最佳工艺为上样液浓度为含连翘生药1.2g/mL,用6BV的30%乙醇液进行洗脱,二次洗脱后,连翘酯苷的含量可达60%以上。并得出结论，该技术能显著提高连翘酯苷的纯度,具有吸附量大,洗脱容易,经济环保等优点,适合于规模化生产[10]。 刘明等以连翘酯苷A含量为指标，采用高效液相法，考察D-101型，D-201型，HPD-100型，HPD-300型等8种大孔吸附树脂对连翘中连翘酯苷A吸附纯化工艺条件，结果表明HPD-300型大孔吸附树脂具有最佳的吸附洗脱参数，其动态饱和吸附－洗脱量达3.57%其吸附分离连翘酯苷A的工艺条件为:上样浓度为0.3g(生药)/ml,吸附流速为1BV/h,以5倍柱体积水洗脱,继以7倍柱体积50%乙醇洗脱。结论是该技术适用于连翘中连翘酯苷A粗提取的工业化生产，连翘酯苷A纯度可达50%左右[11]。 王鹏等通过药效学实验比较连翘超临界CO2萃取物、分子蒸馏蒸出物和水提物的解热、镇痛效果。其方法为用2,4-二硝基苯酚法比较萃取物、分离物及水提物的解热效果;腹腔注射醋酸溶液法比较萃取物、分离物及水提物的镇痛效果。结果显示连翘水提物的解热、镇痛效果均优于超临界萃取物和分子蒸馏蒸出物。因此得出结论连翘发挥解热和镇痛作用的主要有效成分存在于水溶性部分[12]。 2.1连翘苷类的检测方法2.1连翘苷的检测方法雷建林等采用反相高效液相色谱法测定不同产地连翘药材中连翘苷的含量，流动相为乙腈－水(25:75)，流速为1.0mLmin-1，检测波长为277nm，进样量为10L，柱温为30℃结果:在选定色谱条件下，连翘苷分离度良好，线性范围为0.4348～4.348g，r=0.9999，平均回收率98.9%，RSD=0.68%(n=6)[13]。 王玮等分别以拉曼峰的相对峰强和峰面积比值作为参量，以不同采收时期和不同产地的连翘叶为对象，采用内标法进行连翘苷的含量测定。以相对峰强为参量时，选取样品溶液拉曼光谱中连翘苷苯环振动(1319.1cm-1处的强峰)和溶剂甲醇中CH3-O反对称伸缩振动(2974.7cm-1)作为定量峰和内标参比峰;以峰面积比值作为参量时，选取连翘苷苯环振动(1319.1cm-1处的强峰)和溶剂甲醇中CH3-O对称伸缩振动(3020.9cm-1)作为定量峰和内标参比峰，分别以定量峰与内标峰强和峰面积的比值为纵坐标，以连翘苷浓度为横坐标绘制标准曲线，并对线性和加样回收率进行比较。结果显示2种参量作为响应值用于拉曼光谱定量分析，均有良好的线性，相关系数r分别为0.9980和0.9976;回收率均在100.04%～101.30%之间，回收完全;对2种参量的测定结果进行线性拟合，得出回归方程C2=1.0304C1－0.0331，r=0.9996。结果表明两者测得结果一致，利用2种参量进行定量分析都能取得准确结果。拉曼光谱用于连翘苷的定量分析具有操作简便迅速等优点，可以用于中草药的含量测定[14]。 2.2连翘酯苷的检测方法靖会等建立HPLC法测定连翘中连翘酯苷的含量,采用C18柱,乙腈-水-醋酸(15∶85∶0.2)为流动相,检测波长为332nm,柱温室温,流速为1.0mL·min-1。连翘酯苷在0.010～0.810g·L-1范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为100.5%,RSD1.61%。该法简便快速,重现性好,适于连翘中连翘酯苷的定量分析[15]。 王星等利用近红外光谱法快速测定连翘药材中连翘酯苷含量。其利用HPLC测定样品中连翘酯苷的含量，运用偏最小二乘(PLS)法建立其含量与NIR光谱之间的多元校正模型,对未知样品进行含量预测。结果显示建立的定量模型准确性好,内部交叉验证均方差(RMSECV)、内部交叉验证决定系数分别为0.1221,0.1969。经外部验证,NIR预测值与HPLC测定值之间的相关系数为0.1961,预测均方差(RMSEP)为0.118。得出结论近红外光谱法对连翘中连翘酯苷含量预测结果较好,能满足制药中检测的精度要求,为中药生产过程的在线、无损定量分析提供了依据[16]。 结语连翘在我国地理分布广，资源丰富，临床疗效确切，具有很好的开发价值。对连翘有效活性成分的进一步研究开发，可以使我国丰富的药用植物资源得到充分的利用，也必将为疾病的治疗提供有效的帮助。 参考文献[1]闫丽丽,姜颖.连翘药材主要化学成分及药理作用研究综述[J].中国新技术新产品，2011,11:11.[2]张海燕.连翘化学成分及药理活性的研究进展［J］．中药材，2000，23(10):657－660.[3]王娅丽，杨建雄，柴渭莉.连翘叶中连翘苷类成分的提取工艺研究[J].西北药学杂志，2006,21(1):92.[4]胡光，姚志娟.正交实验法优选乙醇提取连翘苷的工艺研究[J].黑龙江医药，2004,17(5):41-42.[5]于春波，秦绪红.大孔吸附树脂法富集连翘中连翘苷的研究[J].黑龙江医药，2004,17(2):104-106.[6]卢静华，刘元媛.连翘中连翘苷超声法提取工艺的研究[J].辽宁医学院学报，2011,32(1):68-70.[7]武果桃，牛国庆，刘红霞等.两种提取方法对连翘中连翘苷含量的影响[J].中医医药杂志，2009(6):48-50.[8]王霖娇，盛茂银.青翘和黄翘中连翘酯苷含量的比较及其提取工艺研究[J].种子，2006,25(10):29-31.[9]高学敏，王栋，金鑫等.正交实验优选-大孔树脂分离连翘酯苷的工艺[J].中华医学实践杂志，2007,6(1):6-8.[10]王进东，赵志君,辛俊伟.D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷的工艺研究[J].山西中医学院学报，2008,9(3):45-46.[11]刘明,王慧森,李更生.HPD-300型大孔吸附树脂分离纯化连翘中连翘酯苷A的工艺研究[J].时珍国医国药,[12]王鹏，胡艳群.连翘提取分离产物的药效学研究[J].中药材，2011,34(5):776-779.[13]雷建林,李艳桃,聂会生等.HPLC法测定不同产地连翘药材中连翘苷的含量[J].中华中医药学刊,2012,30(1):202-203.[14]王玮,席欣欣,杨浩等.拉曼光谱法测定连翘苷含量的探讨[J].第二军医大学学报,2011,32(1):62-65.2012,23(1):68-71.[15]靖会,李教社,曹蔚等.高效液相色谱法测定连翘中连翘酯苷的含量[J].西北药学杂志，2003,18(4):156-157.[16]王星,白雁,陈志红等.近红外光谱法测定连翘中连翘酯苷含量[J].中国中药杂志，2009，34(16):2071-2074. 谢谢！ 24.2.2直线和圆的位置关系（第三课时） BA1、如何过⊙O外一点P画出⊙O的切线？2、这样的切线能画出几条？如下左图，借助三角板，我们可以画出PA是⊙O的切线.3、如果∠P=50°,求∠AOB的度数.50°130°复习回顾 OABP思考：已画出切线PA、PB，A、B为切点，则∠OAP=90°,连接OP，可知A、B除了在⊙O上，还在怎样的圆上?.探究新知 ··oo′p1.连结OP2.以OP为直径作⊙O′，与⊙O交于A、B两点。AB即直线PA、PB为⊙O的切线如图，已知⊙O外一点P，你能用尺规过点P作⊙O的切线吗？通过作图你能发现什么呢？1.过圆外一点作圆的切线可以作两条2.点A和点B关于直线OP对称探究新知 切线长的概念经过圆外一点作圆的切线，这点和切点之间的线段的长，叫做这点到圆的切线长.如图，P是⊙O外一点，PA，PB是⊙O的两条切线，点A，B为切点，把线段PA，PB的长叫做点P到⊙O的切线长.O·PABO 切线与切线长是一回事吗？它们有什么区别与联系呢？OPAB切线是一条与圆相切的直线;2.切线长是线段的长，这条线段的两个端点分别是圆外一点和切点.切线和切线长的区别： OABP观察与思考①PA、PB有怎样的数量关系？②OP与∠APB又有怎样的关系？PA=PB∠OPA=∠OPB 请证明你所发现的结论.APOB证明：∵PA，PB与⊙O相切，点A，B是切点∴OA⊥PA，OB⊥PB即∠OAP=∠OBP=90°∵OA=OB，OP=OP∴Rt△AOP≌Rt△BOP(HL)∴PA=PB∠OPA=∠OPB已知：如图，已知PA、PB是⊙O的两条切线．求证：PA=PB∠OPA=∠OPB ∵PA、PB分别切⊙O于A、B，∴PA=PB,OP平分∠APB.从圆外一点引圆的两条切线，它们的切线长相等，圆心和这一点的连线平分两条切线的夹角.几何语言:切线长定理。PBAO 探究：PA、PB是⊙O的两条切线，A、B为切点，直线OP交⊙O于点D、E，交AB于点C.BAPOCE(1)写出图中所有的垂直关系OA⊥PA，OB⊥PBAB⊥OP(2)写出图中与∠OAC相等的角∠OAC=∠OBC=∠APC=∠BPCD切线长定理的辨析 △AOP≌△BOP，△AOC≌△BOC，△ACP≌△BCP(4)写出图中所有的等腰三角形△ABP△AOB(3)写出图中所有的全等三角形(5)还有哪些等量关系？BAPOCED 反思：在解决有关圆的切线长问题时，往往需要我们构建基本图形.与圆的切线相关的添加辅助线的方法：(1)分别连结圆心和切点(2)连结两切点(3)连结圆心和圆外一点BAPOCED切线长定理为证明线段相等，角相等，弧相等，垂直关系提供了理论依据。必须掌握并能灵活应用。 (2)△OAP≌△OBP,△OCA≌△OCB△ACP≌△BCP.例1：已知，如图，PA、PB是⊙O的两条切线，A、B为切点.直线OP交⊙O于点D、E，交AB于C.（1）写出图中所有的垂直关系；（2）写出图中所有的全等三角形.（3）如果PA=4cm,PD=2cm,求半径OA的长.AOCDPBE解：(1)OA⊥PA,OB⊥PB,OP⊥AB(3)设OA=xcm,则PO=PD+x=2+x(cm)在Rt△OAP中，由勾股定理，得PA2+OA2=OP2即42+x2=(x+2)2解得x=3cm所以，半径OA的长为3cm.例题解析 例2已知：如图，PA、PB为⊙O的切线，A、B为切点，BC是直径。求证：AC∥OPD证明：连接AB交OP于D∵PA、PB切⊙O于A、B，∴PA＝PB，∠1＝∠2(切线长定理）12∴OD⊥PB，∠ADP＝90°(？）∵BC是⊙O直径，∴∠BAC＝90°∴∠BAC＝∠ADP∴AC∥OP.(？） 如图,一张三角形的铁皮,如何在它上面截下一块圆形的用料,并且使圆的面积尽可能大呢?ID内切圆和内心的定义:与三角形各边都相切的圆叫做三角形的内切圆.内切圆的圆心是三角形三条角平分线的交点,叫做三角形的内心.探究新知 ．o外心（外接圆圆心）：三角形三边垂直平分线的交点。外接圆的半径：交点到三角形任意一个定点的距离。三角形外接圆三角形内切圆．o内心（内切圆圆心）：三角形三个内角平分线的交点。内切圆的半径：交点到三角形任意一边的垂直距离。AABBCC 例3：△ABC的内切圆⊙O与BC、CA、AB分别相切于点D、E、F，且AB=9cm，BC=14cm，CA=13cm，求AF、BD、CE的长.【解析】设AF=x(cm),则AE=x(cm)∴CD=CE=AC-AE=(13-x)cmBD=BF=AB-AF=(9-x)cm由BD+CD=BC可得(13-x)+(9-x)=14解得x=4∴AF=4(cm),BD=5(cm),CE=9(cm).例题解析 例4：如图，四边形ABCD的边AB、BC、CD、DA和⊙O分别相切于点L、M、N、P，求证：AD+BC=AB+CD证明：由切线长定理得AL=AP，LB=MB，NC=MC，DN=DP∴AL+LB+NC+DN=AP+MB+MC+DP即AB+CD=AD+BCDLMNABCOP补充：圆的外切四边形的两组对边的和相等．例题解析 切线的6个性质：（1）切线和圆只有一个公共点；（2）切线和圆心的距离等于圆的半径；（3）切线垂直于过切点的半径；（4）经过圆心垂直于切线的直线必过切点；（5）经过切点垂直于切线的直线必过圆心；（6）切线长定理.通过本课时的学习，需要我们掌握：谈谈你的收获课堂小结 检测反馈题一1.已知:△ABC中,∠ABC=50º,∠ACB=70º,点O是内心，求∠BOC的度数。2.圆的外切四边形ABCD，四边与圆的切点分别为E、F、G、H（1）图中有哪些相等的线段（2）四边形的两组对边怎样的关系?证明你的结论。 检测反馈题二1.已知:如图,⊙O是Rt△ABC的内切圆,∠C是直角,∠AC=3,BC=4.求⊙O的半径r.2.已知:如图,△ABC的面积为S,三边长分别为a,b,c.求内切圆⊙O的半径r.'