最新核酸凝胶电泳实验课件PPT.ppt 21页

'核酸凝胶电泳实验 影响核酸电泳的因素：1．核酸的性质2．凝胶孔径的大小3．电场强度和电场方向4．电泳环境缓冲液的组成和离子强度直接影响迁移率。 核酸电泳的指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种：⑴溴酚蓝⑵二甲苯青， 【实验材料】1．电泳仪。2．电泳槽。3．紫外透射仪。4．试剂 【实验方法】1．琼脂糖凝胶板的制备将1～2%琼脂糖凝胶加热溶化均匀，冷却到60～70℃加EB至浓度0.5μg/ml，倒入封好的凝胶槽，厚度约3～5mm，在距底板0.5～1mm的位置放置样品梳，检查梳子齿间有无气泡，可用吸管小心吸出气泡，待冷却成形后取出梳子及隔板，放入水平电泳槽中，缓冲液淹没过胶1～2mm为止。2．加样样品中加1/5体积的上样缓冲液，混匀，取10～15μl加入凝胶点样孔中，同时要设立合适的DNA相对分子质量标准物。3．电泳电压＜10V/cm，电泳至溴酚蓝移出样品槽到凝胶板的2/3距离时，关闭电源。4．取出凝胶块，置紫外透射反射分析仪上观察，即可见桔红色DNA区带。 【实验思考】1．影响DNA片段琼脂糖电泳有哪几个因素？操作DNA琼脂糖凝胶电泳时为何要戴手套？2．DNA片段琼脂糖电泳操作应注意哪些问题？ 一、直线与直线的方程1．直线的倾斜角和斜率直线的倾斜角和斜率都是确定直线方向的基本概念．(1)任何直线都有倾斜角，其范围是0°≤α<180°，当α＝0°时，直线与x轴平行或重合；当α＝90°时，直线与x轴垂直． (2)并不是任何直线都有斜率．①利用斜率k与倾斜角α的关系：k＝tanα(α≠90°)；求直线斜率的方法当α≠90°时，直线才存在斜率．②利用斜率公式： 2．直线的方程(1)直线方程有五种形式，它们之间可以相互转化. 续表 3．两直线的位置关系(1)设直线l1：y＝k1x＋b1，l2：y＝k2x＋b2，则①k1≠k2⇔l1与l2相交；②k1＝k2且b1≠b2⇔l1与l2平行；③k1＝k2且b1＝b2⇔两直线重合；④k1k2＝－1⇔两直线垂直． (3)直线系方程①平行于Ax＋By＋C＝0的直线系方程是Ax＋By＋C′＝0(C′≠C)，②垂直于Ax＋By＋C＝0的直线系方程是Bx－Ay＋C′＝0，③过两直线A1x＋B1y＋C1＝0和A2x＋B2y＋C2＝0的交点的直线系方程为A1x＋B1y＋C1＋λ(A2x＋B2y＋C2)＝0. 例3.过点M（-2，1），且与A（-1，2），B（3，0）两点距离相等的直线y-1=0或x＋2y＝0. 练.过点M（1，2），且与A（2，3），B（0，-5）两点距离相等的直线x-1=0或4x-y-2＝0. 3x-2y-3=0例4.求直线l1：3x-2y-1＝0关于点（2，2）对称的直线l2.'