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'蚕豆病PPT素材课件 一、根据上述患儿的临床表现和实验室检查，初步判断患儿是何种疾病蚕豆病 恶心、呕吐、面色苍白皮肤及巩膜黄染红细胞1.98×1012/L血红蛋白53g/L血清总胆红素85.5µmol/L尿蛋白（++）尿胆红素(－)尿胆素原(+)尿液镜下未见红细胞黄疸红细胞膜不完整，已破裂红细胞含量少含量明显增加血红蛋白量减少排尿呈酱油样色游离胆红素增加溶血性黄疸蚕豆病肠肝循环增多 （一）实验器材和试剂1.实验器材恒温水循环紫外分光光度计，可见分光光度计，离心机。2.试剂（1）0.5mol/LTris-HClMgCl2缓冲溶液（pH8.0）：称取Tris12.1g,MgCl2·6H2O4.06g,加入160mL蒸馏水溶解，用HCl调pH至8.0，然后加入蒸馏水至200mL。（2）2mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP＋)：称取NADP＋21.3mg，溶于10mL蒸馏水中。4℃可保存20天左右。（3）6mmol/L葡萄糖—6—磷酸二钠(G6P－Na2)：称取21.5mgG6P－Na2·2H2O，溶于10mL蒸馏水中。4℃可保存20天左右。 （4）溶血剂：取巯基乙醇0.1mL，10%EDTA2.0mL，6mmol/LNADP＋0.4mL，加蒸馏水至总体积200mL。（5）血红蛋白氧化剂（Drabkin试剂）：称取K3Fe(CN)60.2g，KCN0.052g，NaHCO31.0g，加蒸馏水至1000mL，置棕色瓶内避光保存，可保存20天。（6）0.9%NaCl，ACD抗凝剂。 （二）实验操作流程1、洗涤红细胞取静脉血2.0mL，放入含0.4mLACD抗凝剂的试管中，混匀。吸取0.2mL抗凝血放入试管中，加入4mL预冷的生理盐水，轻轻摇匀，2500r/min离心5min,倾去上清，重复三次。2、溶血液的制备向红细胞沉淀中加入溶血剂2.0mL，震荡1min，4℃放置10min以上。 3、NADPH的测定取石英比色杯两只，标为“测定”及“空白”，按下表操作：试剂体积蒸馏水（uL）0.5mol/LTris-HClMgCl2缓冲溶液（uL）6mmol/LG6P-Na2(uL)2mmol/LNADP+(uL)2040300300300混匀后放入带恒温水循环（25℃）的紫外分光光度计中，预热10min然后在“测定”中加入溶血液60uL,“空白”中加入溶血剂60uL，混匀 以“空白”调“0”,1min后开始测340nm吸光度（A340），每2min纪录吸光度一次，至10min止，比较每2minA值的变化情况，若相近则表明酶促反应平稳。以10minA值的变化（△A340）计算NADPH的产量。4.溶血液中血红蛋白含量的测定取试管一支，按下表操作：试剂体积Drabkin(mL)溶血液(mL)0.33.0混匀，室温放置15min，以Drabkin试剂调零，读取540nm的吸光度（A540）。 （三）注意事项1.洗涤红细胞时禁止剧烈震荡，避免溶血。2.测定NADPH时读取吸光度的时间要准确。 （四）结果分析1.NADPH产量的计算NADPH在340nm处，其每微摩尔的吸光系数（ε）为6.220，故10min内NADPH的产量计算公式为：NADPH产量（μmol）=2.血红蛋白含量的计算血红蛋白氧化为高铁血红蛋白以后，在540nm处，其毫摩尔吸光细数（ε）为44，故溶血液中血红蛋白的含量计算公式为：血红蛋白含量（mmol）= 3.G6PD比活性（U/gHb）的计算G6PD比活性单位（U/gHb）==【参考范围】正常值：大于2.8U/gHb 三、从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果 红细胞膜的破坏胆色素代谢异常 红细胞膜的破坏葡萄糖磷酸戊糖途径葡萄糖6–磷酸葡萄糖5–磷酸核糖NADPH+H+磷酸化5–磷酸核糖磷酸戊糖途径NADPH+H+5–磷酸核糖NADPH+H+5–磷酸核糖NADPH+H+5–磷酸核糖NADPH+H+NADPH维持GSH(谷胱甘肽）的正常含量和还原状态G6PD(6–磷酸葡萄糖脱氢酶）起关键作用 还原型谷胱甘肽体内重要的抗氧化剂保护红细胞膜蛋白的完整性红细胞膜的破坏单核吞噬细胞识别吞噬血红蛋白珠蛋白氧化破坏红细胞氧化破坏红细胞单核吞噬细胞识别吞噬氧化破坏红细胞血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬氧化破坏红细胞珠蛋白血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬氧化破坏红细胞血红素珠蛋白血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬氧化破坏红细胞 单核吞噬细胞识别吞噬血红蛋白珠蛋白氧化破坏红细胞氧化破坏红细胞单核吞噬细胞识别吞噬红细胞血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬红细胞珠蛋白血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬红细胞血红素珠蛋白血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬红细胞胆色素代谢异常血红素运送到肝与血清蛋白结合游离胆红素结合胆红素排出体外进入肠道胆素原胆素肠肝循环胆红素↑扩散进入组织组织黄染黄疸排尿呈酱油样色↑↑↑↑↑↑↑↑溶血性贫血面色苍白↑ 说明17——20为一个版本22——31为另一个版本参考一下看哪个你比较容易理解然后就用哪个 实验室检查检查项目检查值正常值红细胞1.98×1012/L4.0—5.0×1012/L血红蛋白53g/L120—160g/L血清总胆红素85.5µmol/L3.4—17.1µmol/L结合胆红素13.7µmol/L总量的20%未结合胆红素71.8µmol/L总量的80% G6PD磷酸戊糖途径NADPH磷酸戊糖维持谷胱甘肽的还原性核酸生物合成原料红细胞90%—95%糖酵解通路2.3—二磷酸甘油酸旁路5%—10%磷酸戊糖途径NADPH唯一 谷胱甘肽阻止氧化血红蛋白，从而保护红细胞膜的完整性，如若缺乏，此时的红细胞易于破裂Hb具有携氧能力MHb高铁血红蛋白Fe3+不具有携氧能力NADPH—高铁血红蛋白还原酶GSHMHbHb 胆红素铁卟啉类化合物的降解产物80%以上来自衰老红细胞破坏所释放的血红蛋白的分解自由通过生物膜产生毒性作用血红蛋白珠蛋白AA再利用血红素胆红素 胆红素分类项目游离胆红素结合胆红素别名间接胆红素血胆红素直接胆红素肝胆红素与葡萄糖醛酸结合未结合结合与重氮试剂反应慢或间接反应迅速直接反应水中溶解度小大经肾随尿排出不能能通透细胞膜对脑的毒性作用大无 G6PD缺乏NADPH严重缺乏谷胱甘肽难以保持还原状态NADPH—高铁血红蛋白还原酶活性低红细胞膜完整性破坏红细胞裂解血红蛋白大量溢出胆红素生成量增加Hb大量氧化成MHb，Hb含量减少 黄疸皮肤，巩膜及黏膜等组织黄染恶心，呕吐全身无力面色苍白 溶血性黄疸由于红细胞的大量破坏，在单核—吞噬细胞系统产生胆红素过多，超过了肝细胞的摄取，转化和排泄胆红素的能力，造成血液中未结合胆红素浓度显著增高所致。高未结合胆红素血症由于肝对胆红素的摄取，转化，排泄增多，过多的胆红素进入胆道系统，肠肝循环增多，使得尿中的尿素原和尿胆素含量增多，粪胆素与粪胆原也增加。 溶血性黄疸大量红细胞破裂血中未结合胆红素增加肠肝循环增多大量血红蛋白溢出尿蛋白（++）潜血(+)尿胆红素(－)尿胆素原(+)尿液镜下未见红细胞恶心、呕吐、面色苍白排尿呈酱油样色粪胆素原 项目检查值正常值体温38℃37.5℃脉搏150次/分80次/分呼吸40次/分20次/分血压80/60mmHg120/90mmHg红细胞大量破裂 四、要想探讨该病发生的分子基础，可以用哪些技术检测什么目的基因？（选答）基因结构分析法 我组讨论认为：要想探讨该病发生的分子基础，需要对目的基因进行基因结构分析，即DNA序列检测DNA序列测定方法直接法间接法：对于未知片段，或片段过长，用几种方法（RFLP；PCR-RFLP；SSCP）来粗略的估计待分析基因的一级结构是否与对照基因相同双脱氧末端终止法（Sanger法）化学裂解法（Maxam-Gilbert法）DNA的自动化测序DNA序列测定方法 DNA链的方向是5→3交替的磷酸基团和戊糖构成了DNA的骨架(backbone)。 （构成DNA）脱氧核糖(deoxyribose)双脱氧末端终止法（Sanger法）Sanger法是根据双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)在DNA合成过程中不能形成3’,5’-磷酸二酯键而导致链延伸终止的原理，利用四种ddNTP代替部分脱氧核苷酸（dNTP）作为底物进行DNA合成，从而获得在不同部位终止反应的大小不同的DNA链，结合高分辨率变性聚丙烯凝胶电泳分离，就可以对DNA序列进行分析。 TAATCTGCAGGC3’5’加入引物；32P-dATP,dGTP,dTTP；DNA聚合酶3’TAATCTGCAGGC5’5’3’primerddGTPddATPddTTPddCTPATTAGATTAGACGAATTAATTAGAATATTATTAGACGTATTAGACATTAGACGTCATTAGACGTCCATTAGACGTCCG ATTAGATTAGACGAATTAATTAGAATTATTAGACGTATTAGACGTCATTAGACGTCCATATTAGAC聚丙烯酰胺凝胶电泳GATCGCCTGCAGATTA3’5’ATTAGACGTCCG 五、患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？（选答）患者体型瘦小与该病症有关 蚕豆病是因为体内缺乏G6PD，G6PD主要影响体内的磷酸戊糖途径该途径主要生成两种重要的物质即5-磷酸核糖和NADPH5-磷酸核糖影响：1：核酸的合成2：体内己糖和戊糖的代谢3：3—7碳原子糖类物质的相互转化 NADPH影响：1：体内以NADPH作为供氢体合成多种活性物质如胆固醇脂肪酸和一些非必需氨基酸2：NADPH可作为羟化酶的辅酶，参与体内生物转化作用3：NADPH参与吞噬细胞的杀菌作用4：维持GSH的正常水平GSH可以保护体内蛋白质或酶免遭氧化使蛋白质或酶处于活性状态 磷酸戊糖途径中生成多余的核糖转变为6-磷酸果糖和3-磷酸甘油醛进入糖酵解途径，G6PD缺乏使得糖代谢受到影响。脂酸可以合成甘油三酯，其主要功能是储存和氧化能量，机体难以合成甘油三酯则消耗原有储备的甘油三酯，使得机体消瘦。同时体内的一些生物活性物质功能发生障碍，如胆固醇不能直接氧化但能转化为胆汁酸，类固醇激素维生素D3参与物质代谢调节，胆汁酸具有促进脂类消化和吸收的作用。维生素D3主要参与体内血钙和血磷的调节。生物转化作用可以对体内大部分非营养物质尽心代谢转化，或使有毒物质的毒性减低或消除，增强这些非营养物质的水溶性和极性，从而易于从胆汁或尿液中排除。GSH可以保护体内蛋白质或酶免遭氧化使蛋白质或酶处于活性状态，蛋白质一方面可以作为营养物质提供能量一方面又发挥着其它重要的生物功能，而酶使得生物体内的化学反应有条不紊的进行。 综上所述：蚕豆病使得该男孩体内发生糖，蛋白质，脂类物质的代谢障碍，一些重要的生物活动受到影响，加之因疾病带来的一些身体上和精神上的折磨，这些因素使得他的身体比同龄孩子削瘦。 共济失调定义：人体的正常运动是在大脑皮层运动区、前庭器官、小脑、深感觉、视觉等共同参与下完成运动的平衡和协调，称为共济运动。这种协调发生障碍，称为共济失调。临床上，根据病变部位不同，共济失调可分为小脑性、大脑性、感觉性、前庭性共济失调。 1.指鼻试验（finger-to-nosetest）：共济运动障碍者可见动作笨拙，有意向性震颤，辩距不良。2.跟-膝-胫试验：小脑性共济失调抬腿触膝时出现辩距不良和意向性震颤，下移时摇晃不稳，感觉性共济失调闭眼时难以寻到膝盖。3.快复轮替试验4.闭目难立征（Romberg）：后索病变睁眼站立较稳，闭眼时不稳；小脑病变睁眼闭眼均不稳，蚓部病变向后倾倒，小脑半球病变向病侧倾倒；前庭迷路病变患者闭眼后并不立即出现身体摇晃或倾倒，而经过一段时间后才出现身体摇晃，且摇晃程度逐渐加强，身体多向两侧倾倒。5.反跳试验共济失调查体 病因小脑本身、小脑脚的传入或传出联系纤维、红核、脑桥、或脊髓的病变均可产生小脑性共济失调。见于①遗传性；②原发性或转移性肿瘤；③血管性如梗死、出血；④炎症性如急性小脑炎、脓肿；⑤中毒如酒、食物、药物、有害气体等；⑥脱髓鞘性；⑦发育不全或不良；⑧外伤；⑨钙化；⑩畸形。小脑性共济失调 脊髓小脑束：同侧本体觉→脊神经节→后角→脊髓侧索→绳状体→小脑蚓部前庭小脑束：前庭神经→前庭神经上核、内侧核→绳状体→小脑蚓部额桥束：额上、中回→皮层下→内囊前肢→中脑大脑脚→桥脑桥臂→对侧小脑半球红核脊髓束：小脑齿状核→结合臂交叉→红核→交叉→脊髓小脑传导束 小脑病变症状和体征小脑蚓部病变：醉汉步态、直线行走不能.小脑半球病变：意向性震颤、精细动作不能、辨距不良、构音障碍、恢复动作不量、书写障碍、眼震、肌张力减低、腱反射减弱。Romberg(+):蚓部病变易前后倾倒；一侧半球或一侧前庭病变向病变侧倾倒。急性小脑性共济失调 深感觉：肌肉、肌腱、关节、韧带、骨膜→周围神经→后根→后索→薄束、楔束核→内侧丘系病因：①周围神经或神经根病；②脊髓亚急性联合变性、颅底畸形、脊髓病、肿瘤；③脑干血管性疾病如梗塞、出血，多发性硬化、肿瘤；④丘脑顶叶通路或顶叶血管性疾病、肿瘤病变特点：睁眼可代偿，闭目明显，伴关节位置觉、运动觉及振动觉消失或减退。Romberg征（+），摇晃方向不一致深感觉障碍性共济失调 解剖前庭器→前庭神经节→前庭神经→前庭神经核→丘脑→颞叶前庭神经核→绳状体→小脑蚓部（同侧）前庭神经核→内侧纵束（维持眼的姿势性偏斜与眼和头颈姿势调节）前庭神经核→脊髓（终止腰髓）前庭脊髓束前庭性共济失调 病因：前庭损害时失去身体空间定向能力，产生前庭性共济失调。见于①迷路炎、前庭神经炎、特发性双侧前庭病；②椎-基底动脉狭窄或闭塞；③天幕下肿瘤。表现：以眩晕、眼震、呕吐、前庭迷路为特征（1）站立平衡失调：Romberg征（+），闭眼后并不立即出现身体摇晃或倾倒，而是经过一段时间才出现，且摇晃程度逐渐加重。身体多向两侧倾倒。（2）步行障碍：星形足迹试验（+）（3）上肢指向偏斜前庭性共济失调 见于大脑皮层病变，尤其额叶病变。病因有：①肿瘤；②炎症；③血管病病变对侧出现共济失调类似小脑性，但较轻伴大脑病变症状，如惊厥、锥体束征、言语及行为异常大脑性共济失调 由遗传性因素所致以共济失调为主要表现的疾病。多合并脑干、脊髓、锥体外系、周围神经、视神经、听神经、癫痫、智力低下等其他异常。包括遗传代谢病伴共济失调及遗传性共济失调综合症遗传性共济失调-定义 尿素循环障碍：高氨血症有机酸代谢障碍：丙酸血症、甲基丙二酸血症氨基酸代谢异常：枫糖尿症脂质代谢异常：脂蛋白缺乏症（棘红C多、脂肪泻、色素视网膜炎、脂蛋白低）植烷酸沉积症（Refsum）：常隐遗传，植烷酸羟化酶缺乏，表现色素视网膜炎、多N病、耳聋、鱼鳞癣、心肌病、骨畸形，血植烷酸高遗传代谢病伴共济失调 1、小脑性共济失调应检查脑CT或MRI，以排除小脑肿瘤、转移瘤、结核瘤或脓肿及血管病及小脑变性及萎缩等。2、深感觉障碍性共济失调如定位病变位于周围神经应检查肌电图、体感诱发电位；如考虑在后根病变或后索病变应检查肌电图、诱发电位、病变部位的MRI，脑脊液检查，或脊髓造影检查。考虑在丘脑或顶叶时最好检查脑CT或MRI。3、大脑性共济失调应检查脑CT或MRI、脑电图等。4、前庭性共济失调可检查电测听、听觉诱发电位、前庭功能检查等。辅助检查 需找病因，控制原发感染。对症治疗：症状明显时，应绝对卧床休息，适当给予镇静剂；震颤者可用安坦；病程较长或因感染而反复发作时或有肌阵挛及眼震患儿可应用糖皮质激素。确定原发病与免疫有关时可应用免疫球蛋白；营养脑细胞药物。共济失调治疗'