最新乳腺癌brca1基因筛查-安徽省肿瘤医院乳腺外科-洪士开课件PPT.ppt 56页

'乳腺癌brca1基因筛查-安徽省肿瘤医院乳腺外科-洪士开 为什么会得肿瘤？易感基因筛查检测有什么意义？受检者实例分享目录 预防性双乳切除术 乳腺癌是中国女性发病率最高的恶性肿瘤中国平均每天被确诊为乳腺癌的人数中国每天因乳腺癌去世的人数中国女性被诊断为乳腺癌的平均年龄；比西方女性更加年轻中国乳腺癌发病率增长速度/全球乳腺癌发病率增长速度；城市地区尤为显著 携带BRCA1/2基因突变的“遗传性乳腺癌-卵巢癌综合征”家庭的女性患者，其乳腺癌的终身发病率为60%，相对于正常人群（12%）来说，发病率提高5倍；卵巢癌的终身发病风险从正常人群的1.4%提高至15%~40%。BRCA1和BRCA2突变携带者是发生乳腺癌、卵巢癌和对侧乳腺癌的高危人群 致癌因素——遗传因素1、什么是易感基因？能引起人群肿瘤患病风险提高以及患病年龄提前的基因，称之为肿瘤易感基因，这些易感基因通常是与生俱来的。2、易感基因怎么得来的？大部分人是从父、母家系中获得一个或多个缺陷的易感基因。若父母亲双方有一个携带有缺陷的肿瘤易感基因，下一代有50%的概率从父母获得这个缺陷的基因。 亲缘级数亲属关系亲缘系数遗传概率一级亲父母、同胞、子女½50%二级亲祖父母、外祖父母、叔、姑、舅、姨、侄子（女）、外甥（女）、孙子（女子）¼30%同、父异母或同母异父同胞三级亲曾祖父母、外曾祖父母、叔（舅）公、姑（姨）婆、曾孙（女）、外曾孙（女）、堂(表）兄弟姐妹1/820%亲属发病率高于群体发病率亲缘关系级系数递增，发病率向群体靠拢亲属的亲缘级数和亲缘系数的关系 人类基因组计划TheHumanGenomeProject揭开组成人体4万个基因的30亿个碱基对的秘密8/3/202111 “人类基因组计划的完成为医学提供了大量信息，由此发展出1000余种疾病的基因诊断技术，目前已经有700余种用于临床。其中大部分可以诊断发病率低的遗传病，但是越来越多的基因诊断技术被用于广大人群，主要用于：1.疾病相关基因变异携带者的发现2.常见疾病的遗传风险预测和提示3.指导个体化用药基因检测和其它正在发展遗传筛选和预防技术将对人类的健康医疗产生巨大的影响。”—美国国家疾病控制中心基因检测部8/3/202112 什么是人基因组?细胞细胞核染色体8/3/202113 23对染色体32亿碱基对人类细胞含有两套染色体，一套来自于父亲，一套来自于母亲。8/3/202114 最近10年中，对于人类遗传学的研究得到了长足的发展；目前超过4000种疾病(例如镰刀细胞贫血症和囊性纤维性变病)具有遗传性，在家族中传递；基因在心脏病、糖尿病、多种癌症发生发展中起到重要作用。基因与人类健康密切相关8/3/202115 致癌因素——环境因素1、化学致癌因素2、物理致癌因素3、病毒和细菌致癌为什么会得肿瘤？【汽车尾气、香烟中的有毒化学成分：尼古丁、焦油等因素】【某些寄生虫；日光曝晒与黑色素瘤；等因素】【幽门螺旋杆菌与胃癌；EB病毒与鼻咽癌；等因素】 环境因素遗传因素环境-遗传相互作用化学性因素物理性因素生物性因素生活因素工作因素饮食因素机械创伤…过敏性疾病常见肿瘤内分泌性疾病自身免疫性疾病心脑血管疾病精神异常药物成瘾…染色体疾病单基因遗传病先天性疾病…人类疾病病因的宏观解析 为什么有些人少吃也发胖，而另外一些人多吃却苗条？为什么有人烟不离手却不得肺癌，而另外一些仅仅吸二手烟却不能避免？WHY?同一肿瘤，不同人为什么患肿瘤的时间不一样呢？ 两个问题，同一答案同一环境下的不同个体患病风险不同患同一种病的不同个体对同一药物的反应不同基因不同解码生命信息掌握健康未来 例：遗传性肠癌的基因检测及其作用10％的肠癌为遗传性癌症，它们都与癌症易感基因有关，如肿瘤抑制基因APC或者DNA修复基因中发生突变等。对肠癌高患病风险人群进行的预测性遗传检查，民众接受度非常高绝大多数阳性结果者愿意接受预防性治疗或手术（携带这些易感基因型的人25岁开始每3年作一次肠镜，40岁开始每年作一次肠镜，甚至可以作预防性切除手术（接受率达70％），这就使家族性肠癌的发病率下降了90％。）解码生命信息掌握健康未来 抵御外界环境因素的能力下降：易感基因的缺陷使人体正常防御功能产生“漏洞”，这些特定的人群对环境中的危险因素防御能力不足。易感基因的缺陷为什么会导致肿瘤？对肿瘤患病因素敏感度有所提升：易感基因缺陷后人体对焦油、尼古丁等致癌物敏感度提高，更容易受到致癌物的刺激。 8/3/202122 有乳腺癌家族史（尤其是母亲、姐妹等亲属）；第一次妊娠年龄大于30岁及从未生育过的妇女；进食过多的动物脂肪，绝经后体重超重；患某些慢性乳腺疾病，如导管上皮不典型增生、乳头状瘤病等；月经初潮年龄在12岁之前或停经在55岁之后；长期应用雌激素以控制更年期症状；一侧乳腺癌患者，对侧乳房生癌的机会比正常人高5～7倍。高危人群8/3/202123 “易感基因检测”项目，是评估个体对某种疾病的易感性。其特点是在人没发病时，从个体基因层面上预测疾病风险，预防将来会发生的疾病，防止肿瘤等疾病的发生、发展。一次检测，一生防护！ 肿瘤易感基因的筛查虽然不能完全避免肿瘤的发生，但是可以实现肿瘤的三早：早预防、早发现、早治疗。为什么要进行肿瘤易感基因筛查检测？临床研究表明，早期肿瘤绝大多数治愈率在90%以上，因此肿瘤易感基因筛查对高风险人群来说意义重大。 基因检测的好处是什么？出身于高危家族的人们生活在未知的恐惧中；阴性检测：可以带来极大的心理缓解作用；BRCA家族中的非携带者乳腺癌风险并不高于常人阳性检测：可以消除不确定性，让人们决定自己的未来；阳性检测：可以采取干预措施，降低发病几率，提高健康水平、生活质量，延长寿命。8/3/202126 预测性基因检测能告诉您……精确的基因检测可以告诉你是否具有或者不具有某种疾病相关基因变异；如果你有了这种基因，还有各种外界因素会影响到这个基因的外显率，它们的综合效应才决定你是否真正发病；携带BRCA1易感基因妇女有80％的几率在65岁时发展成乳腺癌；她们的风险很高，但不是绝对的。8/3/202127 家族性肠癌的发病率下降了90%乳腺癌下降了70% 健康人群：拥有主动健康意识者；亚健康人群：1、生活节奏快，工作压力大，常常处于高度紧张状态者；2、有吸烟、酗酒等不良生活习惯者；肿瘤高风险人群：1、直系、旁系中有确诊肿瘤的患病者；2、从事于高危风险职业（如辐射、化工）者。肿瘤易感基因检测适用人群 外周血/骨髓标本按标准采集流程进行采集，采集时必须使用一次性收集管，一旦采集后不可分装：外周血：3~5ml，最小标本量1ml；抗凝剂：EDTA抗凝（紫头管）；室温或2~8℃保存与运输，样本不能冰冻，72小时内送达本实验室（条件允许者，请尽量在48小时内送达）。体检送检标本要求 30岁女性，既往体健，母亲为乳腺癌手术后患者；因担心母亲的乳腺癌会呈现家族性遗传，因此进行肿瘤易感基因检测筛查；实例分享检测结果为乳腺癌高风险基因BRCA1阳性；为验证检测结果，特采取其母亲的血液进行基因检测验证，同发现该易感基因的阳性结果，证实了母亲的乳腺癌会呈现家族性遗传，自身有高风险会患乳腺癌和/或卵巢癌。 受检者自身并未发生肿瘤，接下来怎么办？？ 预防性乳房或卵巢切除术降低BRCA携带者患癌症的风险？他莫昔芬辅助治疗可降低BRCA突变携带者乳腺癌风险？ 提供降低特定肿瘤患病风险的措施（如X线、CT、MR等定期随访）；在肿瘤发生的早期及时进行临床手段干预；给受检者提供有针对性的个体化治疗建议，提高受检者生活质量。具体措施： 健康亚健康临床早期临床疾病基因检测体检早期发现体检早期发现趋势预测环境因素易感基因时间轴线 芳香化↓芳香化酶雄烯二酮雌二醇× 尿液蛋白质检查 一、尿液微量白蛋白的测定健康人的尿液白蛋白一般小于20mg/L,大于30mg/L时即提示异常。定义：微量白蛋白是指尿中白蛋白含量超过健康人水平，但常规尿蛋白试验为阴性的低浓度白蛋白。检测方法：染料结合法、放射免疫分析、酶联免疫吸附、免疫比浊分析、胶体金纸片 报告方式：定时留尿法（μg/ml;mg/24h)晨尿法(mg/L)随机留尿法(mg/mmolCr;mg/gCr)国际上以尿白蛋白排泄率>20mg/L或尿总蛋白>30mg/24h作为尿微量白蛋白的临界值。 临床意义：尿微量白蛋白在糖尿病肾病中的应用尿微量白蛋白在心血管疾病中的应用尿微量白蛋白在炎症方面的应用其他 二、Bence-Jonesprotein：实质是免疫球蛋白轻链或其聚合物，单聚体分子量为2.3万。凝溶蛋白：pH4.5~5.5，56℃条件加热出现白色混浊及凝固，100℃煮沸以后混浊消失或明显减退，再冷却时又可重新凝固。蛋白电泳时可在α2至γ球蛋白区带间的某个部位出现M区带。 检测方法：对甲苯磺酸沉淀筛选实验：灵敏度3mg/L热沉淀法验证乙酸纤维素膜电泳或者聚丙烯酰胺凝胶电泳：M带免疫固定电泳：区带电泳分离蛋白后，立即将浸有特异抗L链血清的薄膜条直接放到预计出现异常蛋白带的位置上，使之产生抗原抗体的复合物反应。免疫扩散实验：用特异的L链血清进行免疫扩散实验。临床意义：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症 三、β2-microglobulin性质：一种低分子量的蛋白质（1.18万），是细胞膜上完整组织相溶性抗原HLA的一部分。检测方法：放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）参考值:血β2-M<3.0mg/L尿β2-M<0.2mg/L临床意义：肾小管疾病、血清β2-M异常增高 四、尿液血红蛋白、肌红蛋白及其代谢产物检查1.hemoglobin正常人血浆中游离血红蛋白与珠蛋白结合，以复合物的形式运转至单核-巨噬细胞系统被代谢，不能从尿液中排出。疾病时尿液中血红蛋白有两个来源：1.发生血管内溶血，超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋白从尿液中排出。2.尿路（尤其是上尿路）出血，红细胞在低渗或者高渗的环境下破坏逸出的血红蛋白。 检测方法：试纸法：利用血红蛋白中亚铁血红素具有类过氧化物酶作用，在邻联甲苯胺等供氢体存在下，使过氧化物还原为水，而邻联甲苯胺被氧化成有色物质。免疫测定方法：利用抗人血红蛋白单克隆抗体临床意义：血管内溶血泌尿道出血 2.myoglobin肌红蛋白是横纹肌、心肌细胞内的一种含亚铁血红素的蛋白质，分子量小，易通过肾小球。测定方法：纸片法：原理与血红蛋白测定类似。肌红蛋白能溶于0.8饱和度的硫酸铵溶液中免疫法：利用单克隆抗体ELISA、 3.hemosiderin当发生血管内溶血时，大部分血红蛋白随尿排出，其中一部分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收后在肾小管上皮细胞内分解形成血铁黄素，再随细胞脱落至尿中排出。检测方法：Prussian反应，当尿中含有铁血黄素时，其中高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下，产生蓝色的亚铁氰化钾沉淀。注意事项：1.避免铁污染；2.清晨第一次尿阳性率较高临床意义：血管内溶血、行进性血红蛋白尿。 4.porphyrinδ-氨基酮戊酸、卟胆原尿卟啉粪卟啉原卟啉+Fe血红素卟啉尿是指尿中排出过多的卟啉或者其前体测定方法：酸萃取后，紫外线进行检测临床意义：先天性卟啉病、肝性卟啉病 五、Tamm—HorsfallproteinTH蛋白由Henle袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔基复合体产生，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型的一种重要蛋白。检测方法：酶联免疫吸附法、放射免疫法临床意义：协助诊断上尿路疾患有助于泌尿系统结石形成机制的研究。 六、尿液酶测定尿液酶的来源：血液的酶：淀粉酶、溶菌酶肾实质的酶：肾小管刷状缘（γ-GT、AAP、LAP、ALP、α-GLU）、溶菌体（NAG、ACP、β-葡萄糖醛酸苷酶）、胞浆（LDH）及线粒体（AST）尿路及生殖系统的酶：前列腺（ACP、NAG）、精液（LDH、hyaluronicacid）、肿瘤细胞 尿液酶测定时尿液标本的处理方法：尿液通常为弱酸性，且蛋白质浓度较低，不利于尿酶活力的保存，因此必须及时测定和处理。大部分尿酶活性比血浆酶活性低，在测定时适当加大标本用量或延长酶作用时间。尿液中含有较高浓度的低分子物质，如尿素、尿酸、肌酐、硫酸盐、磷酸盐等，他们可能是某些酶的抑制剂，因此必须对尿液标本进行预处理：超滤法、透析法、凝胶过滤法 1.N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β–D-glucosaminidase,NAG）NAG是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，存在于所有组织中，以前列腺和肾近球肾小管溶酶体含量最高。临床应用：各种肾脏疾病：急慢性肾功能不全、肾病综合症肾移植排斥反应：早期诊断药物性肾损害：其他系统疾病：糖尿病肾病、高血压肾病 2.α-葡萄糖苷酶（α-glucosdiase,α-GLU）α-GLU主要存在于肾小管上皮细胞刷状缘，在血清中的含量极低，且分子量大（9万），不易通过肾小球，因而尿中的α-GLU主要来自肾小管上皮细胞。测定：用麦芽糖做底物，经α-GLU的水解作用生成葡萄糖，再用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成率。临床意义：肾小管损伤的敏感指标 3.谷氨酰转移酶（γ-glutamyltransferase，γ-GT）γ-GT广泛存在于人体各组织中，以肾、肝、胰等组织含量最高。尿中γ-GT浓度较高，原尿无需预先浓缩。用γ-谷氨酰对硝基苯胺做底物，测定游历的对硝基苯胺量。临床意义：γ-GT常作为药物性肾损害的诊断指标。γ-GT在急性肾炎、肾盂肾炎、肾结石时升高γ-GT在慢性肾衰、肾癌时降低。'