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'抗生素类药物分析汇编 细菌感染疾病治疗中常用的抗生素:β-内酰胺抗生素（青霉素、头孢霉素）四环素类（四环素、土霉素、金霉素）及氯霉素类抗生素（氯霉素、甲砜霉素）大环内酯类抗生素等（红霉素、阿奇霉素）氨基糖甙类抗生素（链霉素、庆大霉素） β-内酰胺抗生素β-LactamAntibiotics⒈结构β-内酰胺环：四原子内酰胺环的抗生素 青霉素G注射用青霉素是青霉素G（benzylpenicillin）的钠盐，不能口服，因为胃中强酸会导致酰胺侧链水解和β-内酰胺环开环而失去活性。青霉素G钠外观：白色结晶性粉末；无臭或微有特异性臭；有吸湿性；遇酸碱或氧化剂等即迅速失效。溶解性：在水中极易溶解，在乙醇中溶解，在脂肪油或液体石蜡中不溶。 药物的性质酸性：有机酸（pKa2.65～2.70）旋光性：青霉素家族分子都有三个手性碳原子，头孢家族有两个紫外吸收特性：头孢家族有共轭的母环，青霉素家族一般有苯环取代基β-内酰胺环不稳定：四元内酰胺环，张力比较大 鉴别试验呈色反应：与羟胺作用生成羟肟酸，与铁离子呈色。类似于肽键反应，双缩脲反应和茚三酮反应钾钠离子的焰色反应普鲁卡因青霉素有芳伯氨基，可以发生重氮化-偶合反应，生成红色染料沉淀。光谱法：包括红外吸收光谱（IR)和紫外吸收光谱(UV)色谱法:与对照品的高效液相色谱（HPLC)和薄层色谱(TLC)的保留时间和比移值一致 特殊杂质的检查内源性过敏原：可能来自于生产、贮存和使用过程中β-内酰胺环开环自身聚合，生成的高分子聚合物（青霉素过敏的原因）。外源性过敏原：主要来自β-内酰胺抗生素在生物合成时带入的残留量的蛋白质多肽类杂质。有关物质和异构物：使用液相色谱，以样品加流动相稀释后作对照品检查。 含量测定碘量法：采用剩余碘量法测定，以标准对照法计算含量。电位配位滴定法：青霉素碱水解产物可以与二价金属离子形成配合物，故采用碱水解后用硝酸汞进行滴定。紫外可见分光光度法：青霉烯酸在320nm~360nm有强吸收，外标法测吸光度。高效液相色谱法：发展最快的分析方法，使用反相的HPLC法，以外标法作标准曲线计算含量。 氯霉素Chloramphenicol【外观】氯霉素为白色或者微带黄绿色的针状，长片状结晶或结晶性粉末，味苦，熔点149~152比旋度+18.5~+21.5，性质稳定，能耐热，水溶液在中性、弱酸性条件下比较稳定，强碱强酸下水解。D-苏型-（-）-N-[α-β-羟基-对硝基苯乙基]-2,2-二氯乙酰胺 氯霉素Chloramphenicol【鉴别】显色反应吸取供试品溶液、对照品溶液、空白溶液各1ml，加1%氯化钙溶液3ml与锌粉50mg，置水浴上加热10min，倾取上清液，加苯甲酰氯约0.1ml，立即强力振摇1min，加三氯化铁试液0.5ml与氯仿2ml,振摇。供试品溶液和对照品溶液水层均显紫红色，空白溶液水层未显紫红色。 氯霉素的杂质检查相关物质（氯霉素二醇物，对硝基苯乙酮）的检查残留溶剂（甲醛、乙醇）的检查 氯霉素Chloramphenicol【检查】有关物质（氯霉素二醇物，对硝基苯乙酮）用流动相定量稀释，作为供试品溶液；另取氯霉素二醇物对照品与对硝基苯乙酮对照品适量，用流动相溶解稀释成每1ml中含氯霉素二醇物5μg与对硝基苯乙酮5μg的混合溶液，作为杂质对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，含氯霉素二醇物不得过1.0%，含对硝基苯乙酮不得过0.5%。 氯霉素Chloramphenicol【检查】残留溶剂（甲醛、乙醇）高效液相色谱：加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液；另精密取甲醛、乙醇，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照残留溶剂测定法测定，使用紫外检测器，按外标法计算，含甲醛、乙醇应符合规定。毛细管色谱：柱温40-100，常以氮气为载气，采用火焰离子化检测器。 氯霉素Chloramphenicol【含量测定】高效液相色谱法测定用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-甲醇（68：32）为流动相；检测波长为277nm；用流动相定量溶解稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，纪录色谱图；另精密称取纯氯霉素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中C11H12Cl2N2O5的含量。还可以采用毛细管电泳和质谱联用(CE-MS)：氯霉素有两个氯原子，在质谱上具有较强的负离子响应。 四环类抗生素【定义】由放线菌产生的一类广谱抗生素包括金霉素、土霉素、四环素等盐酸四环素TetracyclineHydrochlorid【性状】本品为黄色结晶性粉末；无臭，味苦；略有引湿性；遇光色渐变深，在酸性条件下不稳定，碱性溶液中易破坏失效，可以与金属离子形成不溶的螯合物。 盐酸四环素TetracyclineHydrochlorid抗菌谱:四环素为广谱抗生素，用于G+和G-引起的感染抗菌机理：作用于30S亚基，抑制蛋白质的合成不良反应：消化道刺激，牙齿骨骼钙黄沉积结构特点：含有并四苯的基本结构 盐酸四环素TetracyclineHydrochlorid【鉴别】用薄层层析快速鉴别四环类抗生素pH为8.3的5%的EDTA-2Na溶液调制硅藻土G板为薄层固定相，以0.02mol/L的氢氧化钠的丙酮溶液为展开剂，将样品和对照品一起展开，通过计算比移值鉴别。与钙镁离子形成沉淀；与铁离子形成红色络合物；与铝离子形成黄色络合物。 盐酸四环素TetracyclineHydrochlorid【检查】有关物质（土霉素0.5%、4-差向四环素3.0%、盐酸金霉素1.0%、脱水四环素0.5%和差向脱水四环素0.5%）液相色谱法用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液（临用现配）,作为供试品溶液；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，按峰面积计算。 四环素无菌检查经薄膜过滤法处理后，用0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗，并配制成每1ml中含供试品30mg的供试品溶液，以大肠埃希菌作为阳性对照菌，培养两周，菌落数目应符合规定。 盐酸四环素TetracyclineHydrochlorid【含量测定】高效液相色谱法用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相用醋酸-乙腈（83:17）为流动相；紫外光度检测器，检测波长为280nm。取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸四环素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中C22H24N2O8·HCl的含量。 大环内酯类抗生素MacrolideAntibiotics一概述⒈简介由链霉菌产生的弱碱性抗生素（红霉素、阿奇霉素）。抗菌特点：对G+和某些G-、支原体作用强结构特征内酯结构的十四元或十六元大环通过内酯环上的羟基和去氧氨基糖或6-去氧糖缩合成碱性甙 红霉素Erythromycin一、结构和性质⒈来源红色链丝菌产生，包括A、B和C，三者的区别如下 ⒉组分通常指ErythromycinA杂质组分B和C----C的活性较弱，只为A的1/5，而毒性则为5倍，----B活性低，毒性大 ⒊性状白色或类白色的结晶或粉末；无臭，味苦，微有引湿性本品的水合物熔点为128℃，而无水物为193℃；易溶于甲醇、乙醇或丙酮，微溶于水；比旋度-71°～78°（20mg/ml,无水乙醇） ⒋结构特点碱性甙红霉内酯去氧氨基糖红霉糖红霉内酯环14原子大环无双键偶数碳上有六个甲基9位羰基 二、【鉴定】沉淀反应取本品10mg，加硝酸0.5ml使溶解，加水0.5ml，火焰加热（灼烧）2分钟，放冷，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀。 三、【杂质检查】--液相色谱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐溶液-乙腈（40：60）为流动相；波长为215nm。按红霉素C、红霉素A、红霉素B的顺序出峰。另取红霉素标准品适量，130℃加热破坏4小时，液相色谱分析。记录色谱图至红霉素A保留时间的5倍。按红霉素C、红霉素A、杂质1、红霉素B、红霉素烯醇醚峰的顺序出峰。杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（5.0%）。 四、含量测定—液相色谱分别加甲醇溶解，用磷酸盐缓冲盐（pH7.0）-甲醇（15︰1）定量稀释制成溶液，分别作为供试品溶液和标准品溶液；精密量取供试品溶液与标准品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中红霉素A的含量。药典规定：按无水物计算，不得少于88.0%。 氨基糖苷类抗生素一、概述二、化学结构三、理化性质四、鉴别试验五、杂质检查六、含量测定 一、概述代表药物：链霉素、卡那霉素、庆大霉素、巴龙霉素、硫酸奈替米星等制备方法：微生物发酵或半合成抗菌谱：G-菌和结核杆菌感染的首选药抗菌机理：抑制蛋白质的合成不良反应：耳毒性、可透过胎盘屏障结构特点：氨基醇-氧桥-氨基糖→氨基糖苷 二、化学结构链霉素庆大霉素 三、理化性质溶解性与碱性：碱性、水溶性抗生素旋光性：含有多个氨基糖具有旋光性紫外吸收光谱：链霉素在230nm有吸收,其它均无.苷的水解与稳定性：含有二糖胺结构的抗生素过酸或过碱条件下易水解失效。 四、鉴别试验方法：茚三酮反应、Molish试验、N-甲基葡萄糖氨反应、麦芽酚反应、坂口反应、硫酸盐反应、色谱法、光谱法等【实例】硫酸核糖霉素-薄层色谱取硫酸核糖霉素与其标准品适量，分别加水制成每1ml含核糖霉素10mg的溶液，取上述两种溶液等量混合，作为混合溶液吸取上述两种溶液各2µl,分别点于同一G薄层板上，用展开剂展开，晾干，喷以0.2%茚三酮水饱和正丁醇溶液，110。C加热10分钟。混合溶液所显示斑点应为单一斑点，供试品所显示斑点的应与对照品溶液或混合溶液主斑点的颜色和位置相同 五、杂质检查1、无菌检查（硫酸链霉素）取本品与0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml中含供试品2万单位的供试液，经薄膜过滤法处理，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液分次冲洗，（每膜不少800ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌按药典附录的无菌检查法操作。另取装量10ml的0.5%葡萄糖肉汤培养基6管，分别加入每1ml中含2万单位的溶液0.25～0.5ml，3管在30～35℃培养，另3管在20～25℃培养，应符合规定。2、硫酸盐检查容量法色谱法3、有关物质检查来源：菌种代谢产物或半合成时的中间体方法：色谱法薄层色谱（主要） 六、含量测定1、微生物检定法优点：成本低、适于推广使用缺点：影响因素复杂、操作费时，且测定的是总效价，不能分别测定主成分和相关组分或有关物质的含量。2、免疫法（体内药物监测）3、色谱法薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱法4、光谱法5、高效毛细管电泳法-质谱法其它：、核磁共振法、旋光法、量热法等 微生物法概念:通过检测抗生素对微生物的抑制作用，来计算抗生素活性的方法分类：管碟法和浊度法管碟法：利用抗生素在琼脂培养基的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小来测定供试品效价浊度法：利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小比较标准品与供试品对细菌生长的抑制程度以测定供试品效价操作：《中国药典》 衍生化法：利用氨基糖苷类抗生素结构中的活泼基团（氨基、羰基）与衍生化试剂形成紫外光区有吸收或有荧光的物质，以便于紫外检测或荧光检测。柱前衍生反相HPLC非衍生化法：HPLC-ELSD（蒸发光散射检测法）【实例】：HPLC-ELSD法测定核糖霉素的含量实验条件：色谱柱：AgelaTechnologiesVenusilASB-C1815nm(250mm4.6mm,5μm)；流动相：0.11mol/L七氟丁酸酐混合溶液；流速：0.8mL/min；采用蒸发光散射检测器漂移管温度：110℃，雾化气体流速：3.0L/min。测定方法：精密取核糖霉素对照品，分别加水溶解并定量稀释制成约含核糖霉素0.13、0.17和0.20mg/mL的溶液，作为对照品溶液(1)、(2)和(3)。精密量取上述3种溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品溶液浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算回归方程。另取本品适量，精密称定，用水溶解并定量稀释制成约含核糖霉素0.17mg/mL溶液，同法测定，用回归方程计算供试品中核糖霉素含量。 高效毛细管电泳法（HPCE）（1）由于毛细管直径小，使光路太短，用一些检测方法（如紫外吸收光谱法）时，灵敏度较低；（2）电渗会因样品组成而变化，进而影响分离重现性。质谱法（MS）（1）由于氨基糖苷类抗生素在结构中含有多个伯胺或仲胺基团显弱碱性,在质谱上具有较强的正离子响应。（2）质谱在检出峰的同时还能给出分子量和结构信息；应用：中药中掺杂抗生素、抗生素以次充好等情况的监测CE-MS联用技术：克服了CE中因光程而导致的紫外检测器灵敏度低的不足。是此类药物分析中最有前景的联用技术 光谱法原理：氨基糖苷类药物与金属离子、有机试剂或有些染料反应生成离子缔合物产生吸收。应用：注射溶液中氨基糖苷类药物含量测定优点：操作简便，仪器价廉，常见离子及氨基酸、糖类均不干扰测定缺点：有关物质影响较大，最好先做杂质限量试验文献报道：⑴紫外-可见分光光度法：酸性双偶氮染料曲利本红与此类药物反应后在紫外-可见光区有强烈吸收⑵原子吸收光谱法：与Co、Ni、Cu、Zn等金属离子配合后通过测定金属离子的含量来间接测定 结核病的预防与控制 结核病（Tuberculosis）是由结核分支杆菌感染引起的慢性传染病，可累及全身各个器官，引起肺结核、结核性胸膜炎、结核性脑膜炎、结核性腹膜炎和肠结核等，但以肺结核为常见。 一、病原学结核病的病原菌为结核分枝杆菌，通常又称结核杆菌，分为人型、牛型、非洲型和鼠型4类，对人有致病性的主要是人型。结核的免疫属于传染免疫，又称有菌免疫。即只有当细菌在体内存活时才有免疫力。 二、临床表现（一）临床表现咳嗽、咳痰≥2周，或咯血为肺结核可疑症状。（二）体征早期肺部体征不明显，当病变为大叶性干酪性肺炎时，局部叩诊浊音，听诊可闻及管状呼吸音，有空洞并感染或合并支气管扩张时，可闻及干或湿性啰音。（三）实验室检查1.涂片检测2.胸部影像学检查 （三）我国结核流行概况我国解放前结核病死亡率高达200～300/10万，居各种疾病死亡原因之首。随着人民生活水平卫生状况改善儿童普遍接种卡介苗结核病的发病率和死亡率下降 结核病仍然是目前威胁人类生命健康的三大传染性疾病之一。尤其是随着HIV/AIDS流行趋势日益严峻及结核分枝杆菌耐药株的不断增多，导致结核发病率和死亡率回升。据WHO报道，每年约有1000万新病例发生，至少300万人死于该病。 四、结核病的流行病学传染源：并非所有的结核病人都是传染源，仅痰涂片阳性的肺结核病人才是主要传染源。传播途径：主要通过排菌病人咳嗽传染，传染程度受排菌量、咳嗽症状和接触密切程度有关。易感者：未受过感染的人，即OT（-），大多数是儿童。易患者：指人群中某些易患结核病的人，如矽肺病人、糖尿病人、胃切除者、正在用皮质激素治疗或抗癌药物治疗者，这些人过去曾感染过结核，结核菌素试验反应阳性，因罹患上述某一种病而使免疫力明显降低，使体内潜伏的结核杆菌又重新繁殖复燃而发病。 五、免疫预防 （一）卡介苗简介1882年德国科赫发现结核病的病原菌是结核杆菌-----1896年正式命名为结核分枝杆菌。1891年，Koch氏现象的发现提示可以用人工免疫的方法来促使机体对结核病产生免疫力。1907年卡美特介云中国1978年纳入儿童计划免疫卡介苗巴斯德理论培养、减毒 （二）免疫程序及补种原则免疫程序：卡介苗接种的主要对象是新生婴幼儿。卡介苗接种被称为“出生第一针”，所以在产院、产科出生的新生儿一出生就应接种。补种原则：未接种卡介苗的3月龄以下儿童可直接补种，3月龄～3岁儿童对结核菌素（PPD）试验阴性者可补种，4岁以上儿童（含4岁）不予补种。已接种卡介苗的儿童，即使卡痕未形成也不再予以补种。 结核菌素试验结核菌素试验是应用结核杆菌素来测定机体对结核杆菌是否有过敏反应的一种皮肤试验，亦即判定患者是否受过结核杆菌感染的一种方法。常用的结核杆菌素有两种，一种为旧结核菌素（Old-tuberculin，OT），它含有甘油和其他杂质，可引起非特异性反应。使用较多的纯蛋白衍生物的结核菌素（PPD）亦由结核杆菌培养液制成，因杂质少，无非特异性反应。 试验方法是皮内注射法，以PPD5个单位注射于左前臂内侧皮内，使局部形成皮丘，48～72小时观察反应。红肿硬结者超过5mm为阳性，≥15mm为强阳性。1、阳性：表示机体感染过结核杆菌或接种过BCG，但强阳性者可能有活动性结核，应进一步确诊。2、阴性：提示没有结核菌感染。但仍要排除下列情况：①结核菌感染后需4～8周变态反应才能充分建立；所以在变态反应前期，结核菌素试验可为阴性。②应用糖皮质激素等免疫抑制剂者、营养不良以及麻疹、百日咳病人，结核菌素反应可暂时消失。③严重结核病和各种危重病人对结核菌素无反应。④其他如淋巴免疫系统缺陷（白血病、结节病）病人和老年人的结素反应也常为阴性。 （三）接种方法疫苗稀释：用灭菌的1ml注射器将随疫苗附发的稀释液加入冻干皮内注射用的BCG安瓿中（稀释液应有足够的附加量，以保证吸出量与标示量一致），放置1min，摇动安瓿使之溶化后，用注射器来回抽取数次，使充分混匀。每支安瓿自稀释时起，必须在30min内用完，以防污染。接种方法：先用75%乙醇消毒上臂外侧三角肌中部的皮肤，然后用灭菌的1ml蓝心注射器吸取摇匀的疫苗，每人在上臂三角肌外下缘皮内注射，严禁注入皮下。注射时针尖稍向下压与皮肤平行刺入皮内。注射0.1ml，可见一带汗毛孔的圆凸丘疱。 （四）接种禁忌已知对该疫苗的任何成分过敏者。患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。免疫缺陷、免疫功能低下或正在接受免疫抑制治疗者。患脑病、未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。妊娠期妇女。湿疹或其他皮肤病患者。出生体重<2500g的早产儿暂缓接种 （五）卡介苗接种注意事项严禁皮下或肌内注射！！接种卡介苗的注射器应专用，不得用作其他注射，以防止产生化脓反应。以下情况者慎用：家庭和个人有惊厥史者，患慢性疾病者、有癫痫史者，过敏体质者，哺乳期妇女。开启疫苗瓶和注射时，切勿使消毒剂接触疫苗。疫苗瓶有裂纹、标签不清或失效者、疫苗复溶后出现浑浊等外观异常者均不得使用。 疫苗开启后应立即使用，如需放置，应置2℃~8℃，并于半小时内用完，剩余均应放弃。应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。注射免疫球蛋白者，应至少间隔1个月以上接种本品，以免影响免疫效果。严禁冻结。使用时应注意避光。 （六）接种后可能出现的不良反应及处理一般不良反应接种后2周左右，局部可出现红肿浸润，若随后化脓，形成小溃疡，一般8-12周后结痂。一般不需要处理，但要注意局部清洁，防止继发感染。脓疱或浅表溃疡可涂1%甲紫（龙胆紫），使其干燥结痂，有继发感染者，可在创面撒布消炎药粉，不要自行排脓或揭痂。局部脓肿和溃疡直径超过10mm及长期不愈（大于12周）应及时诊治。淋巴结反应，接种侧腋下淋巴结（少数在锁骨上或对侧腋下淋巴结）可出现轻微肿大，一般不需处理；对于中度发热反应或发热时间超过48小时者，可给予对症处理。接种疫苗后可出现一过性发热反应，其中大多数为轻度发热反应，持续1~2天后可自行缓解，一般不需处理；对于中度发热反应或发热时间超过48小时者，可给予对症处理。 罕见不良反应严重淋巴结炎反应，在临床上分为干酪性、脓肿型、窦道型等。接种处附近如腋下、锁骨上下或颈部淋巴结强反应，局部淋巴结肿大软化形成脓疱，应及时诊治。复种时偶见瘢痕疙瘩。极罕见不良反应骨髓炎过敏性皮疹和过敏性紫癜 六、卡介苗接种的现今认识BCG于1921年首次用于免疫人群，已累计接种30多亿人次。虽然BCG是目前使用最古老的疫苗，但也是争议最大的疫苗。目前已证实，接种BCG既不能预防原发性结核杆菌感染、又不能预防大量传染性肺结核病例，因此不能明显降低社区中的结核病传播。接种BCG的最显著的作用是对儿童期结核性脑膜炎和粟粒性结核病有明显预防作用。WHO认为，尽管BCG效果多变，但由于结核杆菌对多种药物出现耐药性，使治疗方案复杂化，而且在大多数贫困国家，大多数人在经济上无法负担对抗多种药物结核杆菌感染的治疗。因此，BCG仍是控制结核病的一个重要措施。我国是结核病发病较高的国家，因此仍需要对新生儿接种BCG。'