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'第九章感觉器官的功能65 第一节感受器及其一般生理特性 一、感受器、感觉器官的定义和分类1、定义感受器：指分布在体表或组织内部，能感受体内外环境变化的特殊结构。感觉器官：感受器及与感受功能密切相关的非神经附属结构。 体内外的刺激信号G蛋白－效应器酶－第二信使改变离子通道功能状态细胞膜电位变化（感受器电位或启动电位）传入神经产生动作电位跨膜信号转导真实地反应刺激信号所携带的信息 3、感受器的编码作用概念：把刺激所包含的环境变化信息转移到动作电位的序列之中。 （1）对刺激的质（性质）的编码决定于:刺激的性质被刺激的感受器的种类传入冲动所到达的大脑皮层的特定部位由于机体的高度进化,某一感受器只对某种性质的刺激起反应,产生的冲动循特定的途径到达特定的皮层结构所以:感觉的引起有专门的感受位点和专用的传输线路 （2）对刺激的量（强度）的编码（图）决定于:单一神经纤维上动作电位的频率参与信息传输的神经纤维的数目如:触、压觉 4、感受器的适应现象概念：用固定强度的刺激作用于感受器时，传入神经纤维上动作电位的频率逐渐减少的现象。（1）快适应感受器：如皮肤触觉感受器,利于接受新的刺激（2）慢适应感受器：如颈动脉窦感受器,利于机体对某些功能进行持久的监测和调节注意:适应并非疲劳 第二节眼的视觉功能 1.眼球的基本结构(如图)折光系统：角膜、房水、晶状体、玻璃体感光系统：视网膜2.眼的基本功能折光系统的功能:将外界射入眼的光线经过折射后,能在视网膜上形成清晰的图像感光系统的功能:将物像的光刺激转变成生物电变化,继而产生神经冲动,由视神经传入中枢概述 一、眼的折光系统及其调节(1)球形界面的折光规律ABCF2F1AB’1.与眼的屈光成像有关的光学原理’前焦点后主焦点节点 (2)折光能力与曲率半经R和折光指数n有关。122nnRnF-=F：（主）焦距R：曲率半经n1：空气的折光指数n2：某物质的折光指数D：屈光度（焦度）FD1=得出:R大，F大，D小R小，F小，D大 1D2D10DFFF （3)计算像距Fba111=+Fb11=得出：b=F成像在主焦距F的位置。2、如果a小于足够远时（6m以内）得出：b>F，成像在主焦距之后。1、当物体处于无限远时（6m以外）1/a≈0，则：物距为a，像距为b，则： 2．简化眼与眼内光的折射简化眼是一种假想的人工模型假定:(1)单球面折光体(前后径为20mm)构成(2)只有一个节点(n),距角膜表面5㎜,约在视网膜前15㎜,经过节点不折射(3)前焦点在角膜前15㎜,后主焦点在节点后15㎜,距角膜表面将是20㎜(4)内容物为均匀的折光体,折光率为1.33 眼内光的折射(((ab(实物到节点距离)物像到节点距离）实物大小）物像大小）BnbnAB=眼前10m处高30cm的物体，物像大小为：0.45㎜10005300×1510005(mm)15(mm)300(mm)===XX(mm)简化眼根据相似三角形原理: 3.眼的调节视远物时不需调节，视近物调节：晶状体变凸、瞳孔缩小、眼球会聚(1)晶状体的调节（图）视近物→视网膜上模糊的物像→视皮层→中脑正中核→睫状肌收缩→睫状体向前向中移行→悬韧带松驰→晶状体变凸（曲率↑）→屈光力↑→焦距缩短→物像落到视网膜上 近点：眼作最大调节时能看清的最近物体的距离。(1)近点为判断晶状体的调节能力大小的指标(2)随年龄的增长近点距眼的距离增大年龄8岁　20岁60岁近点8.6cm10.4cm83.3cm (2)瞳孔调节直径可变动于:1.5-8.0mm在生理状态下引起瞳孔调节的情况有两种:一种是所视物体的远近引起的调节另一种是由进入眼的光线强弱引起的调节 瞳孔近反射(瞳孔调节反射)：视近物时反射性引起双侧瞳孔缩小。作用：减少球面像差和色像差，清晰成像瞳孔近反射的中枢在大脑皮层，经过中脑正中核。 瞳孔对光反射:指瞳孔大小随视网膜光照强度而变化的反射。互感性对光反射:即光照一侧瞳孔,除被照射的瞳孔缩小外,另一侧的瞳孔也缩小。生理意义：调节进入眼光量，使视网膜不因光线过强受到损害,光线过弱而影响视觉。 临床意义:判断中枢神经系统病变部位,全身麻醉的深度和病情危重程度的重要指标。瞳孔对光反射的中枢在中脑顶盖前核 (3)双眼球会聚（辐辏反射）定义:看近物时,除晶状体和瞳孔进行调节外,还可看见两眼视轴同时向鼻侧聚合意义:使双眼看近物时物体成像于两眼视网膜的相称点上，产生单一视觉（不产生复视）。 4、眼的折光能力和调节能力异常正视眼非正视眼（近视、远视、散光、老视）（1）近视轴性近视：眼球前后径过长屈光性近视：折光能力过强分类 形成因素:1.遗传引起2.后天用眼不当,如阅读姿势不正确,阅读距离过短或持续时间过长,字迹过小矫正:凹透镜 （2）远视轴性远视：眼球前后径过短屈光性远视：折光能力太弱分类形成因素:眼球发育不良,多系遗传因素角膜扁平矫正:凸透镜 （3）散光：用柱面镜纠正产生原因：角膜表面不同方位的曲率半径不等（4）老视：用凸透镜纠正产生原因：晶状体弹性减退（弱）注意:与远视比较 二、视网膜的感光功能视网膜的结构1、分层：分十层，简化为四层(图)（1）色素细胞层不属于神经组织，含色素颗粒和VitA，对感光细胞有保护和营养作用。与其它层易发生剥离。 （2）感光细胞层视杆细胞、视锥细胞层（如图）结构：外段、内段、核部、终足分布:很不均匀黄斑：视网膜中心，视锥细胞多中央凹：只有视锥细胞，无视杆细胞周边部视杆细胞多,视锥细胞少盲点：无感光细胞（3）双极细胞层（4）神经细胞层 2、联系(图)（1）纵向联系聚合式联系：多见于视杆系统意义:无精细分辨能力,能总和多个单线方式：多见于中央凹处视锥细胞意义：视敏度高，感觉“精细”（2）横向联系水平细胞和无长突细胞3、联系方式：化学突触和电突触弱刺激 视网膜的主要细胞层次及其联系模式图 视网膜的两种感光换能系统1、视觉的二元学说视杆系统（暗视觉或晚光觉系统）：对光的敏感性高，可感受弱光，无色觉对物体细小结构辨别能力差。视锥系统（明视觉或昼光觉系统）：对光的敏感性差，专司昼光觉、色觉，对物体的细小结构及颜色有高度的分辨别能力。 2、视觉的二元学说的依据（1）视杆细胞、视锥细胞在视网膜分布不同（2）视杆细胞、视锥细胞与双极细胞及神经节细胞的联系方式不同（3）视杆细胞、视锥细胞所含的感光色素不同（4）动物证明 视网膜的感光换能机制1、视杆细胞的感光换能作用（图）(1)视紫红质的光化学反应及代谢(图)(2)视杆细胞的生物电活动未经光照时:存在静息电位受到光照时:产生超极化的感受器电位 终足神经递质释放超极化型感受器电位外段视盘膜Na+通道关闭，Na+内流↓cGMP分解，cGMP↓激活磷酸二酯酶（效应器酶）激活G蛋白（Gt，传递蛋白）变视紫红质Ⅱ视紫红质1个光量子 2、视锥系统的换能和颜色视觉(1)视锥细胞感受器电位产生机制光线视锥细胞外段视锥色素感受器电位（超极化）神经节细胞AP (2)视觉的三原色学说三原色学说的提出三原色学说的内容三原色学说的实验证实(图)三原色学说对色盲和色弱的解释 原色学说的内容三种不同视锥细胞，分别含有对红、绿、蓝光敏感的视色素。产生不同的色觉是由于三种视锥细胞兴奋程度的比例不同：0:0:97蓝色感觉99:42:0红色感觉31:67:36绿色感觉1:1:1白色感觉 三、视网膜的信息处理在光刺激作用下，由视杆和视锥细胞产生的电信号（超极化型慢电位变化）在视网膜内经过复杂的神经元网络的传递由神经节细胞以动作电位的形式传向中枢(这个过程有很多神经递质的参与) ◆与视觉有关的一些现象1、暗适应概念：当人长时间处于明亮的环境中而突然进入暗处时,最初看不见任何东西,经过一段时间后,视敏度才逐渐增高,能逐渐看清暗处的物体机制：两个阶段（如图） 2、明适应概念:当人长时间处于暗处而突然进入明处,最初感到一片耀眼的光亮,也不能看清物体,片刻后才能恢复视觉机制：视紫红质大量分解 3、视力（视敏度）概念：眼分辨细小结构的能力。衡量标准：以人能看清最小视网膜像为标准视力表制定：人眼在5米处看清：第10行E字时，视角为1’，视力为1.0(眼的正常视力的判断标准)第1行E字，视力为0.1。 4、视野定义:单眼固定地注视前方一点时，该眼所能看到的范围特点:白色视野兰色红色绿色鼻侧与上方小，颞侧与下方大临床意义:可帮助诊断眼部和脑的一些病变 5、双眼视觉双眼视觉：双眼同时看一物体时产生的视觉(相对单眼视觉而言,产生单视而非复视)优点：弥补盲点的存在，扩大视野，产生立体视觉。 6.立体视觉立体视觉:双眼视物时,主观上可产生被视物体的厚度及空间的深度或距离等感觉 7.视后像视后像:注视一个光源或较亮的物体,后闭上眼睛,这时可以感觉到一个光斑,其形状和大小均与该光源或物体相似,这种主观的视觉后效应特点:视后像持续几秒或几分钟,刺激强度增强持续时间较长 8.融合现象融合现象:如果用重复的闪光刺激人眼,当闪光频率较低时,主观上能分辨一次又一次的闪光.当闪光频率增加到一定的程度时,重复的闪光刺激可引起主观上的连续光感原因:闪光刺激的间歇时间比视后像的时间更短 第三节耳的听觉功能 听觉的产生:声源振动引起空气产生的疏密波,通过外耳和中耳组成的传音系统传到内耳,经内耳的换能作用将声波的机械能转变为听神经纤维上的神经冲动,后者传到大脑皮层的听觉中枢,产生听觉适宜的刺激:频率(20-20000HZ)强度(0.0002-10000dyn／㎡)概述 相关概念1、听力：指听觉器官感受声音的能力2、听阈：声波振动频率一定时，刚好能引起听觉的最小振动强度。3、最大可听阈：当振动强度增加，引起听觉和鼓膜的疼痛感觉，这个限度称为最大可听阈。4、听域（如图） 一、外耳和中耳的功能外耳的功能耳廓：集声、判断声源方向外耳道：传声、扩音作用中耳的功能1、鼓膜：传声作用2、听骨链：传声作用(如图)增压减幅效应 一方面:鼓膜有效振动面积55mm2，卵圆窗面积3.2mm2，为17:1,增加17倍另一方面:锤骨柄（长臂）与砧骨突（短臂）之比3:1,增压1.3倍。17×1.3=22倍（27分贝）振幅大，振动小的声波振幅小，振动大的液体传导增压减幅效应因为: 3、中耳肌的功能正常情况下：鼓膜张肌有利于高音调声音传导镫骨肌有利于低音调声音传导声强大于70dB时：鼓膜张肌和镫骨肌收缩,使中耳传音效果减弱，保护耳蜗。 4、咽鼓管的功能(1)保持鼓室内压与外界大气压压力平衡（2）对中耳的引流作用(如图) 声波传入内耳的途径（1）气传导-声波传导的主要途径声波经外耳道引起鼓膜振动，再经听骨链和卵圆窗膜进入耳蜗。（2）骨传导-正常情况下作用甚微声波直接引起颅骨的振动，再引起位于颞骨骨质中的耳蜗内淋巴的振动。 二、内耳（耳蜗）的功能内耳又称迷路，由耳蜗和前庭器官组成功能:(1)耳蜗把声波的机械能转换成听神经纤维上的动作电位(2)前庭器官与平衡感觉有关 (一)耳蜗的结构特点（图）基底膜前庭膜鼓阶：外淋巴与圆窗膜相连蜗管：内淋巴，为盲管前庭阶：外淋巴与卵圆窗膜相连顶部相通 (二)耳蜗的感音换能作用基底膜振动(内耳振动传递过程)声波卵圆窗膜内移（外移）前庭阶中外淋巴前庭膜和基底膜下移（上移）鼓阶中外淋巴圆窗膜外移（内移）。（图） 1、对音调的辨别——行波学说行波学说：不同频率的声波引起的行波都是从基底膜的底部开始,但不同频率的声波，行波传播远近及产生最大振幅的部位不同(图) 2、对声音强度的辨别(1)听神经冲动的频率(2)参与的神经纤维的数目3、对声源方向的辨别根据声波到两耳的时间差及强度差来辨别。(三）基底膜振动毛细胞兴奋感受器电位(图) (四)耳蜗的生物电现象有三种:1.未受声波刺激时的耳蜗的静息电位2.受声波刺激时耳蜗产生的微音器电位3.耳蜗微音器电位引发的耳蜗神经的动作电位 1、耳蜗的静息电位(图)内淋巴电位：＋80mv，与Na+泵有关毛细胞静息电位：－70至－80mv 2、耳蜗的微音器电位定义:当耳蜗受到声波的刺激时,在耳蜗及附近的结构中,可记录到的一种特殊的电变化,其特点是它的波形和频率与作用的声波完全相同,这种电变化称耳蜗的微音器电位产生:是多个毛细胞受刺激产生感受器电位的总和。特点：没有潜伏期和不应期、不易疲劳,不发生适应现象,对缺氧和深麻醉不敏感、等级性、有方向性。 3、耳蜗神经的动作电位定义:耳蜗对声音刺激的一系列反应中最后出现的电变化作用:传递声音信息 耳蜗与蜗神经的生物电现象归纳:耳蜗在没有声音刺激时存在静息电位.当有声音刺激时,在静息电位的基础上,使耳蜗毛细胞产生微音器电位,进而触发耳蜗神经产生动作电位,该神经冲动沿着蜗神经传入听觉中枢,经分析处理后产生主观上的听觉 第四节前庭器官的平衡感觉功能 概述前庭器官：三个半规管、椭圆囊和球囊功能：1、感觉人体头部位置及人体移动时的速度变化。2、调节肌肉紧张，维持姿势平衡。3、调整眼的运动，使人在运动时，眼仍能注视空间某一物体，判别体位方向和看清物体。 一、前庭器官的感受装置和适宜刺激1、前庭器官的感受细胞-毛细胞（图）在正常条件下,机体的运动状态和头部在空间的位置的改变都能以特定的方式改变毛细胞的倒向,使相应的神经纤维的冲动发放频率发生改变,把这些信息传到中枢,引起特殊的运动觉和位置觉,并出现相应的躯体和内脏功能反射性变化. 2、半规管的感受装置及适宜刺激(图)感受装置：壶腹嵴中的毛细胞(顶部的纤毛埋植在壶腹帽中,动纤毛和静纤毛的位置相对固定)适宜刺激：旋转变速运动 例如:以身体的中轴为轴心向左旋转(1)旋转开始时:因内淋巴的惯性左侧半规管的内淋巴流向壶腹毛细胞的静毛向动毛偏移毛细胞兴奋和产生较多的神经冲动右侧半规管的内淋巴离开壶腹毛细胞的静毛远离动毛毛细胞抑制和产生神经冲动减少 (2)匀速状态:毛细胞不受刺激(3)旋转停止:因内淋巴的惯性两侧壶腹中毛细胞的纤毛的弯曲的方向和发放冲动的情况刚好与(1)相反 3、椭圆囊和球囊的感受装置及适宜刺激感受装置：囊斑中的毛细胞(纤毛埋植在位砂膜中)(图)适宜刺激：直线变速运动(图)椭圆囊：水平方向球囊：垂直方向 二、前庭器官的反射1、姿势反射直线变速运动刺激囊斑旋转变速运动刺激壶腹嵴躯干、四肢紧张度改变维持平衡。反射颈部 2、前庭器官的自主性功能反应(内脏反应)前庭器官受到过强或过长的刺激，或前庭功能过敏时，引起心率、血压、呼吸、出汗、呕吐、眩晕等现象。如:晕车晕船 3、眼球震颤(1)概念：躯体旋转运动时眼球可出现的一种特殊的往返运动。(2)原因:半规管受到刺激而引起,可反射性引起眼外肌规律性活动,从而造成眼球的往返运动(3)分类：水平方向:水平半规管受刺激垂直方向:上半规管受刺激旋转方向:后半规管受刺激 (4)过程(向左旋转)开始旋转慢动相:左侧半规管的壶腹嵴的毛细胞受刺激增强,而右侧相反,引起一些眼外肌兴奋而另一些眼外肌抑制,于是两侧的眼球缓慢向右侧移动原因:前庭器官受刺激引起快动相:当眼球移到两眼裂的右侧端时,又快速向左侧移动原因:中枢进行矫正 匀速旋转:眼震颤停止旋转停止:出现与旋转开始时相反的慢动相和快动相 第五节嗅觉、味觉和皮肤感受器的功能 一、嗅觉感受器和嗅觉的特点1、嗅觉感受器:(1)分布:上鼻道及鼻中隔后上部的嗅上皮，两侧总面积约5cm2。(2)组成：主细胞（嗅细胞）、支持细胞、基底细胞和Bowman腺。2、适宜刺激：空气中的有机化学物质 3、嗅细胞感受器电位的产生化学物质＋嗅细胞纤毛膜受体蛋白G-蛋白第二信使电压门控式钙通道开放钠离子和钙离子的内流去极化感受器电位轴突膜AP嗅球嗅觉中枢嗅觉 4、七种基本气味：樟脑味、麝香味、花草味、乙醚味、薄荷味、辛辣味和腐腥味。5、特点：(1)不同性质的气味刺激有其专用的感受位点和传输线路。(2)十分灵敏、有差异、适应快 二、味觉感受器和味觉的一般性质1、感受器：味蕾(1)分布:在舌背部表面和舌缘，口腔和咽部粘膜的表面也有散在的味蕾存在(2)组成：味细胞、支持细胞和基底细胞 2、适宜刺激：酸甜苦咸4种基本味觉舌尖部：甜味；舌两侧：酸味；舌两侧前部：咸味；软腭和舌根部：苦味3、影响味觉敏感性的因素：温度、血液化学成分、物质浓度 4、感受器电位产生机制一个味感受器并不只对一种味质起反应,而是对酸甜苦咸均有反应,只是程度不同而已.但这四种基本味觉感受器电位产生机制不全相同: (1)咸味和酸味:Na+盐和H+化学门控式Na+通道开放钠离子的内流感受器电位(2)甜味:糖＋受体结合Gs蛋白腺苷酸环化酶cAMP增多K+电导减小感受器电位突触动作电位(3)苦味：两者皆有 三、皮肤感觉感受器的功能(1)触、压觉1、概念：给皮肤以触、压等机械刺激所引起的感觉，分别称为触、压觉。2、分布密度和对触、压觉的敏感程度：鼻、口唇、指尖高胸、腹部次之手腕、足最低 3.触、压觉的两点辨别阈:手指口唇脚趾足背腹胸背逐渐增高 4.机制：机械刺激感觉神经未梢变形机械门控钠通道开放Na+内流感受器电位动作电位大脑皮层感觉区触、压觉 (2)温度感觉：冷觉和温觉合称温度觉1.热点和冷点2.温度感觉影响因素:皮肤的基础温度、温度的变化速度、被刺激的皮肤范围3.冷点由Ⅲ类纤维传导；热点由无髓的Ⅳ类纤维传导 (3)痛觉1、概念：痛觉是由有可能损伤或已经造成皮肤损伤的各种性质的刺激所引起的，它们除引起不愉快的痛苦感觉外，尚伴有强烈的情绪反应。2、传入N：细的Ⅲ、Ⅳ类纤维 总结掌握:眼的调节,眼的折光异常,声音传入内耳的途径和基底膜的行波学说熟悉:感官的生理特性,瞳孔对光反射,视杆和视锥细胞的生理功能,视觉的生理现象,中耳作用和微音器电位了解:前庭器官的功能,视杆细胞感光换能机制 谢谢！２００５年１１月 焦平面来自远处光线（平行光线）来自6m以内的光线焦点 蛙肌梭中刺激强度的编码模式图刺激:肌肉的牵拉刺激强度刺激强度幅度增大降至一个较低的稳定水平动作电位的频率与感受器电位的振幅有关 右眼的水平切面示意图 晶状体睫状体悬韧带 近视眼远视眼正视眼 视网膜的主要细胞层次及其联系模式图视网膜的主要细胞层次及其联系 感光细胞模式图 视杆细胞外段的超微结构示意图视杆细胞外段的超微结构示意图即视杆细胞的视色素 1.5mm视力表原理图物像大小X实物大小1.5mm物像到节点距离15mm=X=4.5um，实物到节点距离5005mm 阻抑蛋白、视蛋白激酶＋ 420534564 视觉阈值在暗环境中的时间（分） 返回咽鼓管 振动轴方向鼓膜卵圆窗膜 人中耳和耳蜗的关系模式图圆窗前庭膜基底膜镫骨卵圆窗锤骨柄锤骨砧骨声波振动 耳蜗管的横断面图螺旋神经节动脉血管纹基底膜鼓阶螺旋器蜗管前庭阶前庭膜充满外淋巴充满外淋巴充满内淋巴 人的正常听域图通常的语言区次要的语言区 不同频率的声音引起的行波在基底膜上传播的距离以及行波最大振幅的出现部位频 基底膜和盖膜振动时毛细胞顶部听毛受力情况 由短声刺激引起的微音器电位和听神经AP 前庭器官中毛细胞顶部纤毛受力情况影响动毛神经冲动 椭圆囊和球囊中囊斑的位置及毛细胞顶部纤毛的排列方向椭圆囊囊斑球囊囊斑 头前倾30度,向左旋转开始时的眼震颤方向旋转突然停止后的眼震颤方向继续匀速旋转,眼球不震颤而居中 耳蜗的纵行剖面 Xp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w-z1C4G7JaMePhTkWnZr$u*x+A2E5H8KcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w-A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w-z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcOfRiUmXp#s&v)z0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRjUmXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w-z1C4G7JaMePhTkWnZr$u*x+A2E5H8KcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp#s&v)z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w-A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVr%u(x+B2E5H9KcOfRiUmXp#s&v)z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w-A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w-z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcOfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRjUmXp!s&v)zG8JbMeQhTkWoZr$u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRjUmXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2D5G8KfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+BIaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUm$t*x-A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!s&w)zG8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7NeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#s%vC4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#r)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5G8KbNfQiXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2DKcOfRjUmXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2D5G8KbNfQXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$y+B2E6H9KcOfRjUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)zG8JbNeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNelXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*w-A1D5G8JbNeQhTl#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IahTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2I9LdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYqx+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A 真菌常用的体外药敏试验方法比较 真菌药敏试验临床难以开展的原因1.按照NCCLS推荐的稀释法,操作繁琐2.有些药只能用于某种菌的抗菌活性测定3.纸片法试验未得到NCCLS认可4.E试验价钱太贵5.药敏孵育时间因菌种而不同 体外敏感试验与临床治疗相关性真菌体外药敏试验结果与口咽部真菌感染结果相关性好对于深部的真菌感染，抗真菌药物敏感性试验同临床治疗的相关性还有待进一步证实体外敏感试验没有考虑到真菌对抗真菌药物在体内的动力学和复杂的生物学作用 真菌体外药物敏感试验方法NCCLSM27-A：常量肉汤稀释法，微量肉汤稀释法E-test法NCCLSM44-P纸片扩散法(仅限氟康唑)丹麦Rosco纸片扩散法(NCCLS未认可) 真菌体外药敏用培养基常量肉汤和微量肉汤法RPMI1640液制备：RPMI10.4gMOPS（三氮吗啡啉丙磺酸）34.53g蒸馏水900ml溶解后，用1MNaOH调节PH至7.0（25℃），用蒸馏水溶至1000ml，高压灭菌后，冷却至50℃加入RPMI1640用0.22µm滤膜抽滤除菌，4℃保存。 真菌体外药敏用培养基E-test法：在RPMI液体培养基中补充葡萄糖，使其终浓度为2%。NCCLS纸片扩散法：Mueller-Hinton琼脂补充2%葡萄糖和0.5μg/ml美蓝丹麦ROSCO纸片扩散法：改良的SHADOMY（PH7.0）培养基主要成分：酵母粉，葡萄糖，天冬氨酸，磷酸缓冲液等。 菌液制备将受试菌在沙保罗培养基上转种，以保证其纯度和活性。用0.85%的盐水制成酵母菌悬液，调整其浊度达到0.5麦氏比浊标准（约为1~5×106CFU/ml）。常量稀释法：用RPMI1640液体稀释2000倍接种浓度约为0.5~2.5×103CFU/ml微量稀释法：用RPMI1640液体稀释1000倍接种浓度约为1～5×103CFU/mlE-test法和NCCLS纸片扩散法：用菌液浊度为0.5麦氏单位。Rosco纸片扩散法：1.念珠菌：0.5麦氏浊度，生理盐水1：10稀(1~5×105CFU/ml)2.隐球菌属：1.0麦氏浊度3.其它酵母菌：0.5麦氏浊度，生理盐水1：1稀释 常量肉汤法(M27-A)先将氟康唑粉末溶于蒸馏水，然后用配制好的RPMI1640液倍比稀释，使其起始浓度为640µg/ml,终末浓度为1.25µg/ml，分装无菌洁净的12mm×75mm试管：64321684210.5.25.125＋－前10管：0.2ml氟康唑＋1.8ml菌液念珠菌属35℃孵育48小时新型隐球菌72小时读取MIC结果2ml菌液1.8ml1640 常量稀释法药敏结果判定氟康唑，伊曲康唑，两性霉素为100%抑制其他唑类药物为80%抑制（取0.2ml的生长对照菌液加入0.8mlRPMI液体培养基的菌液浓度）质控株克柔念珠菌ATCC6258近平滑念珠菌ATCC22019白念珠菌ATCC90028白念珠菌ATCC24433 微量肉汤法氟康唑的稀释方法同常量法，但起始浓度为2×常量法的浓度（即128µg/ml），终浓度为0.25µg/ml。。37℃。37℃6432168421.5.25.125＋－氟康唑：1-10孔分别为100ul菌悬液：1-10孔分别为100ul200ulRPMI汤200ul菌悬液35℃新型隐球菌72小时，其余菌株48小时读取MIC结果 酵母菌的NCCLSM27-A各药物折点粘膜及系统性感染：氟康唑（除克柔念珠菌）敏感：≤8µg/ml中介：－耐药：≥64µg/ml粘膜感染：伊曲康唑敏感：≤0.125µg/ml中介：－耐药：≥1µg/ml粘膜及系统性感染：5-氟嘧啶敏感：≤4µg/ml中介：8~16µg/ml耐药：≥32µg/ml 酵母菌E-test法瑞典ABBiodisk优点：有较好的重复性和稳定性MIC E-test法0.5麦氏比浊液（约为1~5×106CFU/ml）。菌悬液均匀涂布于药敏板上35℃培养24小时读取结果光滑念珠菌新型隐球菌等生长较慢的菌种需适当延长培养时间。 E-test法评价准确性高,且操作简便E-test法得到的MIC值在某些菌种中要低于NCCLS推荐的常量肉汤稀释法测得的MIC20%浓度CO2的环境中，可使此方法的结果更真实反映药物对致病菌的敏感性缺点：1.价格太高每片40-50元2.吡咯类MIC终点不好确定 酵母菌纸片扩散法敏感试验NCCLSM44-P.2003培养基：Mueller-Hinton琼脂补充2％Glucose0.5ug/mlMethylenebluedyePH7.2-7.4优点：有较好的重复性和稳定性操作简便，价廉缺点：目前只限氟康唑 NCCLS纸片扩散法0.5麦氏比浊标准（约为1~5×106CFU/ml）。菌悬液均匀涂布于药敏板上步骤同细菌敏感试验操作一致，35～37℃孵育18～24小时，对于生长缓慢的菌株如新型隐球菌，菌液需调至1麦氏单位，孵育48小时，光滑念珠菌也需孵育48小时读取抑菌环直径。 酵母菌纸片扩散法敏感试验NCCLSM44-P.2003氟康唑解释标准和相应的最小抑菌浓度抑菌环直径（mm)MIC（ug/ml)敏感（S)>=19<=8剂量依赖性敏感（SDD)15-1816-32耐药（R)<=14>=64S＝SusceptibleSDD=Susceptible－DoseDependentR=Resistant 酵母菌纸片扩散法敏感试验NCCLSM44-P.2003氟康唑对标准菌株24h抑菌环直径（mm)的质控允许范围标准菌株氟康唑25ug沃尔康唑1ug白念珠菌ATCC9002828-3931-42近平滑念珠菌ATCC2201922-3328-37热带念珠菌ATCC75026-37－克柔念珠菌ATCC6258－16-25 ROSCO纸片扩散法ROSCO纸片扩散法：1.克柔念珠菌：0.5麦氏浊度，生理盐水1：10稀释菌液为5×105CFU/ml2.隐球菌属：1麦氏浊度3.其它酵母菌：0.5麦氏浊度，生理盐水1：1稀释菌液为2.5×106CFU/ml将稀释好的菌液涂布在改良的SHADOMY（PH7.0）培养基上其它操作同细菌。 读取抑菌环直径近似到mm在大约80%抑制区为测量边界在抑菌环内个别细小或中等大小的菌落，<15可忽略不计Rosco纸片扩散法药敏结果判定 两种纸片扩散法的比较Rosco纸片扩散法检测菌种念珠菌属，隐球菌属培养基改良SHADOMY琼脂，PH7.0试验药品及剂量AMB10µg，IT8µg，FLA15µg，FC1，10µg，FC10µg，KET15µg等接种的菌量：5×105CFU/ml（克柔念珠菌先制成0.5麦氏浊度，再用生理盐水1：10。隐球菌属配1.0麦氏不稀释）其它菌种配0.5麦氏浊度，1：1稀释培养条件念珠菌属35℃培养18~24小时，新型隐球菌30℃培养42~48小时结果判读FC及AMB100%被抑制唑类药物80%抑制质控株光滑念珠菌2238NL白念珠菌ATCC64548白念珠菌ATCC64550NCCLS纸片扩散法检测菌种念珠菌属，隐球菌属培养基Mueller-Hinton琼脂中补充2%的葡萄糖和0.5μg/ml的美蓝试验药品及剂量FLA25µg接种的菌量1～5×106/mL隐球菌1.0麦氏浊度培养条件35℃孵育18～24小时新型隐球菌培养42~48小时结果判读FC及AMB100%被抑制，唑类药物80%抑制质控株白念珠菌ATCC90028近平滑念珠菌ATCC22019 Rosco纸片扩散法各药物折点粘膜酵母菌感染氟康唑，克霉唑，酮康唑，氟胞嘧啶1ug，特比奈吩，咪康唑等敏感：≥20mm中介：12~19mm耐药：≤11mm两性霉素B，制霉菌素伊曲康唑敏感：≥15mm中介：10~14mm耐药：无抑菌环氟胞嘧啶10ug敏感：≥30mm用于黑曲霉中介：23~29mm耐药：≤22mm灰黄霉素敏感：≥10mm中介：－耐药：无抑菌环 系统性酵母菌感染氟康唑15ug18-24h敏感：≥30mm≤4中介：29~23mm8-16耐药：≤22mm≥32伊曲康唑8ug18-24h敏感：≥20mm≤0.06中介：19~12mm0.125耐药：≤11mm≥0.25这个MIC标准为纸片法的相应值Rosco纸片扩散法各药物折点 系统性酵母菌感染酮康唑15ug纸片和培养基广州乐通公司可供应敏感：≥30mm≤0.12中介：23-290.25耐药：≤22mm≥0.5两性霉素10ug敏感：≥15mm≤1中介：14-102耐药：≤9mm≥4氟胞嘧啶1ug敏感：≥20mm≤4中介：12-198-16耐药：≤11mm≥32氟胞嘧啶10ug用于黑曲霉敏感：≥30mm≤4中介：23-298-16耐药：≤22mm≥32Rosco纸片扩散法各药物折点 氟孢嘧啶氟康唑-制霉菌素伊曲康唑两性霉素B克霉唑-特比奈酚 结论1.常量稀释法难以推广2.微量板浪费3.NCCLS纸片法只做氟康唑4.建议目前用Rosco纸片5.寄希望将来推行Etest法'