最新Hitachi-S-4800-型扫描电镜简易操作指南解析课件PPT.ppt 65页

'Hitachi-S-4800-型扫描电镜简易操作指南解析 注意！本文件的目的在于帮助用户记忆培训的内容，不能代替培训。有意自己操作扫描电镜的用户请到现场参加培训。为了把此文件的篇幅限制在一个合理程度，文件内容难于面面俱到。欢迎各位对本文件的内容提出宝贵意见！ S－4800扫描电镜外观 S－4800扫描电镜的基本操作过程启动操作程序PC－SEM观察样品加载样品加高压及条件设定调节电子光学系统记录图像SEM数据管理器图像处理取出样品刻录光盘结束操作 1、启动操作程序PC－SEM打开显示器Display的开关；系统启动，要求输入系统的用户名和密码；核实用户名和密码后，电镜操作程序PC－SEM自动启动，要求输入程序的用户名和密码；核实用户名和密码后，电镜操作程序打开。 2、加载样品1）将样品装在样品托（specimenstub)上（1）根据样品大小选择合适尺寸的样品托（15mm,1inch,1.5inch,2inch）；（2）用碳导电胶带或银导电胶将样品粘在样品托上。注意：(a)对于不导电或导电性不好的样品，需要进行喷金等的导电处理；(b)当在较高倍率下观察时（大于等于10万倍），建议使用银导电胶，可以防止样品漂移；用了导电胶的样品需要用台灯烤干或用吹风机吹干后再插入样品室。 2、加载样品2）将样品托装在样品架（specimenholder）上（1）把样品托安装在样品架的顶端；（2）调整样品的高度，使得样品的上表面与样品高度计的下面尽量相平。注意：(a)取放样品操作时必须带手套以减少污染；(b)必须使用样品高度计调节样品的高度，使WD与Z尽量保持一致，这样不仅操作性好，而且有利于保护仪器和样品。(c)注意调节螺杆（adjustingscrew）不要从样品架底座下面伸出来，这样会造成机械故障。 2、加载样品3）将样品架插入样品室插入样品之前需要确认：(a)样品台的位置处于交换位置，并且没有处于锁定状态（Lock开关的灯不亮）(b)加速电压处于OFF状态（1）按交换室操作部分的AIR键，使交换室放气；（2）峰鸣器响后（对应键的灯不闪），将交换室打开；（3）轻轻推入交换棒，此时保证交换棒后端的旋钮处于UNLOCK状态；（4）用一只手拿着交换棒的旋钮，另一只手将样品插入交换棒中； 2、加载样品（5）按逆时针方向旋转交换棒的旋钮到LOCK状态，然后将交换棒完全拉出；（6）关闭交换室，按EVAC键，交换室抽真空；（7）峰鸣器响后，按OPEN键，打开样品室与交换室之间的门（气阀）；（8）峰鸣器响后，一边探视里面，一边将样品架充分地插入样品台的槽中（交换棒推到底）；（9）按顺时针方向旋转交换棒至UNLOCK位置，卸下样品，然后将交换棒完全拉出；（10）按CLOSE键，气阀关闭。 3、加高压及条件设定1）设定样品尺寸点击STAGE设定键，在SPECIMEN窗口画面，点击SET键，设定样品的尺寸。2）设定加速高压和发射电流点击加速电压显示部分，设定所需要的加速电压和发射电流。发射电流一般设为10A3）加高压点击ON键，出现确认样品尺寸对话框，确定后，开始自动加电压 3、加高压及条件设定4）条件设定（1）选择图形信号及探测器类型：SE,BSE（2）设定工作距离WD（3）设定高度ZZ与WD密切相关，它们设定的先后顺序并不重要，最终目的是在Z与WD的允许范围内使图像聚焦清楚。为安全起见，本机高度Z应在3mm以上（范围3－30）。 4、调节电子光学系统加高压后即可寻找感兴趣的区域观察图像了。为了获得高质量的图像，通常要进行电子光学系统的调节，也称为合轴或对中(Alignment)。（1）点击ALIGN键，出现合轴画面（2）主要的合轴有：a.电子束合轴：BeamAlign目标：把光圈调到中心b.物镜光栏合轴：ApertureAlign目标：把图像晃动量调到最小c.象差校正合轴：StigmaAlignX，Y目标：把图像晃动量调到最小（3）操作：调节操作面板的STIGMA/ALIGNMENTX和Y 5、观察样品（1）移动样品可以通过操作面板上的滚动球来实现，在低倍下寻找感兴趣的区域，然后到合适的放大倍数观察和记录图像（2）亮度和对比度调节使用操作面板上的BRIGHT和CONTRAST旋钮，或点击ABCC进行自动调整（3）聚焦样品使用操作面板上的FOCUS，包括粗调COARSE和微调FINE（4）校正象散使用操作面板上的STIGMA/ALIGNMENT（不在Align窗口时） 6、记录图像1）捕捉并保存可以在任一种扫描模式（TV，FAST，SLOW）下记录图像，每一种模式又包括几种条件，可以在拍照前具体设定。设定好后，先点击所需要的扫描模式，然后按CAPTURE键。捕捉只是指将图像暂时保存在CapturedImage中，选中需要保存的图像，然后点击SAVE按钮，会出现一个对话框，可以设定图片被保存的位置及文件名称、类型等信息。可以选中所有的图片进行全部保存。 6、记录图像2）直接保存点击工具栏的SAVE按钮，可以将显示的图像冻结并直接保存至硬盘。 7、图像处理如果需要，可以对图像进行处理。点击UTILITY设定键，在Signalprocessing窗口画面，可以选择Smoth,Sharpen,EdgeEnhance等选项。 8、SEM数据管理器对于已保存的图像，可以使用SEM数据管理器（SEMDataManager）功能进行管理，包括检索、显示、图像处理、编辑、打印等。 9、取出样品1）点击加速电压显示部分的OFF键，关闭加速电压2）确认样品台没有处于锁定状态，使样品台位置回到交换位置，操作顺序：先手动调整T（0）和Z（8mm）,然后点击HOME,使X,Y,R回到交换位置。3）按交换室操作部分的OPEN键，峰鸣器响后，交换室与样品室之间的气阀被打开4）确认交换棒处于UNLOCK状态，完全推入交换棒，按逆时针方向旋转交换棒的旋钮锁住样品架（LOCK）5）把样品交换棒完全拉出，按CLOSE键，关闭气阀6）按AIR键，使交换室放气7）峰鸣器响后，打开交换室，轻轻推出交换棒，按顺时针方向UNLOCK样品架，将样品架取下8）将交换棒完全拉出，关闭交换室，按EVAC键，使交换室抽真空 10、刻录光盘本机提供的唯一数据拷贝方式是刻录光盘，请大家自己准备光盘。 11、结束操作1）关机操作点击S-4800主窗口的关闭键，或从FILE菜单选择EXIT，退出程序，然后关闭Windows，最后关闭显示器的Display开关。2）实验记录操作结束后，请认真填写实验记录并清理样品托及桌面。 观测条件的选择1、加速电压的选择从电子光学的角度讲，随着加速电压的升高，电镜的分辨率也提高，但是电压越高，电子束在样品中扩散范围就越大，同时放电和辐照损伤现象也越严重。因此要根据样品的种类及所要得到的信息，适当地选择加速电压。对于导电性好的样品，可以选择较高的加速电压；相反，对于导电性较差的样品，则应选择较低的加速电压。 观测条件的选择2、工作距离（WD）的设定WD(workingdistance)是指物镜下端面到焦点面之间的距离。WD越小，图像的分辨率越高，而景深越浅。做能谱时，WD必须设定为15mm。 观测条件的选择3、探测器的选择S－4800配备有上下两个二次电子探测器，在WD较小时(<5)，推荐使用上探测器，在WD较大时(>10)，推荐使用下探测器。如果选择MIX，则同时使用两个探测器，在整个WD的可变范围内，信号量不会发生极端的变化。 观测条件的选择4、信号选择SE信号分辨率高，有利于得到表面信息，但是易受放电的影响，而且图像的边缘对比度有时过强。低角度背散射电子BSE－L信号能反应组分信息，而且受放电的影响小，图像的边缘对比度弱。在成像时引入一定比例的BSE－L信号，可以抑制放电的影响和尖锐边缘过强的亮度。BSE－H信号应用比较有限。 图像记录方式的选择采用慢扫描的方式能够提高图像的信噪比，从而提高图像的质量，因此通常采用慢扫描方式记录图像。但是扫描速度越慢，样品的放电现象越显著。所以，如果样品放电现象比较严重，不能采用慢扫描方式记录图像，这时可以采用多次快速扫描叠加的方式记录图像，同样可以提高信噪比。但是对于漂移明显的样品无法采用这种技术。对于既放电又漂移的样品，采用单次快速扫描的方式反而可以获得最高质量的图像。 样品台样品台以通过其表面中心的法线为轴做平面内旋转，是靠马达驱动的（自动）。样品台旋转Rotation——R(360°连续) 样品台旋转Rotation——REucentric：当选中时，表示样品台旋转后，观察区域仍然保持在当前位置。Abs：绝对角度正值0~360°Rel：相对角度（始终以当前位置为0）可以输入正值0~360°(顺时针)负值0~-360°(逆时针) 光栅旋转RasterRotation——R.Rotation(360°连续)通过旋转电子束的扫描方向，实现对图像的旋转，样品台并没有旋转。 样品台倾转Tilt——T样品台以其平面内的一个特定方向的直径为轴做倾转，是手动的。样品台（俯视）显示器正方向倾转正方向倾转 样品台倾转Tilt——T倾转范围与样品台尺寸及高度z有关最大倾转范围：-5°~70°倾转操作之前必须计算当前条件下允许倾转的范围Tilt/Zcalculation:设定样品台尺寸(加高压前设定）PriorityZ:计算在给定的高度Z下样品台可以倾转的范围PriorityT:计算在给定的倾转角度T下高度Z的允许范围倾转操作：手动调节 样品台倾转Tilt——T倾转注意：a)千万不要超过允许的倾转范围，为了安全起见，不要倾转到极限，应留有一定的余量（至少1°）b)如果进行了倾转操作，当结束操作后使样品台回到交换位置时，一定要先把T调回到0，然后再调Z到8mm。 减速功能本机附加减速功能，通过在样品表面施加与加速电压相反方向的电压，使到达样品表面的电子发生减速，抑制电荷积累现象，适合对不导电样品的高分辨率观察。 Weareatyourservice! 急性肺栓塞的诊治进展2009 ESC急性肺栓塞诊治指南2008中国急性肺血栓栓塞症诊断治疗专家共识2009 基本概念易患因素诊断策略溶栓指征如何抗凝抗凝疗程腔静脉滤器植入指征 基本概念肺栓塞(pulmonaryembolism，PE)是内源性或外源性栓子阻塞肺动脉引起肺循环障碍的临床和病理生理综合征，包括肺血栓栓塞症、脂肪栓塞综合征、羊水栓塞、空气栓塞、肿瘤栓塞等。肺血栓栓塞症(pulmonarythromboembolism，PTE)是指来自静脉系统或右心的血栓阻塞肺动脉或其分支所致疾病，以肺循环和呼吸功能障碍为主要临床表现和病理生理特征，占肺栓塞的绝大多数，是最常见的肺栓塞类型，通常所称的PE即指PTE。肺梗死(pulmonaryinfarction，PI)定义为肺栓塞后，如果其支配区域的肺组织因血流受阻或中断而发生坏死。 基本概念大块肺栓塞(massivepulmonaryembolism)是指肺栓塞2个肺叶或以上，或小于2个肺叶伴血压下降(体循环收缩压＜90mmHg，或下降超过40mmHg/5分钟)。次大块肺栓塞(submassivepulmonaryembolism)是指肺栓塞导致右室功能减退。 基本概念深静脉血栓形成(deepvenousthrombosis，DVT)是引起PTE的主要血栓来源，DVT多发于下肢或者骨盆深静脉，脱落后随血流循环进入肺动脉及其分支，PTE常为DVT的合并症。静脉血栓栓塞症(venousthromboembolism，VTE)由于PTE与DVT在发病机制上存在相互关联，是同一种疾病病程中两个不同阶段的不同临床表现，因此统称为VTE。 静脉血栓栓塞易患因素易患因素患者相关环境相关强易患因素（OR＞10）骨折（髋部或腿）髋或膝关节置换普外科大手术大创伤脊髓损伤弱易患因素（OR＜2）卧床＞3天久坐不动（如长途车或空中旅行）年龄增长腹腔镜手术（如胆囊切除术）肥胖怀孕/产前静脉曲张易患因素患者相关环境相关中等易患因素（OR2－9）膝关节镜手术中心静脉置管化疗慢性心衰或呼衰激素替代治疗恶性肿瘤口服避孕药治疗中风发作怀孕/产后既往下肢静脉血栓血栓形成倾向 诊断流程临床诊断评价评分表>4分为高度可疑，≤4分为低度可疑分值DVT症状或体征3PE较其它诊断可能性大3心率>100次/分1.54周内制动或接受外科手术1.5既往有DVT或PE病史1.5咯血16月内接受抗肿瘤治疗或肿瘤转移1 诊断流程疑诊肺栓塞病史、体格检查、血气分析、胸片、心电图临床判断评价≤4分临床判断评价＞4分D-Dimer高CT肺动脉造影正常排除肺栓塞阳性诊断肺栓塞正常排除肺栓塞 急性肺栓塞治疗 2000年ESC急性肺栓塞临床分型大面积肺栓塞（massivePTE)：临床上以休克和低血压为主要表现，即体循环动脉收缩压<90mmHg或较基础值下降幅度>40mmHg,持续15分钟以上。须除外新发生的心律失常，低血容量或感染中毒症所致血压下降。非大面积肺栓塞（non-massivePTE)：不符合以上大面积肺栓塞标准的肺栓塞。次大面积肺栓塞（submassivePTE)：非大面积肺栓塞患者伴有右心室运动功能减弱或出现右心功能不全的表现。 2008年新版指南取消临床分型，代之以危险分层。原因：急性肺栓塞严重程度与肺动脉内血栓的形态、分布和血栓量的多少不呈平行关系。急性肺栓塞的严重程度与急性肺栓塞早期（住院或发病后30天）死亡危险程度密切相关。 急性肺栓塞危险分层的主要指标危险分层指标临床表现休克低血压(收缩压<90mmHg，或血压下降超过40mmHg持续15min)右室功能不全征象超声心动图提示右室扩张、压力超负荷CT提示右室扩张右心导管检查提示右室压力过高脑钠肽(BNP)或N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)升高心肌损伤标志TnI或TnT阳性 a:当出现低血压后休克时就不需要评估右心功能和心肌损伤情况。肺栓塞死亡危险休克或低血压右室功能不全心肌损伤推荐治疗高危(>15%)＋aa溶栓或肺动脉血栓摘除术－＋＋中危(3%~15%)－＋－住院治疗－－＋低危(<1%)－－－早期出院或门诊治疗急性肺栓塞危险分层 基于危险度分层制定急性肺栓塞治疗策略急性肺栓塞危险度分层临床评价肺栓塞范围肌钙蛋白、脑钠肽、N末端脑钠肽前体右室功能低危高危抗凝治疗溶栓或肺动脉血栓摘除术＋抗凝治疗 2008年溶栓建议心源性休克及/或持续低血压的高危肺栓塞患者，如无绝对禁忌证，溶栓治疗是一线治疗。高危患者存在溶栓禁忌时可采用导管碎栓或外科取栓。导管内溶栓与外周静脉溶栓效果相同。对非高危(中危、低危）患者不推荐常规溶栓治疗。对于一些中危患者全面权衡出血获益风险后可给予溶栓治疗。低危患者不推荐溶栓治疗。 溶栓治疗时间窗溶栓时间窗通常在急性肺栓塞发病或复发后2周以内，症状出现48小时内溶栓获益最大，溶栓治疗开始越早，疗效越好。 溶栓药物及溶栓方案尿激酶：4400IU/Kg静脉负荷量10min，继以4400IU/Kg/h维持12-24小时快速给药：300万IU（2万IU/kg）静点2hrt-PA：50－100mg静点2小时或0.6mg/Kg静点15分钟（最大剂量50mg）尽管尿激酶和rt-PA两种溶栓药物12小时疗效相当，但rt-PA能够更快发挥作用，降低早期死亡率，减少血栓在肺动脉内停留时间而造成的肺动脉内皮损伤，以及减少血栓附着在静脉瓣上的时间，从理论上讲可以降低远期慢性血栓栓塞性肺高压及下肢深静脉瓣功能不全后遗症的发生危险，因此推荐首选rt-PA方案。 急性肺栓塞溶栓治疗禁忌证绝对禁忌证任何时间出血性或不明原因的脑卒中6个月内缺血性脑卒中中枢神经系统损伤或肿瘤3周内大创伤、外科手术、头部损伤近一月内胃肠道出血已知的活动性出血相对禁忌证6个月内短暂性脑缺血发作口服抗凝药妊娠或分娩1周内不能压迫的血管穿刺创伤性心肺复苏难治性高血压(收缩压>180mmHg)晚期肝病感染性心内膜炎活动性消化性溃疡 抗凝治疗急性肺栓塞初始抗凝治疗的目的是减少死亡及再发栓塞事件。急性肺栓塞患者长期抗凝治疗的目的是预防致死性及非致死性静脉血栓栓塞事件。 抗凝治疗怀疑急性肺栓塞的患者等待进一步确诊过程中即应开始抗凝治疗。高危患者溶栓后序贯抗凝治疗。中、低危患者抗凝治疗是基本的治疗措施。常用的抗凝药物非口服抗凝药：普通肝素、低分子量肝素、磺达肝素（Arixtra）口服抗凝药：华法林、利伐沙班（拜瑞妥）。阿司匹林和波立维不推荐应用于治疗静脉血栓。 抗凝治疗普通肝素应用指征血流动力学不稳定的高危肺栓塞患者（因为目前一些比较普通肝素和低分子量肝素的抗凝效果和安全性的临床试验中并不包括这些高危患者）。肾功能不全患者（因普通肝素经网状内皮系统清除，不经肾脏代谢）。高出血风险患者（因普通肝素抗凝作用可迅速被中和）。对其他急性肺栓塞患者，低分子量肝素可替代普通肝素。磺达肝癸钠与低分子量肝素具有同样的抗凝效果,且无需监测。 抗凝治疗常用的普通肝素给药方法是静脉滴注，首剂负荷量为80U/kg（一般2000－5000U)，继之700～1000U/h或18U/kg/h维持。用普通肝素治疗需要监测激活的部分凝血活酶时间（APTT）,APTT至少要大于对照值的1.5倍（通常是1.5倍～2.0倍）。使用低分子肝素一般情况下无需监测。但对肾功能不全的患者需谨慎使用低分子量肝素，并应根据抗Ⅹa因子活性来调整剂量，当抗Ⅹa因子活性在0.6~1.0IU/ml范围内推荐皮下注射每日2次，当抗Ⅹa因子活性在1.0~2.0IU/ml范围内推荐皮下注射每日1次。 根据体重调整普通肝素用量的“Raschke”方案APTT肝素剂量的调节秒控制倍数首剂负荷量80IU/kg,随后18IU/(kg.h)维持<35<1.280IU/kg静脉推入,然后增加4IU/(kg.h)36451.21.540IU/kg静脉推入,然后增加2IU/(kg.h)46701.52.3维持原剂量71902.33.0将维持量减少2IU/(kg.h)>90>3.0停药1h,随后减量3IU/(kg.h)继续给药 低分子量肝素和磺达肝癸钠给药方案药物剂量间隔时间Enoxaparin1.0mg/kg每12h一次（克赛）or1.5mg/kg每天一次Tinzaparin175U/kg每天一次（亭扎肝素）Fondaparinux5mg(体重50kg)每天一次（磺达肝素）7.5mg(体重50–100kg)10mg(体重100kg) 抗凝治疗肝素需与华法林重叠使用，直到INR达标（2.0－3.0）2天后再停用肝素。最常用口服药物为华法林，对于年轻患者或者既往健康的院外患者而言，起始剂量通常为10mg；而对于老年及住院患者，起始剂量通常为5mg，（国人：起始剂量为2.5～3.0mg/d）以后根据国际标准化比值（INR）调整剂量,长期服用者INR宜维持在2.0～3.0之间。 抗凝治疗时程急性肺栓塞的抗凝时间长短应个体化，一般至少需要3个月。如果急性肺栓塞（0.5％－5％患者）发展成慢性血栓栓塞性肺动脉高压者应长期抗凝治疗。如果急性肺栓塞治疗成功，症状基本消失，无右心压力负荷，影像学检查肺栓塞基本消失者应根据血栓形成的诱发因素类型决定抗凝时程。 抗凝治疗时程由暂时或可逆性诱发因素（服用雌激素、临时制动、创伤和手术）导致的肺栓塞患者推荐抗凝时程为3个月。对于无明显诱发因素的首次肺栓塞患者（特发性静脉血栓）建议抗凝至少6个月，对于再次发生的无诱发因素的肺栓塞患者建议长期抗凝。对于静脉血栓栓塞危险因素长期存在的患者应长期抗凝治疗，如癌症患者、抗心脂抗体综合征、易栓症等。 下腔静脉滤器植入适应证肺栓塞合并抗凝治疗禁忌或抗凝治疗出现并发症者充分抗凝治疗后肺栓塞复发者高危患者的预防：①广泛、进行性静脉血栓形成；②行导管介入治疗或肺动脉血栓剥脱术者；③严重肺动脉高压或肺心病者。因滤器只能预防肺栓塞复发，并不能治疗DVT，因此安装滤器后如无抗凝禁忌仍需抗凝，防止进一步血栓形成。'